Тканеинженерный имплантат для замещения дефектов гортани и/или трахеи

Полезная модель может быть использована при частичном или полном эндопротезировании гортани и/или трахеи в процессе хирургического лечения повреждений, возникающих при травмах или заболеваниях различного генеза. Тканеинженерный имплантат представляет собой трехмерную биоинженерную конструкцию, образованную наслоением культивированных клеток. Имплантат выполнен в форме двухслойной упругоэластичной пластины толщиной от 2 до 5 мм. Один из слоев имплантата сформирован из культивированных хондроцитов или мультипотентных мезенхимных стромальных клеток костного мозга или жировой ткани. Он выполняет каркасную, формообразующую, амортизационную функцию и является искусственным аналогом хрящевой ткани. Второй слой сформирован из эпителиальных клеток. Он является искусственным аналогом эпителиальной ткани, выполняет защитную функцию, а, также препятствует формированию рубцовой ткани. Прочность между компонентами конструкции осуществляется за счет межклеточных контактов и белков внеклеточного матрикса, синтезируемых клеточными компонентами конструкции. Имплантат может дополнительно содержать подложку из биосовместимого материала. Конструктивные особенности выполнения имплантата обеспечивают его наиболее благоприятное прилегание к зоне дефекта и исключают возможность травмирования прилежащих тканей. Это сокращает сроки установки и адаптации имплантата. Кроме того, конструкция имплантата создает условия для полноценного восстановления сочетанных дефектов хрящевой и эпителиальной тканей поврежденных органов верхних дыхательных путей за счет продуцирования клеточными слоями тканеинженерного имплантата компонентов внеклеточного матрикса хрящевой ткани и

Полезная модель относится к клеточной биологии и медицине, в частности, к трансплантологии и реконструктивной хирургии, и может быть использована при частичном или полном эндопротезировании гортани и/или трахеи в процессе хирургического лечения повреждений, возникающих при травмах или заболеваниях различного генеза.

На сегодняшний момент существует большое разнообразие конструкций имплантатов, которые могут быть использованы для устранения дефектов гортани и/или трахеи. Возможные виды имплантатов представляют собой искусственные протезы, полученные из природных или синтетических материалов; аллотрансплантаты, полученные от человеческих доноров; аутотрансплантаты, полученные из здоровых органов самого пациента, а также тканеинженерные имплантаты, представляющие собой, созданные in vitro, трехмерные биоинженерные конструкции и являющиеся живыми эквивалентами тканей.

Успех реконструкции повреждений органов верхний дыхательных путей в целом зависит от особенностей материала, из которого выполнены конструктивные элементы имплантата, в частности, возможности взаимодействия имплантата с клетками и тканями пациента. Однако существующие имплантаты для закрытия дефектов поврежденных тканей дыхательных путей не обладают достаточной эффективностью, так как они не позволяют восстанавливать элементы органа с использованием однородного, близкого по морфологической, анатомической и функциональной структуре материала.

Известна искусственная трахея, представляющая собой двухслойную кольцевую структуру, наружный слой которой состоит из пористого керамического материала, а внутренний слой органически связан со стороны внешнего слоя и состоит из плотного керамического материала (ЕР 0344107, A61F 2/04, опубл. 29.11.89).

В патенте US 6547825 описана искусственная трахея, состоящая из полипропиленовой сетки в качестве основного материала, с наружной стороны которой полипропиленовые волокна имеют спиральную форму, а тонкий слой аморфного коллагена формирует поверхность основного материала. Тонкий волокнистый коллагеновый слой, образован на внутренней и внешней поверхности аморфного коллагенового тонкого слоя, с помощью термического обезвоживания (US 6547825, A61F 2/04, опубл. 15.04.2003).

Известен циркулярный имплантат трахеи, состоящий из спрессованных титановых микрошариков, покрытый полимерной пленкой из полилизина или полиглутаминовой кислоты (WO 2007016961, А61К 38/34, опубл. 15.02.2007).

Известен также имплантат для замещения фрагмента гортани и/или трахеи, выполненный из силикона и кристаллического порошка гидроксиапатита, введенного в состав силикона на этапе его полимеризации в соотношении 1:3; при этом размер частиц кристаллического порошка гидроксиапатита составляет 1-2 мм при необходимости замещения фрагмента щитовидного хряща, 0,5 мм - при необходимости замещения фрагмента перстневидного хряща, 0,8-1,5 мкм - при необходимости замещения фрагмента черпаловидного хряща или хрящей трахеи (Патент РФ на полезную модель RU 100398, A61F 2/04, опубл. 20.12.2010).

Общим недостатком перечисленных способов реконструкции трахеи является использование материалов, не обладающих морфологическим сродством к восстанавливаемым структурам органа, и как следствие образованием вокруг трансплантата фиброзной и грануляционной тканей, что может привести к деформации реконструированного органа и нарушению его функции.

Другой известной группой имплантатов для замещения дефектов верхних дыхательных путей являются аутотрансплантаты, выполненные из различных тканей пациента. Например, в патенте RU 2449740 описан аутотрансплантат для замещения протяженного циркулярного дефекта трахеи, выполненный из реваскуляризируемого трубчатого кишечного фрагмента, который снаружи укреплен армирующей меандровой спиралью из сверхэластичного проволочного никелида титана с шероховатой поверхностью с продольным направлением трансляции ее волн. Диаметр витков спирали соответствует наружному диаметру трахеи (Патент РФ на изобретение RU 2449740, А61В 17/00, опубл. 10.05.2012).

В патенте RU 2445008 описан комбинированный трансплантат для замещения циркулярных дефектов трахеи, состоящий из перикардиального аутотрансплантата и сетчатой структуры из сверхэластичной никелидотитановой нити (Патент РФ на изобретение RU 2445008, А61В 17/00, опубл. 20.03.2012).

Известен имплантат для пластики трахео-пищеводного свища, выполненный в виде лоскута из кожно-фасциальной ткани на сосудистой ножке (Патент РФ на полезную модель RU 27470, А61В 17/00, опубл. 10.02.2003).

Известен также костный имплантат для пластики дефекта передней стенки трахеи с сохранением ее каркасности, выкроенный из кортикального слоя верхней трети грудины на надкостничной ножке (Патент РФ на полезную модель RU 38584, A61F 2/04, опубл. 10.07.2004).

Описанные выше аутотрансплантаты способны восстанавливать функции верхних дыхательных путей (проведение воздуха в бронхи и легкие), однако их недостатком является использование для их изготовления тканей пациента (тонкий кишечник, кожные лоскуты и др.), приводящее к формированию обширных дефектов в донорской области, ограничению использования местных тканей у онкологических пациентов прошедших лучевую терапию и многократное хирургическое лечение, увеличению длительности операций и повышению риска послеоперационных осложнений при использовании микрохирургических аутотрансплантатов. А так же увеличивает время нахождения пациента в стационаре.

Наиболее перспективным подходом при создании имплантатов для восстановления целостности органов верхних дыхательных путей является тканевая инженерия, позволяющая получать клеточные имплантаты в виде биоинженерных конструкций, представляющие собой живые эквиваленты тканей.

В патенте RU 2453291 описан биоимплантат для замещения дефектов трахеи, содержащий матрикс с хондроцитами, полученный из аллогенной донорской трахеи (Патент РФ на изобретение RU 2453291, A61F 2/04, опубл. 20.06.2012).

В международной заявке описана биоинженерная конструкция для восстановления трахеи, которая содержит коллагеновую подложку, приготовленную из тканей донора (кожа, кость, вены и т.д.) и заселенную стволовыми клетками реципиента (WO 0224244, A61L 2/00, опубл. 28.03.2002).

Известны также биоинженерные тубулярные протезы, содержащие аллогенный децеллюлированный коллагеновый матрикс из тощей кишки млекопитающих, который после трансплантации подвергается биодеградации с последующим замещением клетками реципиента (WO 9962424, A61F 2/04, опубл. 09.12.1999).

Недостатком вышеописанных биоинженерных конструкций является использование аллогенного матрикса, что ограничивается доступностью аллогенного материала и повышенными требованиями биобезопасности материала, а также отсутствием отдаленных результатов клинического применения такого матрикса для трансплантации.

Известен клеточный имплантат для восстановления дефектов дыхательных путей, содержащий пласт из клеток чешуйчатого эпителия на биополимерной подложке (WO 2008146997, A61F 2/10, опубл. 04.12.2008).

После трансплантации в область дефекта, чешуйчатый эпителий дифференцируется в реснитчатый эпителий, формирует плотные контакты с окружающими тканями и восстанавливает слизистую с нормальными внешними признаками. При этом не происходит формирование сухой корки или застоя слизи за счет движения ресничек эпителиальных клеток. Однако недостатком данного имплантата является отсутствие в его конструкции клеточных элементов, обеспечивающих реконструкцию эпителио-хрящевых дефектов, т.к. восстанавливается только эпителиальная выстилка органа.

Известна также биоинженерная конструкция для восстановления трахеи и бронхов, содержащая подложку из донорской (кадаверной) децеллюлированной трахеи, наружная поверхность которой засеяна хондроцитами, полученными из мезенхимальных стволовых клеток, а внутренняя поверхность подложки засеяна эпителиальными клетками, полученными из респираторного эпителия (Prof Paolo Macchiarini MD at al. Clinical transplantation of a tissue-engineered airway // The Lancet, V.372 (9655), 13 December 2008, pp.2023-2030).

Известная конструкция позволяет полнослойно восстанавливать дефекты тканей, однако обязательное наличие подложки из донорской кадаверной трахеи ведет к необходимости жесткого контроля биобезопасности имплантата для снижения риска заражения такими заболеваниями как гепатит, СПИД, цитомегаловирус и т.д. А также ограничение доступности кадаверных трансплантатов.

Наиболее близким аналогом предлагаемой полезной модели является биологическая конструкция (структура материала) для замещения дефектов гортани, содержащая объемную конструкцию коллагенового геля с расположенными внутри геля аллогенными клетками фибробластов и эпителиальными клетками и содержащая, по крайней мере, одну сетчатую матрицу из биосовместимого полимера, расположенную внутри геля (Патент РФ на полезную модель RU 34865, A61F 2/20, опубл. 20.12.2003).

Недостатком ближайшего аналога является восстановление только внутренней выстилки органа (слизистой оболочки). Изготовление такого имплантата является достаточно травматичным для пациента, т.к. требует забора протяженного участка кожи пациента. Кроме того, известная биологическая конструкция не дает возможности восстанавливать обширные дефекты органов верхних дыхательных путей, такие как, например, циркулярный дефект трахеи.

Таким образом, существует необходимость в получении имплантата для замещения сочетанных дефектов хрящевой и эпителиальной тканей органов верхних дыхательных путей, изготовленного из легкодоступного биобезопасного материала и способного эффективно стимулировать регенерацию всех слоев тканей и сократить сроки лечения пациентов.

В связи с этим задачей при создании полезной модели являлось получение клеточного имплантата в виде биоинженерной конструкции для хирургической пластики дефектов гортани и/или трахеи, позволяющей обеспечить полное восстановление органа при повреждениях различной конфигурации и размера за счет полнослойного замещения сочетанных дефектов хрящевой и эпителиальной тканей клеточным имплантатом и последующего стимулирования органогенеза собственных тканей, усиления пролиферации и миграции эпителиальных клеток и выполненного из легкодоступного биобезопасного материала.

Техническим результатом полезной модели является упрощение ее изготовления, повышение эффективности имплантации, сокращение сроков установки имплантата и лечения, снижение травмирования пациента за счет усовершенствования конструкции клеточного имплантата, выполненного из легкодоступного биобезопасного материала, моделируемого в соответствии с размером и объемом зоны пластики и обеспечивающего возможность полноценного восстановления сочетанных дефектов хрящевой и эпителиальной тканей поврежденных верхних дыхательных путей.

Достижение технического результата обеспечивается тем, что биоинженерная конструкция для замещения дефектов верхних дыхательных путей, в отличие от всех известных аналогов и ближайшего прототипа, выполнена в виде двухслойной упругоэластичной пластины толщиной от 2 до 5 мм, один из слоев которой сформирован из культивированных хондроцитов или мультипотентных мезенхимных стромальных клеток костного мозга или жировой ткани, а второй, жестко скрепленный с первой - из эпителиальных клеток.

Сущность полезной модели заключается в следующем:

Тканеинженерный имплантат для замещения дефектов гортани и/или трахеи представляет собой трехмерную биоинженерную конструкцию, образованную наслоением культивированных клеток. Конструктивно он выполнен в виде двухслойной упругоэластичной пластины толщиной от 2 до 5 мм, один из слоев которой сформирован из культивированных хондроцитов или мультипотентных мезенхимных стромальных клеток костного мозга или жировой ткани, а второй слой, жестко скрепленный с первым, сформирован из культивированных эпителиальных клеток.

Клеточный материал, используемый для изготовления имплантата, может быть аутологичного и/или аллогенного происхождения и подобран таким образом, что обеспечивается наилучшая эластичность и упругость имплантата: он может принимать заданный размер, форму (форму части гортани или трахеи) и обеспечивать наиболее оптимальные условия для восстановления полнослойных эпителиально-хрящевые дефектов гортани и/или трахеи.

В частных случаях выполнения имплантат для удобства фиксации и придания необходимой формы может включать подложку из биосовместимого материала (например, полимер, коллагеновый гель, коллагеновая губка или сетка из углерода, остеоматрикс, биоматрикс, металлы и их сплавы в сочетании с керамикой). Подложка предназначена для культивирования клеток, одновременно выполняет механическую и армирующую функцию тканеинженерной конструкции.

В структуру подложки могут быть дополнительно внесены матриксные белки, например, фибронектин, ламинин и другие, которые являются естественным компонентом внеклеточного матрикса in vivo. Указанные белки внеклеточного матрикса способствуют структурированию вновь синтезированного внеклеточного матрикса, синтезируемого клетками конструкции и ускорению процесса полноценного замещения утраченных тканей гортани и трахеи.

В случае закрытия дефектов тканей значительной площади или в случае наличия сопутствующего заболевания, препятствующего процессу вживления материала имплантата, в состав тканеинженерного имплантата дополнительно могут быть внесены ростовые факторы, влияющие на физиологическую активность клеток, в том числе: эпидермальный фактор роста (EGF), фактор роста фибробластов (FGF), трансформирующий фактор роста и (TGF), фактор роста тромбоцитов (PDGF), фактор роста гепатоцитов (HGF), фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), костные морфогенные белки (BMP) или их сочетания. Факторы роста добавляют в концентрациях 1-100 нг/мл.

Также в состав тканеинженерного имплантата могут быть внесены антисептики и/или антибиотики широкого спектра действия (например, гентамицин, ампициллин, пенициллин и др.) в концентрациях не токсичных для клеток., а также другие вещества, препятствующие воспалению и/или способствующие ранозаживлению (ионы серебра и др). Их включение в состав конструкции, позволяет значительно уменьшить вероятность возникновения воспалительного процесса в пораженной ткани.

Отличительной особенностью заявленной полезной модели является то, что биоинженерная конструкция выполнена в форме двухслойной упругоэластичной пластины толщиной от 2 до 5 мм из клеточных элементов без помощи чужеродного каркаса или чужеродного матрикса. При этом, один из слоев, сформированный из хондроцитов или мультипотентных мезенхимных стромальных клеток костного мозга или жировой ткани, выполняет каркасную, формообразующую, амортизационную функцию и является искусственным аналогом хрящевой ткани, а второй слой, сформированный из эпителиальных клеток, является искусственным аналогом эпителиальной ткани и выполняет защитную функцию, и кроме того, препятствует формированию рубцовой ткани. Прочность между компонентами конструкции осуществляется за счет межклеточных контактов, а также белков внеклеточного матрикса, синтезируемых клеточными компонентами конструкции.

Конструктивные особенности выполнения имплантата в виде двухслойной упругоэластичной пластины обеспечивают наиболее благоприятное прилегание имплантата к зоне дефекта трахеи и/или гортани, исключая возможность травмирования прилежащих тканей, что в свою очередь сокращает сроки установки и адаптации тканеинженерного имплантата, и, кроме того такая конструкция имплантата создает условия для полноценного восстановления сочетанных дефектов хрящевой и эпителиальной тканей поврежденных органов верхних дыхательных путей за счет продуцирования клеточными слоями тканеинженерного имплантата компонентов внеклеточного матрикса хрящевой ткани и факторов роста, стимулирующих пролиферацию и миграцию эпителиальных клеток.

Предлагаемая модель способна сохранять при имплантации жизнеспособность, заданную структуру (послойность), свойства и функции присущие каждому компоненту тканеинженерной конструкции.

Сравнение предлагаемого имплантата для замещения дефектов гортани и/или трахеи с другими конструкциями имплантатов, известными в области медицины, показало его соответствие критериям полезной модели. Все элементы заявляемого тканеинженерного имплантата являются однозначно идентифицируемыми, что позволяет сделать вывод о соответствии критерию «промышленная применимость». При анализе уровня техники заявителем не выявлены технические решения, относящиеся к тканеинженерным имплантатам для замещения дефектов гортани и/или трахеи, которым присущи все существенные признаки заявленной полезной модели, что свидетельствует о соответствии критерию «новизна».

Заявляемая полезная модель поясняется с помощью Фиг.1-6

На Фиг.1 схематически изображена конструкция тканеинженерного имплантата для замещения дефектов гортани и/или трахеи и позициями 1-2 обозначены:

1 - хрящевой слой (хондроциты, мультипотентные мезенхимные стромальные клетки костного мозга или жировой ткани)

2 - эпидермальный слой (кератиноциты)

На Фиг.2 схематически изображена конструкция тканеинженерного имплантата для замещения дефектов гортани и/или трахеи в частном случае выполнения, где позициями 1-3 обозначены:

1 - хрящевой слой (хондроциты, мультипотентные мезенхимные стромальные клетки костного мозга или жировой ткани)

2 - эпидермальный слой (кератиноциты)

3 - подложка (колагенновая или коллаген-хитозановая губка, викриловая сетка и т.п.)

На Фиг.3 представлен внешний вид тканеинженерного имплантата, макрофото.

На Фиг.4 представлен гистологический срез тканеинженерного имплантата, окраска гематоксилин-эозином. Световая микроскопия. Зрелый гиалиновый хрящ с эпителием на поверхности.

1 - хрящевой слой (зрелый гиалиновый хрящ)

2 - эпидермальный слой

На Фиг.5 показан внешний вид тканеинженерного имплантата через 5 недель после имплантации лабораторному животному (модель трахеи на кролике), макрофото.

1 - хрящевой слой

2 - эпидермальный слой

На Фиг.6 представлен гистологический срез тканеинженерного имплантата через 5 недель после имплантации лабораторному животному (модель трахеи на кролике), микрофото. Окраска гематоксилин-эозином. Световая микроскопия, монтаж нескольких полей зрения.

1 - хрящевой слой (зрелый гиалиновый хрящ)

2 - эпителиальный слой (кубический эпителий)

3 - промежуточный новообразованный in vivo слой

4 - кровеносный сосуд

5 - мышца, на которую трансплантировали тканеинженерный имплантат

Тканеинженерный имплантат для замещения дефектов гортани и/или трахеи получают следующим образом.

Первый этап приготовления имплантата включает выделение клеток предшественников хрящевой ткани из костного мозга, жировой ткани или хрящевой ткани, а также выделение эпителиальных клеток из кожи или респираторного эпителия. Затем следует этап культивирования клеток предшественников хрящевой ткани на чашках Петри заданного размера в среде, содержащей необходимые факторы хрящевой дифференцировки в течение 2-3 недель. По достижении слоя (пласта) хрящевой ткани толщины от 2 до 5 мм на его поверхность высевают эпителиальные клетки и культивируют в течение 5-10 суток. Перед трансплантацией за 3 суток полученный имплантат переводят на среду без факторов дифференцировки и сыворотки.

Продолжительность всего технологического процесса изготовления тканеинженерного имплантата для замещения дефектов гортани и/или трахеи составляет 3-6 недель.

Установка тканеинженерного имплантата осуществляется следующим образом. Производится разрез кожи в области необходимой для имплантации тканеинженерной конструкции. На подлежащие ткани (мышца, сальник, фасция и т.д.) помещается тканеинженерная конструкция, фиксируется узловыми швами к подлежащим тканям по периферии. Затем изолируется от окружающих тканей латексной пленкой путем фиксации ее к подлежащим тканям узловыми швами. Производится послойное ушивание раны. Через 5-8 недель после имплантации животному, биоинженерный трансплантат полностью сохраняет свою двухслойность, гистологическую структуру, свойства восстанавливаемых тканей (способность продуцировать вещества свойственные хрящу и эпителию) и морфологическое сходство к восстанавливаемым тканям. новокаина - 1 мл (в асептических условиях) производили прямоугольный разрез кожи внутренней поверхности ушной раковины (донорская область хрящевой ткани для выделения хондроцитов), размерами 3×3 мм, кожный лоскут отсепаровывали. Производили забор хрящевого трансплантата размерами 0,3×0,3 см с последующим ушиванием раны. Для выделения хондроцитов из донорского материала используют комбинацию механического измельчения и ферментативной дезагрегации в 0,1% растворе коллагеназы 2 типа в течение 10-16 часов при 37°С.После серии отмывок и фильтрации через нейлоновый фильтр с размером пор 70 мкм, суспензию хондроцитов переносят в культуральные флаконы в ростовой среде и культивируют в СO₂-инкубаторе при 5% CO₂, 37°C. Смену среды осуществляют каждые 2-3 суток. Пассирование клеток проводят по достижении монослоя с помощью растворов трипсина и Версена. Результат - культура аутологичных хондроцитов. Такой способ выделения и культивирования позволяет нарастить необходимую для формирования тканеинженерной конструкции клеточную массу.

Для формирования слоя хрящевой ткани мезенхимные мультипотентные стромальные клетки костного мозга или жировой ткани или хондроциты высевают непосредственно на чашки Петри необходимого размера или на подходящую подложку из расчета 100-500 тысяч клеток на 1 см² поверхности и культивируют в дифференцировочной среде без пересевов в течение 2-3 недель. Смену среды осуществляют каждые 2 суток. Результат - сформированный слой хрящевой ткани толщиной 2-5 мм.

Дополнительно на этапе высевания клеток на подложку могут быть внесены ростовые факторы и матриксные белки. Далее процесс ведут по описанной выше методике. Результат - сформированный слой хрящевой ткани тощиной 2-5 мм.

Вторым этапом: под местной анестезией 0,5% раствором новокаина - 1 мл (в асептических условиях) производили прямоугольный разрез кожи внутренней поверхности ушной раковины (донорская область кожного лоскута для выделения эпителиальных клеток), размерами 0,5×0,5 см, кожный лоскут отсепаровывали и отсекали. Производилось ушивание раны. Через 2-3 недели культивирования на сформированный слой хрящевой ткани высевают эпителиальные клетки (кератиноциты) из расчета 5-100 тысяч клеток на 1 см ² поверхности и культивируют еще в течение 3-7 суток. Результат - готовый тканеинженерный имплантат, содержащий слой вновь сформированной хрящевой ткани, на поверхности которого выращен слой эпителия (фиг.3). При гистологическом исследовании тканеинжененрного имплантата был выявлен зрелый гиалиновый хрящ, на поверхности которого эпителиальный слой (фиг.4).

Таким образом, продолжительность всего технологического процесса изготовления биотрансплантата составляет 3-6 недель.

ПРИМЕР 2. Пример использования тканеинженерного имплантата (на модели лабораторных животных, кролики)

В эксперименте использовали самцов кроликов породы шиншилла 6-8 мес, весом 4,5-5 кг. Для оценки эффективности тканеинженерного имплантата использовали традиционную модель префабрикации имплантата на мышце. Тканеинженерный имплантат трансплантировали на прямую мышцу живота кролика (передняя брюшная стенка). Под комбинированной анестезией рометар 2 мл в/в + 0,5% раствор новокаина - 5 мл п/к (в асептических условиях) производили срединный разрез кожи передней брюшной стенки размером 5 см. Кожный лоскут отсепаровывали. На фасцию прямой мышцы живота помещали тканеинженерный имплантат, фиксировали ее узловыми швами, затем изолировали латексом от окружающих тканей. Через 5 недель после префабрикации тканеинженерный имплантат оставался жизнеспособным, сохраняя заданную структуру (послойность) и форму (фиг.5). При плановом гистологическом исследовании был выявлен слой скелетных мышц, за ним в фиброзно-жировой ткани определялся зрелый гиалиновый хрящ. После слоя хряща было выявлено формирование промежуточного слоя (аналог подслизистой), на поверхности которого расположены участки эпителиального покрова, эпителий частью однорядный кубический, частью многослойный плоский с гиперкератозом (фиг.6).

1. Тканеинженерный имплантат для замещения дефектов гортани и/или трахеи, представляющий собой трехмерную биоинженерную конструкцию, образованную наслоением культивированных клеток, отличающийся тем, что выполнен в форме двухслойной упругоэластичной пластины толщиной от 2 до 5 мм, один из слоев которой сформирован из культивированных хондроцитов или мультипотентных мезенхимных стромальных клеток костного мозга или жировой ткани, а второй слой, жестко скрепленный с первым, - из эпителиальных клеток.

2. Тканеинженерный имплантат по п.1, отличающийся тем, что дополнительно содержит подложку из биосовместимого материала.