Способ выделения бактерий семейства еnтеrовастеriасеае

 

Иэабретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для избирательного выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae из исследуемого материала. Цель изобретения - повышение селективности способа за счет избирательного подавления грамположительной микрофлоры. Способ заключается в том, что исследуемый материал высевают на плотную питательную среду, предназначенную для выравнивания искомых микроорганизмов , при зтом в-среду в процессе приготовления вносят 5,2-дихлорг 4-нитросалицш1анилид в концентрации 1-10 мкг/мл среды. Вьфащивание осуществляют в обычньк условиях. На данной среде вырастают только грамотрицательные Шкроорганизмы, которые затем идентифицируют по общеприд нятой для данных микроорганизмов схе- ® ме. (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

В у

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ /-" .

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3996597/28-13 (22) 24.12.85 (46) 07.04.88. Бюл. У 13 (72) E.Ï.Сиволодский (53) 576.8.093.)(088.8) (56) Методы общей бактериологии./

Под ред. Ф.Герхардена, М.: Мир, 1983, т. 1, с. 299.

Каталог сухих питательных сред, выпускаемых в СССР для медицинской бактериологии. — М.: ГИСК им. Л.А.Тарасевича, вып. 1-й, 1980, с. 9. (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИЙ СЕМЕЙСТВА ENTегоBACTEHIACEAE (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для избирательного выделения бактерий семейства EntегоbacÄÄSUÄÄ 1386660 A1 (51)4 С .12 Ц 1/04

teriaceae из исследуемого материала.

Цель изобретения — повьппение селективности способа sa счет избирательного подавления грамположительной микрофлоры. Способ заключается в том, что исследуемый материал высевают на плотную питательную среду, предназначенную для выращивания искомых микроорганизмов, при этом в" среду в процессе приготовления вносят 5,2-дихлор-, 4-нитросалициланилид в концентрации

1-10 мкг/мл среды. Выращивание осуществляют в обычных условиях. На данной среде вырастают только грамотрицательные микроорганизмы, которые затем идентифицируют по общепри- д нятой для данных микроорганизмов схеме.

1386660

Изобретение относится к медицинсой микробиологии и касается выделеия бактерий семейства Entего>acte9iaceae, 5

Цель изобретения — повышение селективности способа за счет избирательного подавления грамположительной микрофлоры.

Пример 1. Исследуемый матери-10 ал — взвесь фекалий засевают петлей на поверхность питательной среды— агара с зозин-метиленовым синим (Левина), содержащей 1 мкг/мл фенасала (5 2 -дихлор-4-нитросалициланилида), 15 е

0 подращивают при 37 С 24 ч, изучают выросшие колонии с последующим пересевом культур из колоний и их идентификацией. Среди выросших колоний бактерий обнаружены энтеробактерии - 20 сальмонеллы, зшерихии, энтеробактерии и не обнаружены грамположительные бактерии.

В 1 л дистиллированной воды вносят

50 г сухой среды — агара с эозин-ме- 25 тиленовым синим (Левина), кипятят до полного растворения, добавляют 1 мл ! раствора Фенасала в диметилсульфокси-. де концентрацией 1000 мкг/мл (раствор готовят путем растирания в 30 фарфоровой ступке 10 мг фенасала в

10 мл диметилсульфоксида), разливают среду в стерильные чашки Петри, высушивают с открытыми крышками. Среда прозрачна, сохраняет цвет исходной 35 среды Левина, пригодна в течение 710 сут.

Пример 2. Исследуемый материал — отделяемое инфицированной раны засевают петлей на поверхность пита- 40 тельной среды Аселя-Либермана, содержащей 5 мкг/мл фенасала (5,2 -дихлор-4-нитросалициланилида), подращивают при 37 С в течение 24 ч, изучао ют выросшие колонии с последующим 45 пересевом культур из колоний и их идентификацией. Выросшие на питательной среде вишневого цвета нероящиеся колонии цвета среды содержат бактерии Proteus mirabilis. Колоний грамположительных бактерий не обнаружено.

В 1 л дистиллированной воды вносят 35 r сухого питательного агара (производства Дагестанского НИИ питательных сред), кипятят до- растворения, добавляют 10 r лактозы, 55

0,6 г краски конго красный, 5 мл ра" створа фенасала в диметилсульфоксиде концентрацией 1000 мкг/мл, разливают в стерильные чашки Петри, подсушйвают с открытыми крышками. Среда прозрачна, сохраняет исходный вишневокрасный цвет, пригодна в течение 710 сут.

Пример 3. Исследуемый материал — мочу засевают петлей методом секторных посевов на поверхность питательного агара, содержащего

10 мкг/мл фенасала (5,2 -дихлор-4нитросалициланилида), подращивают в течение 24 ч, изучают выросшие колонии с последующим пересевом культур иэ колоний и их идентификацией, В выросших колониях обнаружены эшерихии, колоний грамположительных бактерий нет.

Сравнительное изучение селективных и дифференцирующих свойств трех сред — агара с эозин метиленовым синим (Левина), Аселя-Либермана и питательного агара, приготовленных с добавлением Фенасала (1-10 мкг/мл), но без стерилизации автоклавированием," этих же сред (без фенасала),приготовленных в соответствии с инструкцией, со стерилизацией автоклавированием (121 С, 20 мин) и беэ стирилизации автоклавированием показало, что фенасал полностью подавляет грамположительную микрофлору, содержащуюся в составе сухой основы сред и или ее компонентов (краска конго красный), а также грамположительные бактерии, вносимые при пос.еве, в то время как знтеробактерии всех видов растут в виде колоний, типичных по форме, размерам и окраске, и питательные среды не изменяют своей прозрачности и окраски. Укаэанные среды (без фенасала), приготовленные без последующей стерилизации автоклавированием, не пригодны к работе ввиду пророста спороносной грамположительной микрофлоры, содержащейся в сухой среде или ее компонентах. Эти же среды, приготовленные со стерилизацией автоклавированием, не угнетают роста грамположительных бактерий, содержащихся в посевном материале.

Чувствительность сред Левина, АселяЛибермана, питательного- агара, содержащих дополнительно 1-10 мкг/мл йенасала, равна чувствительности исходных питательных сред 10 (при посеве 0,1 мл из этого разведения исходной одномиллиардной взвеси бактерий на питательных средах предлагаемого з

4 способа вырастали 8" 10 колоний бак- Формула изобретения терий при таком же количестве колоний на этих же средах без фенасала). Способ вь еления бакте ий семейСоставитель А. Завадская

Редактор В.Петраш Техред М.Коданич Корректор А. Тяско

Заказ 1471/31 Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Таким образом, применение фенасала в составе питательных сред повышает селективность выделения эн-.еробактерий за счет избирательного подавления роста грамположительных бактерий, Дополнительным преимущестством применения фенасала является упрощение приготовления сред для выделения энтеробактерий, так как исклю. чается трудоемкая и энергоемкая стерилизация сред автоклавированием.

Ш р ства Entегоbacteriaceae путем посева исследуемых микроорганизмов на плотную питательную среду с последующим выращиванием посевов и исследованием выросших колоний, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения селективности способа за счет избирательного подавления грамположительной микрофлоры, выращивание осуществляют в присутствии 5,2"дихлор-4-нитросалициланилида в концентрации 1-10 мкг/мл питательной среды.