Тест-система для первичного скрининга антидепрессантов

 

(57) Реферат

Тест-система для первичного скрининга антидепрессантов относится к фармакологическим системам первичного скрининга. За счет того, что в стандартном 96-луночном планшете с крышкой в лунках на дне иммобилизован фермент моноаминоксидаза А, достигается малый расход компонентов и уменьшение времени подготовки анализа.

Тест-система для скрининга антидепрессантов относится к фармакологическим системам первичного скрининга.

Из патента РФ 2383615 RU известен способ скрининга фармакологических соединений на нейропротекторную активность, в соответствии с которым культивируют первичные культуры нейронов или первичных глиальных клеток, добавляют тестируемое соединение, оценивают выживаемость культивируемых нейронов или пролиферацию культивируемых глиальных клеток. Недостатком указанного способа является сложность, большие временные затраты на подготовку исследования, а также сложность процедуры анализа воздействия, так как она связана с работой за микроскопом.

Известны методы исследования и контроля фармпрепаратов на основе химических реакций чувствительной среды тест-системы и исследуемого вещества, и последующего оперативного исследования результатов реакции различными физическими методами. Например, из а.с СССР 1806351 SU известен способ определения авермектинов, включающий осуществление цветной реакции и последующий колориметрический анализ.

Наиболее близким аналогом является тест-система для иммунологического анализа по методике ELISA ["ELISA and Other Solid Phase Immunoassays, Theoretical and Practical Aspects", Editors D.M.Kemeny & S.J.Challacombe, John Wiley, 1988], в соответствии с которой реагент связывается (иммобилизуется) нерастворимой поверхностью-носителем, например, дном лунки.

Целесообразно распространить принципы тест-систем ELISA и присущую им оперативность на исследование фармакологических препаратов антидепрессантов.

Целью полезной модели является уменьшение времени подготовки скрининга фармпрепаратов антидепрессантов.

Цель достигается за счет того, что в стандартном 96-луночном планшете с крышкой в лунках на дне иммобилизован фермент моноаминоксидаза А (МАО А), выделенный из больших полушарий головного мозга человека, в объеме от 10 до 100 мкл, поверх слоя фермента нанесен проявитель цвета в объеме от 10 до 100 мкл, а также хромоген в объеме от 1 до 10 мкл. В результате, при введении в лунку исследуемого вещества, инкубирования в течение 30 минут и проявления, наличие эффекта ингибирования определяется на стандартном ридере для планшетов спректрометрическим методом при излучении с длиной волны 405 нм.

Техническим результатом использования полезной модели является уменьшение времени подготовки анализа, малое количество используемых компонентов, использование стандартного оборудования.

Описание рисунков

На рисунке 1 представлено схематическое изображение лунки планшета тест-системы для скрининга антидепрессантов. 1 - лунка планшета, 2 - слой иммобилизованного фермента, проявитель цвета и хромоген, 3 - исследуемое вещество, 4 - маркерный субстрат.

Осуществление полезной модели

Тест-система для скрининга антидепрессантов включает в себя стандартный 96-луночный планшет с крышкой с плоским дном, упакованный в полимерный пакет. На дне каждой лунки иммобилизован фермент моноаминоксидаза А, выделенный из больших полушарий головного мозга человека в объеме от 10 до 100 мкл, поверх слоя фермента нанесен проявитель цвета в объеме от 10 до 100 мкл, а также хромоген в объеме от 1 до 10 мкл.

Для функционирования тест-системы в каждую лунку с иммобилизованным ферментом, проявителем цвета и красителем помещается исследуемое вещество в объеме от 10 до 100 мкл, далее планшет инкубируется в термостате 10 минут при 37°С, после чего в каждую лунку добавляется маркерный субстрат, и планшет инкубируется в термостате 20 минут при 37°С. Оценка результатов происходит путем сканирования на стандартном ридере для планшетов спектрометрическим методом при 405 нм.

Результат основан на том, что наличие яркой желтой окраски свидетельствует об осуществлении реакции «фермент-субстрат». Отсутствие окраски лунок является свидетельством ингибирования реакции «фермент-субстрат». Данную зависимость можно использовать как простой диагностический маркер для предварительного скрининга лекарственных препаратов, имеющих специфическую ингибирующую активность по отношению к ферментам больших полушарий головного мозга человека, то есть антидепрессантов.

Корреляция между изменением окраски и ингибированием реакции «фермент-субстрат» позволяют предложить тест-систему для первичного скрининга антидепрессантов, основанную на визуальном контроле. Для анализа действия антидепрессантов планшет инкубировали с фармакофором и маркерным субстратом 30 минут при 37°С.

Тест-система для первичного скрининга антидепрессантов, включающая планшет с лунками, отличающаяся тем, что на дне лунок иммобилизован фермент моноаминоксидаза А, выделенный из больших полушарий головного мозга человека, в объеме от 10 до 100 мкл, поверх слоя фермента нанесен проявитель цвета в объеме от 10 до 100 мкл, а также хромоген в объеме от 1 до 10 мкл.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, а именно, к иммунологии, и может быть использовано при установлении этиологического фактора для последующей профилактики аллергических реакций, прежде всего на медикаменты

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинике при проведении цитологических исследований. Цитологические исследования мазка шейки матки являются высокоспециализированным видом лабораторного анализа. Цитологическое исследование на стекле является одним из основных методов морфологического анализа клеточного и неклеточного биологического материала. Оно состоит в качественной или количественной оценке характеристик морфологической структуры клеточных элементов в цитологическом препарате (мазке) с целью установления диагноза доброкачественной или злокачественной опухоли и неопухолевых поражений. В цитологии, как ни в одном другом виде лабораторных исследований, доминирует субъективный фактор и в то же время заключение цитолога зачастую служит основой диагноза.

Полезная модель относится к области медицины, а именно к диагностике и может быть использована для диагностики онкологических заболеваний
Наверх