Комбинированная питательная среда для дифференциации mycobacterium tuberculosis и mycobacterium bovis
Использование: медицинская микробиология, питательная среда для дифференциации микобактерий. Сущность изобретения: для дифференциации микобактерий комбинированная питательная среда содержит железоаммиачные квасцы, магний сернокислый, натрий лимоннокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый однозамещенный, глутаминовую кислоту, глицерин, азотнокислый натрий, ТСХ (2-тиофен-карбоксил-гидразид) и дистиллированнную воду. Причем ТСХ (2-тиофен-карбоксил-гидразид) и азотнокислый натрий добавляют перед свертыванием. 1 з.п. ф-лы, 1 табл.
Изобретение относится к области медицинской микробиологии. Может быть использовано в лабораториях противотуберкулезных учреждений, а также ветеринарии.
Для отличия M.tuberculosis от M.bovis и от других микобактерий применяют ниациновый тест с цианистыми солями, требующий специального оснащения для работы с ядовитыми соединениями. Кроме того, ниациновую пробу проводят с культурой, выращенной на плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена без малахитовой зелени, т. е. требуется приготовление дополнительно модифицированной среды Левенштейна-Йенсена. Селективно-ингибирующая M. bovis среда с 2-тиофен-карбоксил-гидразидом (ТСХ) дифференцирует этот вид от других видов микобактерий. Для дифференциации M. tuberculosis и M.bovis пользуются также реакцией восстановления нитратов в нитриты. Реакция восстановления нитратов дает возможность дифференцировать микобактерии человеческого вида, обладающие нитратредуктазой, от микобактерий бычьего и птичьего вида и от некоторых атипичных, у которых этот фермент отсутствует. В научной и информационно-патентной литературе, а также в практике фтизиобактериологии не известен способ одновременного идентифицирования M.tuberculosis, M.bovis, а также группы атипичных микобактерий по росту на среде с ТСХ и нитратредуктазной активности. Определение микобактерий туберкулеза с использованием ниацинового теста является небезопасным методом и требует работы микробиологической лаборатории в определенном режиме. Постановка нитратредуктазной реакции в большинстве рекомендаций включает выращивание исследуемой культуры до массивного накопления, однако чтение результатов проводится через 15 16 ч. Сущность настоящего изобретения: а) создание комбинированной среды с импортным ТСХ и NaNO на основе доступных отечественных препаратов, б) исключение дополнительного этапа в определении нитратредуктазной реакции, возможность ее определения в течение 5 10 мин, в) одномоментность дифференциации М.tuberculosis и М.bovis и атипичных микобактерий, г) безопасность анализа. Решение поставленных задач обеспечивается введением в плотные среды Попеску или Левенштейна-Йенсена азотнокислого натрия и ТСХ (2-тиофен-карбоксил-гидразид) при следующем количественном соотношении компонентов, мас. железоаммиачные квасцы 0,045 0,055 магний сернокислый 0,47 0,53 натрий лимоннокислый однозамещенный или натрий гидрат 1,5-водный 0,950 1,050 калий фосфорнокислый однозамещенный 14,5 15,5 глутаминовая кислота 9,5 10,5 глицерин 19,0 21,0азотнокислый натрий 0,9 1,1
ТСХ (2-тиофен-карбоксил-гидразид) 0,1 0,5
дистиллированная вода остальное
ТСХ (2-тиофен-карбоксил-гидразид) и азотнокислый натрий добавляют перед свертыванием. Выявление нитратредуктазной активности выполняется следующим образом: 2
3 капли стандартного реактива Грисса (7,0 7,5% раствор на дистиллированной воде) закапываются на косяки с постоянной культурой. Красно-ржавое окрашивание поверхности среды и культуры считают положительной нитрат-редуктазной реакцией. При отрицательной реакции среда синеет. Как видно из компонентного состава среды Попеску и Левенштейна-Йенсена, предлагаемый субстрат состоит из доступных отечественных препаратов, среды могут быть приготовлены в любой микробиологической лаборатории. Указанная среда в лаборатории микробиологии ЦНИИТ РАМН входит в комплект сред по определению лекарственной устойчивости и для быстрой идентификации M.tuberculosis и M.bovis. Дифференцирующая способность комбинированной среды с NaNO и ТСХ отражена в таблице. Как видно из таблицы, отсутствие роста или слабый рост на комбинированной среде и отрицательная нитратредуктивная реакция характеризуют штаммы М. bovis. Рост на комбинированной среде и положительная нитратредуктазная реакция характеризуют штаммы М.tuberculosis. Отсутствие нитратредуктазной активности и рост на среде с ТСХ и с пиразинамидом характеризуют штаммы группы M.avium-intracellulare. Отмеченные различия двух видов истинных микобактерий подтверждены ростом штаммов на среде с пиразинамидом. Дифференциация проведена одновременно на одной пробирке с комбинированной средой.
Формула изобретения
Магний сернокислый 0,47 0,53
Натрий лимоннокислый однозамещенный или натрий гидрат 1,5-водный 0,950 1,050
Калий фосфорнокислый однозамещенный 14,5 15,5
Глутаминовая кислота 9,5 10,5
Глицерин 19,0 21,0
Азотнокислый натрий 0,9 1,1
ТСХ (2-тиофен-карбоксил-гидразид) 0,1 0,5
Дистиллированная вода Остальное
2. Комбинированная питательная среда по п.1, отличающаяся тем, что ТСХ (2 тиофен-карбоксил-гидразид) и азотно-кислый натрий добавляют перед свертыванием.
РИСУНКИ
Рисунок 1
Похожие патенты:
Способ моделирования лепрозной инфекции // 2102482
Изобретение относится к медицине, а именно к лепрологии, и может быть, в частности, использовано для моделирования лепрозной инфекции на лабораторных животных
Изобретение относится к медицинской и ветеринарной микробиологии и касается штамма бактерий спорообразующего микроорганизма для контроля эффективности стерилизации изделий медицинского и ветеринарного назначения термическим методом, а именно стерилизации водяным паром
Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма бактерий, используемых для биологической утилизации формальдегида, а также сопутствующих ему метанола и формиата в сточных водах химических производств (нефтехимзаводы, производства карбамидных смол, пластмасс и т.д.)
Способ индикации бактериальных антигенов // 2101356
Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для экспрессной индикации бактериальных средств при возникновении чрезвычайных ситуаций
Изобретение относится к медицинской микробиологии и иммунологии, в частности, к разработке, производству и контролю качества живых сибиреязвенных вакцин
Штамм rhodococcus species 56д, используемый для очистки воды и почвы от нефти и нефтепродуктов // 2101352
Изобретение относится к микробиологии и касается получения нового штамма бактерий, пригодного для очистки почвы, пресной и морской воды от нефти и нефтепродуктов в течение 7-14 суток, в широком диапазоне температур 12-30oC
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к биопрепаратам, предназначенным для ингибирования развития фитопатогенных микроорганизмов
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике коклюша
Способ индикации бактериальных антигенов // 2101356
Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для экспрессной индикации бактериальных средств при возникновении чрезвычайных ситуаций
Изобретение относится к медицинской микробиологии и иммунологии, в частности, к разработке, производству и контролю качества живых сибиреязвенных вакцин
Способ диагностики бактериемии // 2098486
Изобретение относится к клинической микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики бактериемии у больных с лихорадочным состоянием
Изобретение относится к биологии и медицине, может быть использовано при получении диагностических препаратов и вакцин для определения чистоты биомассы микобактерий, не растущих на питательных средах, выделенных из инфицированных тканей людей и животных, например M
Способ индикации возбудителя бруцеллеза // 2093580
Способ дифференциации резидентной и транзиторной стафилококковой микрофлоры при бактерионосительстве // 2092562
Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к способам дифференциальной диагностики микроорганизмов по их потенциальной опасности при инфекционном процессе
Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности, к способам повышения вирулентности сибиреязвенного микроба