Способ получения 5 -нуклеотидов
увсесОС 1
УБ
0 n e c w é — " й"й
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
ttt) 457703
Союз Советских
Социалистических
Республик
К . АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 23;02.73 (21) 1886517/23-4 (51) М. Кл. С 07d 51, 50 с присоединением заявки ¹
Государственный комитет
Совета Министров СССР по делам изобретений
pl открытий (32) Приоритет
Опубликовано 25.01.75. Бюллетень № 3
Дата опубликования описания 04.03.75 (53) УДК 547.963.32.07 (088.8) (72) Авторы изобретения
В. П. Варламов, Д. Г.-А. Вальковский, С. В. Рогожин, P. И. Татарская и Т. Н. Львова (71) Заявитель
Ордена Ленина Институт элементоорганических соединений (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 5 -НУКЛЕОТИДОВ
Изобретение относится к улучшенному способу получения соединений, которые находят применение как промежуточные вещества в синтезе различных лекарственных препаратов и витаминов.
Известен способ получения 5 -нуклеотидов путем ферментативного расщепления нуклеиновых кислот ферментом — экзонуклеазой А-5 актиномицетов.
Такой способ характеризуется неустойчивостью фермента к нагреванию и невозможность его повторного использования при проведении процесса в растворе. Это ограничивает выход 5 -нуклеотидов на единицу активности фермента. Кроме того, целевой продукт получается загрязненным и требуется дополнительная очистка.
Предлагаемый способ позволяет увеличить выход целевого продукта на единицу активности фермента за счет перевода фермента в водонерастворимое состояние. При этом фермент становится термостабильным, его можно использовать многократно.
Сущность предлагаемого способа заключается в том, что раствор нуклеиновых кислот в буфере с рН 9 подвергают ферментативному гидролизу водонерастворимым ферментом экзонуклеазой А-5 актиномицетов, ковалентно связанным с органическим или неорганическим носителем, например модифицированными хромосорбом Р, полиакриламидом или диазотированной м-аминобензилоксиметилцел5 люлозой. При этом сохраняется 30 — 90% исходной активности фермента (в зависимости от типа носителя и молекулярного веса субстрата). Так как фермент переведен в водонерастворимое состояние, то при осуществлении
10 предлагаемого способа получают 5 -нуклеотиды путем многократного использования связанного фермента в виде суспензии, во взвешенном слое, в проточной колонне в качестве насадки и т. п. В течение месяца нуклеазная
15 активность такого фермента снижается лишь на 5 — 25% .
Пример 1. Твердый носитель для газожндкостной хроматографии — хромосорб P кипятят в 0,1 — 0,2% -ном растворе у-амино20 пропилтриэтоксисилана в органическом растворителе в течение 24 час. Полученное при этом промежуточное производное обрабатывают 1 — 2%-ным водным раствором глутарового альдегида при 0 — 5 С в течение 0,5—
25 2 час и затем перемешивают с 0,1 — 2%-ным раствором фермента — экзонуклеазой актиномицетов от 4 до 24 час при 4 С. Полученный водонерастворимый ковалентно связанный с хромосорбом P фермент обладает нуклеазной
30 активностью.
457703
Составитель В, Жестков
Редактор Т. Загребельная Техред Т. Миронова Корректор Л. Орлова
Заказ 442/17 Изд. № 319 Тираж 529 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2
Ферментолиз нуклеиновых кислот. Проточную колонну, термостатированную при температуре 37 С, заполняют водонерастворимым ферментом,на носителе — хромосорбе P. Ha колонку подают 1 — 10 /о-ный раствор нуклеиновых кислот в буфере с рН 9 со скоростью
10--300 мл/час. Нуклеиновые кислоты разлагаются до 5 -нуклеотидов неизменно,в течение месяца непрерывной работы. Водонерастворимый фермент теряет при этом 10 — 15 первоначальной активности. 5 -Нуклеотиды разделяют ла ионообменной колонне, идентифицируют с помощью бумажной и тонкослойной хроматографии, а также 5 -нуклеотидазы и по
УФ-спектрам.
Предмет изобретений
Способ получения 5-нуклеотидов путем ферментативного гидролиза раствора нуклеиновых кислот в буфере с рН 9 ферментом— экзонуклеазой А-5 актиномицетов с последующим выделением целевого продукта известным способом, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта на единицу активности фермента, процесс проводят с водонерастворимым ферментом, ковалентно связанным с органическим или неорганическим носителем, например модифицированным хромосорбом Р, полиакриламидом или диазотированной м-аминобензилоксиметилцеллюлозой.
