Способ электрофоретического разделения лейкоцитов крови

 

Изобретение относится к способам электрофоретического разделения клеток крови. Цель изобретения - повышение числа и чистоты клеточных функций. 8 мл крови помещают в пробирку гепарином и имидазольным буферным раствором. К содержимому пробирки добавляют 0,5 мл 10%-ного раствора желатины в 5%-ном растворе сахарозы. Смесь перемешивают к отстаивают . Светлый слой плазмы отсасывают . Надосадочную жидкость смешивают с раствором сахарозы. Гемолизированные эритроциты отмывают имидазольным буферным раствором,Разведенную разделяемую смесь клеток io подают в разделительную камеру прибора снизу вверх со скоростью 15 см/мин. БСКБ

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5D 4 С О1 И 33/48, 33/49

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A ВТОРСКОМЪ(СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3669922/28-14 (22) 05. 12,83 (46) 07. 10.86. Бюл. Ф 37 (71) Донецкий медицинский институт им. А.М. Горького (72) О.В. Белоцерковская, Е.М. Витебский, М.С. Дац, А.М. Садовская, Д.В. Стефани, В.А. Дадали, Ю.М. Барац и А,А. Белоцерковский (53) 611-018.5 (088.8) (56) К, Hannig, У-F. Krusmann.

Норре-Seyler s Z. Physiol. Chem, 1968, bol 349, s. 161. (54) СПОСОБ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО РАЗДЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ (57) Изобретение относится к спосо° зЮ 1262375 А 1 бам электрофоретического разделения клеток крови. Цель изобретения — повышение числа и чистоты клеточных функций. 8 мл крови помещают в пробирку3 гепарином и имидазольным буферным раствором. K содержимому пробирки добавляют 0,5 мл t0%-ного раствора желатины в 5%-ном растворе сахарозы. Смесь перемешивают и отстаивают. Светлый слой плазмы отсасывают..Надосадочную жидкость смешивают с раствором сахарозы. Гемолизированные эритроциты отмывают имидазольным буферным раствором,Разведенную разделяемую смесь клеток подают в разделительную камеру прибора снизу вверх со скоростью 15 см/мин.

1262375

Изобретение относится к медицине, а именно к фракционированию клеток крови.

Цель изобретения — повышение числа и чистоты клеточных фракций за счет подачи разделяемой смеси клеток и рабочего раствора в разделительную камеру прибора снизу вверх и использования определенного состава рабочего раствора.

Пример 1 ° 8 мл крови, взятой иэ вены, помещают в пробирку, дно которой покрыто гепарином, разведенным.имидазольным буферным раствором, содержащим, мас.Х: имидазол

0,001; сахароза 8,3, глюкоза 0,191, дистиллированная вдда до 100. Соотношение гепарин : имидазольный буферный раствор 1:10. В пробирку добавляют 0,5 мл 10Х-ного раствора желатина в 5Х-ном растворе сахарозы.

Смесь перемешивают и отстаивают в течение 30 мин при 37 С.После ото стаивания светлый слой плазмы с лейкоцитами отсасывают, не задевая эритроцитов, в отдельную пробирку. К надосадочной жидкости добавляют ЗХный раствор сахарозы в соотношении

3: 1. Смесь перемешивают в течение

30 с . Гемолизированные эритроциты трехкратно отмывают имидазольным буферным раствором. После отмывания эритроцитов клеточную взвесь разводят этим же буфером до тех нор, пока концентрация клеток не составит

20 ° 10 в 1 мл. Разведенная таким об6 разом разделяемая смесь клеток непрерывно подается в разделительную камеру прибора для препаративного электрофореза под давлением снизу вверх при U=600 3 со скоростью протока имидазольного буферного раствора и разделяемой смеси .клеток 4 см/мин.

При этом используют прибор для электрофореза клеток, содержащий вертикальную разделительную камеру с размерами 50 10 <0,1 см, смежные с ней две электродные камеры, блок выведения, укрепленный в верхней части разделительной камеры и содержащий 105 каналов для выведения разделенных фракций. Рабочие растворы подаются в камеры при помощи генераторов пневматического давления, которые выдавливают рабочие растворы из герметичных сосудов.

Избыточное давление рабочего раствора в разделительной камере 2050 КПа, напряжение, приложенное к разделительной камере, 400-600 В.

Скорость протока рабочего раствора определяется следующим образом.

5 Герметичные сосуды с рабочими растворами имеют мерные деления ценой

100 мл. Визуально определяются изменение объема рабочего раствора в герметичном сосуде за известное время. При этом на протяжении всего времени измерения давление в указанном сосуде контролируют по образцовому манометру, отклонение первоначально установленного давления за все время измерения составляет 0,5Х.

Затем вычисляют скорость протока рабочего раствора, Измеряют температуру разделительной камеры.

Для подготовки к работе с клетками крови камеры прибора промываются

2-3 л дистиллированной воды. Затем разделительную камеру на 30 мин заполняют 2Х-ным раствором человеческого альбумина. Затем под давлением

50 КПа через разделительную камеру прокачивается такое же количество имидазольного рабочего раствора.

З0 После этого камеры заполняются рабочим раствором. Через отверстие в нижней части разделительной камеры под небольшим избыточным давлением подается разделяемая смесь. !

После отклонения в электростатическом поле лейкоциты разделяются на

35 фракций (из них лимфоциты в

25 фракциях) в соответствии со своей

gp электрофоретической подвижностью.

Пример 2. Аналогичен примеру 1. Содержание имидазола в буферном растворе 0,004 мас.X. После отклонения в электростатическом поле лейкоциты разделяются на 35 фракций.

Положительный эффект изобретения заключается в увеличении числа получаемых фракций клеток от

22 до 35.

Формула из обре тения

Способ электрофоретического разделения лейкоцитов крови, включающий стабилизацию взятой из вены крови, выделение из нее разделяемой смеси клеток и .подачу этой смеси с постоянной скоростью в вертикальную раз1262375

Составитель А. Агуреев

Техред Л.Олейник Корректор М. Самборская

Редактор О. Бугир

Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-.35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 5420/4 1

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная,4 делительную камеру, заполненную рабочим раствором, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения числа и чистоты клеточных фракций, подачу разделяемой смеси клеток и рабочего раствора осуществляют снизу вверх со скоростью 1-5 см/мин при этом рабочий раствор состоит из следующих компонентов, мас.7:

Имидазол 0,001 вЂ,00

Сахароза Не менее 8,3

Глюкоза Не менее О, 191

Дистиллированная вода До 100