Способ определения активности протеиназ

Авторы патента:

G01N21/25 - цвет; спектральные свойства, т.е. сравнение воздействия материала на свет двух или более различных длин волн или в двух или более полосах спектра

C12Q1/38 - Способы измерения или испытания, использующие ферменты или микроорганизмы (устройства для измерения или испытания при работе с ферментами или микроорганизмами, например счетчики колоний C12M 1/34); составы для них; способы получения подобных составов

C12N9/50 - протеиназы

C11D3/386 - препараты, содержащие ферменты

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 15.III.1971 (№ 1632634/23-4) М. Кл. G 01п 31/14

С 07О 7/00 с присоединением заявки ¹

Приоритет

Гасударственный камитет

Савета Министров СССР

jlo делам изабретений и аткрытий

УДК 543.866(088.8) Опубликовано 17.IX.1973. Бюллетень № 37

Дата опубликования описания 29.1.1974

Авторы изобретения

К. А. Калунянц, P. Н. Гребешова, Л. М. Лупова и Л. Г. Федорова

Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ

СПОСОБ ОПPЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ПРОТЕИHA3 в ед/; вычисляют по формуле:

4»»+ о-1 1000

1М

Изобретение относится к способу определения активности протеиназ в составе синтетических моющих средств (СМС) и может применяться для контроля качества последних.

Известен способ определения активности протеиназ по степенен гидролиза белкового субстрата, устанавливаемой колориметрически по интенсивности окрашивания образовавшегося в гидролизате тирозина с реактивом Фолина. Гидролиз белка проводят при рН 7,5 вЂ” 7,6 и температуре 30 С, а интенсивность окрашивания тирозина определяют в интервале оптической плотности 0,2 вЂ” 0,8.

Однако этот способ не может быть применен для определения активности протеин аз в

СМС, поскольку он не учитывает специфического влияния компонентов моющих средств на свойства протеиназ.

Предлагаемый способ определения активности протеиназ состоит в том, что гидролиз белкового субстрата проводят при рН 8,5 и температуре 40 С, а оптическую плотность измеряют в интервале 0,15 вЂ” 0,35, в котором влияние компонентов моющих средств на активность протсиназ не проявляется. Величину оптической плотности измеряют ча фотоэлектроколориметре типа ФЭК-56, ФЭК-57 или ФЭК-60 с красным светофильтром (656вЂ”

677 ммк) . Протеолитическую активность где D вЂ” оптическая плотность раствора; т. вЂ” количество протеиназы в 2 мл реакционной среды,мг;

1000 вЂ” переводной коэффициент;

4,7 и 0,1 вЂ” постоянные коэффициенты для бактериальных протеиназ, входящих в состав СМС.

Пример 1. Определение активности алкалазы в составе СМС «Астра».

2,5 г СМС «Астра», содержащего в 1 вес. % алкалазы, растворяют в 100 мл жесткой воды (10 вЂ” 15 немецкой жесткости) и готовят разведение 10 мл/100 мл. К 5 мл 1%-ного раствора казеина в 0,3 М трис-буфере (рН 8,5) добавляют 2,5 мл раствора разведенного фермента. Навеска алкалазы в пробе 1 мг.

Полученную смесь сразу же гидр олизуют в ультратермостате (40 С, 60 мин), после гидролиза осаждают негпдролизованный белок, добавляя 5 мл 0,3 М раствора трихлоруксусной кислоты, фильтруют, отбирают пробы HG 2 мл, к которым добавляют по 5 мл

0,5 M раствора углекислого натрия и по 1 мл рсагента Фолпна (1: 3) . Смесь выдерживают

30 мпн в термостате при 40 С, фотоколори3о метрируют с красным светофильтром (656вЂ”

397843

Предмет изобретения

Составитель И. Черкасов

Редактор Т. Шарганова Техред Т. Курилко Корректор А. Дзесова

Заказ 50/!5 Изд. Ке 16 Тираж 755 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Я(-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

677 ммк). Оптическая плотность 0,210, вычисленная по формуле активность алкалазы

108700 ед/г ферментного препарата. Активность этого же препарата, определенная для фермента без СМС, составляет 105628 сд/г.

П р и м ер 2. Определение активности протосубтилина ГЗХ-1 в составе CMC «Астра».

2,5 г СМС «Астра», содержащего 2 все. /ю препарата протосубтилин ГЗХ-1, растворяют в 100 мл жесткой воды, готовят разведение

25 мл/100 мл и поступают, как в примере 1.

Навеска фермента в пробе 2,5 мг, оптическая плотность 0,240, активность 24550 сд/г ферментного препарата. Активность этого жс препарата, определенная для фермента без

СМС, составляет 24120 сд/г. Точность определения +.5ю/ю.

Способ определения активности прот синаз в составе синтетических моющих средств, от,гича оцийся тем, что гидролиз белкового субстрата проводят при рН 8,5 и тсмпсратурс

40 С, а образовавшийся в гидролизатс тирозин определяют колориметричсски с реактивом Фолина, измеряя оптическую плотность в интервале 0,15 вЂ” 0,35.