Способ идентификации микроорганизмов рода brucella

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике бруцеллеза. Цель изобретения - повышение точности.способа. Способ заключается в том, что после выращивания исследуемой культуры отделяют биомассу , высушивают ее, экстрагируют смесью хлороформа и метанола (2:1), экстракт анализируют с помощью тонкослойной хроматографии и определяют наличие и количество фосфатидилхолина и фосфатидил-(Ы-метил)этаноламина. Наличие этих фосфолипидов в экстракте позволяет идентифицировать анализируемые бактерии как принадлежащие к .роду Brucella. 1 табл. о S (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (50 4 С 12 (} 1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ1

Н А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4126823/28-13 (22) 03.10.86 (46) 07.04.88. Бюл. 9 13 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии.и микробиологии им. почет. акад. Н. Ф. Гамалеи и Научно"исследовательский институт биомедицинской технологии (72) В. И. Куликов и Е. А.- Драновская (53) 576.8.093.1(088.8) (56) Corbel. М. I., Cill К. P. W., Thomas F. Ь. Methods for the identification of Brucella. — Ministry

of Agriculture, Fisheries and Food, London, 1983, р. 39-42.

Alton C. G., Yones L. М., Pietz D. Е. Laboratory technigues

in brucellosis in Secsud edition.

W. Н. О., Geneva, 1975.

„„SU„, 1386661 А1 (54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ РОДА BRUCELLA (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике бруцел .леза. Цель изобретения - повышение точности. способа. Способ заключается в том, что после выращивания исследуемой культуры отделяют биомассу, высушивают ее, экстрагируют смесью хлороформа и метанола (2:1), экстракт анализируют с помощью тонкослойной хроматографии и определяют наличие и количество фосфатидилхолина и фосфатидил-(N-метил) этаноламина. Наличие этих фосфолипидов в экстракте позволяет идентифицировать анализируемые бактерии как принадлежащие к .роду Brucella, 1 табл.

1386661

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается иден" тификации микроорганизмов рода Brucella, 5

Цель изобретения — повышение точности способа.

П ри м е р. Выращенные на питательной среде культуры, находящиеся в стационарной фазе роста, смывают 10 и отмывают 4-кратно центрифугирова" нием фосфатным буфером рН 7,0. К осадку клеток добавляют 5-кратный объем ацетона и оставляют на 2"3 нед.

После проверки на специфическую сте- 15 рильность клетки отделяют от ацетона центрифугированием. Полученный осадок промывают ацетоном и диэтиловым эфиром центрифугированием и окончательно высушивают в вакуум- 20 эксикаторе. Высушенные убитые микробные клетки экстрагируют .50 мл смеси хлороформа и метанола, взятых в соотношении 2;1. Полученный экст1 ракт отфильтровывают и анализируют тонкослойной хроматографией на силикагеле в системе хлороформ — метанол - вода. После хроматографии фосфолипиды обнаруживают раствором

57.-ной фосфорно-молибденовой кисло- 30 ты в этаноле.

В опытах используют следующие

l0 культур бруцелл: классические культуры В. melitensis 565, В. abortus 99, В. suis 40, В. ovis 66/6, 35

В. canis RM 6/66, В. neotomae 5K33, культура 9 513 и культуры бруцелл

У 4, 11 и 12. В качестве,гетерологичных культур используют Shigella

dysenteria АЗ, Esherichia coli 07К Н 40 и Yersinia entегоcolityca 0:9. В клетках Brucella обнаруживают кардиолипин, фосфатидилглицерин, фосфатидилэтаноламин, фосфатидил-(И-метил) этаноламин, фосфатидил-(N,N-диметил) 45 этаноламин, фосфатидилинозит, фосфатидилхолин и фосфатидилсерин.

Сходные по серологическим признакам с Brucella микроорганизмы Y. entегоcolityca 0:9, Sh. dysenteria и . 5<

Е. coli имеют другой набор фосфолипидов. Все изученные культуры Brucel"

lа имеют одинаковый качественный состав фосфолипидов. В клетках 10 культур Brucella обнаруживается фосфатидилхолин и фосфатидил-(N-метил) этаноламин, которые отсутствуют у микроорганизмов, сходных с Brucella по серологическим признакам.

В таблице приведено содержание фосфатидилхолина (ФХ) и фосфатидил"(N-метил) этаноламина (ФМЭ) в составе фосфолипидов клеток некоторых видов Вгисе11а.

Содержание, 7. от суммы фосфолипидов клеток

Клетки

ФМЭ

ФХ

Brucella

abortus 99

20,3+0,5

30,5+2,0

Brucella

avis 66/6

37,5+0,8

21,9 0,4

Brucella

canis

RM 6/66

20,4+0,4 34,5. 1,2

Как видно из таблицы, по количественному содержанию ФХ и ФМЭ клетки Brucella близки, что значительно повьппает точность способа идентификации микроорганизмов

Втисе11а.

Использование способа позволит повысить точность идентификации бактерий рода Brucella за счет того, что возможно проведение анализа содержания фосфолипидов клеток на одной культуре многократно (повышается стандартность исследования), для анализа используют собственный липидный компонент бактерий, при" чем содержание ФХ и ФМЭ можно определять количественно по содержанию фосфора с фосфолипидах.

Формула и з обретения

Способ идентификации микроорганизмов рода Brucella путем выращивания исследуемой культуры на питательной среде с последующим проведением тонкослойной хроматографии и определением продуктов метаболизма, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повьппения точности способа, полученную биомассу бактерий обрабатывают ацетоном, экстрагируют смесь хлороформа и метанола, взятых в соотношеСоставитель А. Завадская

Техред М. Ходанич Корректор Г. Решетник

Редактор В. Петраш

Заказ 1471/31 Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 з 1386661

4 нии 2:1, хроматографию проводят с -(N-метил) этаноламина устанавливают полученным экстрактом и при наличии принадлежность исследуемой культуры в нем фосфатидилхолина и фосфатидил- к роду Brucella.