Питательная среда для выращивания бруцелл

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для культивирования и поддержания бруцелл в L-форме. Цель изобретения - длительное поддержание бруцелл в L-формв. Питательную среду готовят следующим образом. В 1 л подогретого бульона поочередно растворяют глутаминовую кислоту, двузамещенный фосфорно-кислый калий, лимонную кислоту, серно-кислый магний, железоаммониевый :. цитрат , глицерин. Доводят рН до 7,0-7,2, после этого добавляют агар, смесь кипятят до полного растворения агара. Перед посевом среду расплавляют.на водяной бане, остужают до . Затем в нее добавляют нормальную лошадиную сыворотку, инактивированную при 1 ч. Длительность поддержания бруцелл в L-форме 60 пассажей (срок наблюдения).2 табл. с & (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) (51) 4 С 12

° ("

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4011273/28-13 (22). 10. 12.85 (46) 30.01.88. Бюл. В 4 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней (72) M.M.Ðåìåíöoâà, P.Æ.ÈDjàíoâà и Т.АаГрушина (53) 576.8.093.1 (088.8) (56) Методические указания по профилактике и лабораторной диагностике бруцеллеза людей. М.: M3 СССР, 1980, с.53-54. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ БРУЦЕЛЛ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для культивирования и поддержания бруцелл в Ь-форме. Цель изобретения — длительное поддержание бруцелл в 1.-форме. Питательную среду готовят следующим образом. B 1 л подогретого бульона поочередно растворяют глутаминовую кислоту, двузамещенный фосфорно-кислый калий, лимонную кислоту, серно-кислый магний, железоаммониевый . цитрат, глицерин, Доводят рН до 7,0-7,2, после этого добавляют агар, смесь кипятят до полного растворения агара. Перед посевом среду расплавляют.на водяной бане, остужают до 56 С. Затем в нее добавляют нормальную лошадиную сыворотку, инактивированную при 56 С 1 ч. Длитель- д ность поддержания бруцелл в 1.-форме

60 лассакай (срок наблюдения).2 табл. Щ

1370138

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в медицине и ветеринарии для культивирования и поддержания

L-форм бруцелл.

Цель изобретения — длительное поддержание бруцелл в 1,-форме.

Приготовление среды осуществляется следующим образом.

В 1 л подогретого бульона поочередно растворяют глутаминовую кислоту, двузамещенный фосфорно-кислый калий, лимонную кислоту, серно-кислый магний, железоаммониевый цитрат, глицерин. Раствор регулируют с помощью и Na0H до рН 7,0-7,2, после этого добавляют агар, смесь доводят до кипения до полного растворения агара.

Готовую смесь разливают по 300,0 мл во флаконы, закрывают ватно-марлевыми пробирками и стерилизуют при 0,6 атмосферы 30 мин. Перед лосевом среду расплавляют на водяной бане, остужают до 56 С. Затем в нее добавляют нормальную лошадиную сыворотку,инактивированную при 56 С 1 ч. Содержимое флакона разливают либо по пробиркам, либо по чашкам Петри (в зависимости от характера работы).

Для посева используют 2-суточную культуру двух штаммов бруцелл в Еформе: 7/13 и бб. Проверку чувствительности проводят посевом на чашки

Петри суспензии обоих штаммов, содержащей 1000 м.кл. в 1 мл по 0,1мл.

Посевы инкубируют при 37 С. Учет результатов проводят через 3-4 сут подсчетом выросших колоний.

Накопление биомассы осуществляют в пробирках. Посев одной стандартной петли (2 мм в диаметре) суспензии, содержащей 1 ° 10 м. кл., проводят на косяки питательной среды. Посевы инкубируют при 37 С. Учет результатов проводят через 3 сут. Выросшую массу смывают физиологическим раствором и определяют число микробных клеток.

Проверку длительности поддержания бруцелл в 1.-форме проводят путем регулярных пересевов каждые 2 сут штаммов 7/13 и 66 60 раз.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами., Пример 1. В 1 л подогретого мясопеитонного бульона поочередно растворяют, г/л: глутаминовая кислота 3,7; двузамещенный фосфорно-кислый калий 0,5; 1,25;

Таблица 1

Количество наблюдений бруцелл Ь-формы

Питательная среда штамм штамм

50

7/13

Предлагаемая по примеру

ЬО серно-кислый магний 0,5; желеэоаммониевый цитрат 0,05; глицерин 23,6.

Устанавливают рН 7,0-7,2, добавляют

1,25 сухого питательного агара. Готовую смесь доводят до кипения, стерилизуют при О,Ь атм 30 мин. Перед посевом среду расплавляют на водяной бане, остужают до 56 С и добавляют

1О 157. нормальной лошадиной сыворотки инактивированной при 56 С 1 ч.

Пример 2. В 1 подогретого мясопептонного бульона поочередно растворяют, г/л: глутаминовая кисло16 та 5,0; двуэамещенный фосфорно-кислый калий 0,62; лимонная кислота 2,5; серно-кислый магний 0,62; глицерин

3 1,5, сухой питательный агар 13,5; железоаммониевый цитрат 0,062. Гото2О вую смесь доводят до кипения. Стерилизуют при 0,6 атм 30 мин. Перед посевом среду расплавляют на водяной бане, остужают до 56 С и добавляют

201 нормальной лошадиной сыворотки, 26 инактивированной при 56 С 1 ч.

Пример 3. В 1 л подогретого мясопептонного бульона поочередно растворяют, г/л: глутаминовая кислота 6,2; двузамещенный фосфорно-кисЗО лый калий 0,75; лимонная кислота 3 7 серно-кислый магний 0,75; железоаммониевый цитрат 0,075; глицерин 39,4.

Устанавливают рН 7,0-7,2, добавляют

20,6 сухого питательного arapa. Готовую смесь доводят до кипения, стерилиэуют при 0,6 атм 30 мин. Перед посевом среду расплавляют на водяной бане, остужают до 56 С и добавляют

207 нормальной лошадиной сыворотки.

4О Результаты проверки сроков поддержания бруцелл в 1.-форме, чувствительности и накопления биомассы приведены в табл. 1 и 2.

1370138

Продолжение табл.1

Питательная среда оличество наблюдений руцелл Ь-формы

5 тельных сред одинаковы. штамм штамм

ЬЬ 7/1Э

10

30

Известная

20

3, 7-6,2 кислота

Двузамещенный фосфорно-кислый калий

Лимонная кисЧувствитель- Эффективность (число ность (наПитательная среда

0,5-0,75 выросших ко- копление лоний) биомассы в микробных клетках) 1,25-3,7

0,5-0,75

7/13 66

7/13 66

0,05-0,075

1,25-20,0

23,6-39,4

Предлагаемая

19+4,2 24+6,2 2 10« 2 10

150-200

1 л

Составитель А.Завадская

Редактор M.Недолуженко Техред M.Дидык Корректор И,Зрдейи

Заказ 372/23

Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие. г.Ужгород, ул.Проектная,4

Из результатов, приведенных в табл. 1, видно, что сроки поддержания бруцелл в L-форме без последующей реверсии в исходную форму при использовании предлагаемой среды в

2 раза выше по сравнению с известной (60 пассажей).

Известная среда не обеспечивает поддержание L-форм бруцелл.

Т а блица 2

Известная 19+2, 8 2 1+5, 1 2 -101 2 -10"

Данные, приведенные в табл. 2 показывают, что ростовые свойства предлагаемой и известной (аналог) питаФормула и з о б р е т е и и я

Питательная среда для выращивания бруцелл, содержащая глутаминовую кислоту, двузамещенный фосфорно-кислый калий, лимонную кислоту, серно-кислый магний, железоаммониевый цитрат,агар, глицерин, симмулятор роста и мясопептоннь1й бульон, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью длительного поддержания бруцелл в L-форме, она в качестве стимулятора роста содержит нормальную лошадиную сыворотку при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Глутаминовая лота

Серно-кислый магний

Железоаммониевый цитрат

Агар

Глицерин

Нормальная лошадиная сыноротка

Мясопептонный бульон