Питательная среда для выявления вирулентных и авирулентных клеток в популяции чумного микроба

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (gg 4 С 12 1 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМ .Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ Ш, г, l (21) 4060532/28-13 (22) 07.02.86 (46) 07.05.88. Бюл,М 17 (71) Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока (72) М.П.Маевский, З.И.Васильева, Г.А.Воронова, А.С.Марамович, А.А.Мохрякова и M.Е,Верхозина (53) 576.8.093(088.8) (56) Higuchi К., Smith C..Ь. Stud.ies on the nutrition апй physiology

of Past. pestis. VX. А сц.11егепМal

platting medium for the estimation

of the mutation rate to avirulence.—

7. .Вас1ег о1,1961, 81, 4, р.605-608 ° (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЬИВЛЕНИЯ

ВИРУЛЕНТНЫХ И АВИРУЛЕНТНЫХ КЛЕТОК В

ПОПУЛЯЦИИ ЧУМНОГО МИКРОБА (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при дифференциации вирулентных и

ÄÄSUÄÄ 1393849 А1

;авирулентных культур чумного микроба °

Цель изобретения — упрощение среды с сохранением ее дифференцирующих и ростовых свойств. Среда включает следующие компоненты, г/л: агар 6,08,0; гидролизат казеина 11,0-13,0; глюкоза 1,0-2,0; лимоннокислый натрий Q;9-1,1; фосфорнокислый двузамещенный натрий 7,0-8,0; фосфорнокислый однозамещенный калий 2,3-2,7; пиросернистокислый натрий 0,4-0,7; хлористый магний 3,5-4,5; кристаллический фиолетовый 0,0015-0,0035. Навеску среды растворяют в л дистиллированной воды, нагревают до раство-. рения компонентов, кипятят и разливают в стерильные чашки Петри. Среда более стандартна, не требует добавления крови, обеспечивает хорошие ростовые и дифференцирующие свойства по тесту потребления ионов кальция.

1 табл

1393849

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть испогьэовано при дифференциации вирулентных и явирулентных культур чумного микроба.

Цель изобретения — упрощение среды с сохранением ее дифференцирующих

И POCTOBbD: СВОИСТВ

Пример I. Для приготовления

l л среды смешивают сухие компоненты,,111 г/л: агар (порошок) 6,0; гидролизат казеина 11,0; глюкоза 0;,пимоннокислый натрий 0,9„ фосфорнокислый двузамещенный натрий 7,0; фосфорнокислый однозамещенный калий 2,3; пиросерпистокислый натрий 0,4; хлористый магний 3,5; кристаллический фиолето-: выи Ор0015

Навеску среды растворяют в 1 л стерильной дистиллированной воды, 20 тщательно размен>ивяют, нагревают на медленном огне до полного расплавления, кипятят в течение 2-3 мин, разливают в стерильные флаконы, охлаждают до 45-50 С. Готовую среду раэли--25 вают в стерильные чашки Петри.

Tl р и м е р 2. Для приготовления

1 л дифференциальной среды смешивают

1 сухие компоненты, г/л: агар (порошок)

7,0; гидролизат казеиня 12,0; глю- 30 коза 1,5;,лимоннокислый натрий 1,.0", фосфорнокислый двуэамещенный натрий

7,5," фосфорнокислый одноэамещенный калий 2,5; пиросернистокислый натрий

0,55; хлористый магний 4,0; кристаллический фиолетовый — 0,0025.

Далее среду готовят в соответствии с примером 1.

Пример 3. Для приготовления

1 л среды смешивают сухие компоненты, 10 г/л: агар (порошок) 8,0; гидролиэят каэеина 13,0; глюкоза 2,0; лимоннокислый натрий 1,1; фосфорнокислый двуэамещ<енный натрий 8,01 фосфорнокислый одноэамещенный калий 2,7; пиро-gg сернистокислый натрий 0,7; хлорис...ый магний 4,5; кристаллический фиолетовый 0,0035.

Полученные нявески растворяют в

1 л стерильной дистиллировяйной во50 ды, тщательно размешивают, нагревают на медленном огне до полного расплавления, кипятят в течение 2-3 мин.

На две шашки с приготовленной средой и две с питательным ягяром

55 рН 7,2, который слу>«ит контролем,засевают односуточную ягяровую культуру возбудителя чумы в дозе 200 микробов, Колонии перв<>го порядка подсчитывао ют через 42-48 ч инкубапии при 37 С, колонии второго порядка — через 2024 ч дополнительной инкубации при той же температуре и колонии третьего порядка через 42-48 ч дополнительной о <> инкубяции при 28 С. При 37 С культивирования вырастают колонии из авирулентных клеток, т.е. кальцийнезависи" мые, при 28 С вЂ” вирулентные клетки, зависимые от ионов кальция.

При изучении клеточного состава различных штаммов по rотребности в ионах кальция на приготовленных по примерам 1-3 средах вырастает почти одинаковое количество колоний. Коле бания в числе колоний, вырастающих на этих вариантах среды, существенно не различаются, Р "- 0,01 во всех случаях (таблица).

Результаты определения клеточного состава штаммов чумного микроба по потребности в ионах кальция приведены в таблице.

Из таблицы видно, что в популяции высоковирулентных культур (И-2638.

2638/!1582, И-3610) содержится большее число кальцийзависимых клеток, т.е., колоний третьего порядка. У субкультур (2638/11317, 3160/207, 3160/

/217) параллельно снизились количество колоний третьего порядка и вирулентность этих культур для лабораторных животных. Культуры (2638/

/11 581, ?638/11316, И-2377), состоящие только иэ кальцийнезависимых клеток (колоний Х, Ij. порядка), авирулентны для белых мышей.

Использование изобретения позволяет изучить клеточный состав популяций различных штаммов чумного микроба по потребности в ионах кальция с большей достоверностью, так кнк питательная среда более стандартна по составу, не требует добавления крови.

Кроме того, среду готовят из отечественных ингредиентов, что удешевляет способ.

Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я

Питательная среда для выявления вирулентных и явирулентных клеток в популяции чумного микроба, содержащая питательную основу, источник углерода, минеральные соли, агар и дистиллированную Воду о т л и ч а»

1393849 ю щ а я с я тем, что, с целью упро- Лимоннокислый щения среды с сохранением ее диффе- натрий ренцирующих и ростовых свойств, она Хлористый магний дополнительно содержит кристалли5 Фо сфо рно кислый ческий фиолетовый, в качестве пита- двузамещенный тельной основы она содержит гидро- натрий лизат казеина, в качестве источника Фосфорнокислый углерода — глюкозу и лимоннокислый однозамещенный натрий, в качестве минеральных солей- 10 калий хлористый магний, фосфорнокислый Пиросерннстокислый двузамещенный натрий, фосфорнокислый натрий однозамещенный калий и пиросернисто- Агар кислый натрий при следующем количест- Крис таллический венком соо тнон!енни компонентов, г/л: 15 фиолетовый

Гидролизат казеина 11,0-13,0

Глюкоза 1,0-2е0 . Дистиллированная вода

0,9-1,1

3,5-4,5

7,0-8,0

2,3-2,7

0,4-0,7

6, 0-8,0

О, 0015-0,0035

1 л, Число выросших колоний

Степень лд,. для б елык вше. A

Несто

ыделеяии

Номер втамма чумяого микроб внрулент" ности редлагаемая среда, содеркащая количество компонентов реда Хнучн-Смит втемма среднее аксимально ииимальиое

Са микробиых

Са Са а Са клеткак

171 9 167 12 164 32 Высокавнрулентный

Тувинский 5 169 природный очаг

И2638

36 118

164 25

38 117 Эб 121 34 107 100

То ке

2638/11582

2638/113!7 то ве и

157 28 155 29 117 39 501

Внрулентный

2638/11581 - 159

Аенрулентный

Авнрулент141!

179

170 и 173

То ке

175 E

159

168

2638/11316

И 2377

771 ч н

Горно»Мтай- 175 ский природный очаг

173 63 Вьсаковирулент. ный

177 11 181 8

9 179

Я-3160

To we

121 63, 1 ° !О

13 45 IЭ5 37

Внрулентный

41 а И

39 137

3160/207

96 84 т

77 1-10 Слабовнрупентпый и

8Q 99 ВЭ 71

3160/217

М ь и и е ч а и и е, калъдийневавнсимые !Се ) - авирулентные клетки; хальднйаависнмые (Са ) - .внрулентные клетки.

В 50Х случаяк на среде Янгучн-смита отмечали рост постороннее микрофлорые

ВНИИПИ Заказ 1941 27 Тираж 520 Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, r. Ужгород, ул. Проектная,