Способ определения токсичности водорастворимых веществ

 

Изобретение относится к микробиологии , токсикологии и может быть использовано для биологического контроля за токсичными водорастворимыми веществами, цель изобретения - сокращение времени и упрощение способа определения токсичности за счет исключения стадии микрофотографирования . Инфузории диспергируют в культуральной среде. Регистрируют динамику изменения величин светопропускания культуры до и после экспозиции с исследуемым веществом. Рассчитывают двигательную активность инфузорий и ее изменение при воздействии i исследуемого вещества различной концентрации . 2 табл. i (О

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

„„SU„, I 25753 8 (gg 4 С 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3668753/28-14 (22) 30. 11. 83 (46) 15.09.86. Бюл. М 34 (71) Таллинский научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и гигиены (72) С.Н.Этлин (53) 576.8.093. 1(088.8) (56) Bovee Е.С. Effects of cerfain

chemical pollutants on small aguatic

animall. U.S. NTIS P.Â. rey. 1975, У 241336, ref — Chamical abstracts, 1975, v. 83, N - 127007.

:(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ

ВОДОРАСТВОРИИЫХ ВЕЩЕСТВ (57) Изобретение относится к микробиологии, токсикологии и может быть использовано для биологического контроля за токсичными водорастворимыми веществами, цель изобретения — сокра. щение времени и упрощение способа определения токсичности за счет исключения стадии микрофотографирования. Инфузории диспергируют в культуральной среде ° Регистрируют динамику изменения величин светопропускания культуры до и после экспозиции с исследуемым веществом. Рассчитываютдвигательную активность инфузорий и ее изменение при воздействии, исследуемого вещества различной концентрации. 2 табл.

1257518

Изобретение относится к микробиологии, токсикологии и может быть использовано для биологического контроля за токсичными водорастворимыми веществами. 5

Цепью изобретения является сокращение времени и упрощение способа определения токсичности за счет исключения стации микрофотографирования.

Способ заключается в определении двигательной активности инфузорий путем диспергирования их в культуральной среде и регистрации дина 4ики изменения величин светопропускания культуры до и после экспозиции с исследуемым веществом.

Пример 1. Суточную культуру инфузории Tetrahymena pyriformis, культивированную на аминопептидной среде (0,67 раствор аминопептида и

0,2% раствор дрожжевого экстракта) при 27 С и содержащую в 1 мл 40-60 тыс, особей, помещают в кювету с расстоя" нием между рабочими гранями 20 мм.

Кювету устанавливают в правый кюветодержатепь калориметра-нефелометра ФЭК-56 М. В качестве источника света используют лампу накаливания

СЦ-98 со светофильтром, имеющим максимум пропускания при длине волны 30

l582 мм. В левый кюветодержатель устанавливают кювету с аминонептидной средой.

Инфузории перемешиванием дис-. ,пергируют в кювете (контроль} и, вращал левый барабан нефелометра, в течение 3 мин после прекращения перемешивания поддерживают стрелку измерительного прибора на "0", регистрируя каждые 10 с значения на шка- 40 ле светопропускания вращаемого бараСана, l

Резульгаты измерений в качестве контроля заносятся в таблицу (см. табл. 1).

Затем (опыт) в кювету вводят 1,2-дихпорэтан в концентрации 7,5 мг/мл (7, 5 мг/мл концентрация 1, 2-дихлорэтана, которая в течение 30 мин не приводит к гибели инфузорий). Культуру перемешивают, диспергируют и о помещают в термостат при 27 С на

30 мин, т.е. экспонируют. Затем вновь культуру перемешиванием диспергируют и проводят измерения таким 55 же образом, как и в контроле, т.е. вращая левый барабан нефелометра. Б течение 3 мин после прекращения перемешивания поддерживают стрелку измерительного прибора на "О", регистрируя каждые 10 с значения на шкале светопропускания вращаемого барабана. Результаты измерений в качестве опыта занесены в табл. 1.

Двигательная активность инфузорий определяется по сумме разниц между соседними значениями светопропускания.

Контроль;

3,0 + 1,С + 1,5 + 3,5 + 2,5 +

+ 2,5 + 2,0 + 0,5 + 1,5 + 2,0 +

+ 1,0 + 0,8 + 1,2 + 1,5 + 1,5

26,0

Опыт:

1,0 + 2,5 + 0,5 + 2,0 + 1,5 +

+ 0,5 + 0,5 + 0,5 + 0,5 + 0,5 — 10,0

Изменение двигательной активности инфузорий в результате 30-минутного ьоздействия 1 2-дихлорэтана в концентрации 7,5 мг/мл составляет

26 О 100% = 61,57

При концентрации 7,5 мг/мл 1,2-дихлорэтан дал снижение двигательной активности на 61,57., поэтому следующие исследуемые концентрации должны быть больше и меньше 7, 5 мг/мп

Измерения в контроле (до введения исследуемого вещества) и в опыте (после введения исследуемого вещества), расчет двигательной активности и ее изменения осуществляют так же, как и при исследовании концентрации 7,5 мг/мл. Исследуют концентрацию 2,5; 5,0; 11 2 и 12,5 мг/мп, Получают соответственно изменения двигательной активности на 31,1

37,9, 64,3 и 82,8% (табл. 2). Получают пять точек, по которым методом пробитанализа графическим путем находят концентрацию 1 2-дихлорэтана» вызывающую 507.-ное снижение двигательной активности инфузорий—

6,0 мг/мп.

Пример 2. Постановка опыта, измерения и расчеты проводят так же, как в примере 1, но исследуют другие вещества — диметипформамид и ацетояитрил. Результаты представлены в табл. 2. l 257518

Точность метода характеризуется коэффициентом вариации (vgSv)

12,4 + 2,2X.

Формула и з обретения

Способ определения токсичности водорастворимых веществ путем оценки их влияния на двигательную актив-. ность инфузории Tetrahymena pyriformis о т л и ч а ю щ и Й с я тем, что, с целью сокращения времени и упрощения способа, двигательную активность инфузорий определяют диспергированием их в культуральной среде и регистрацией динамики изменения величин светопропускания культуры до и после экспозиции с исследуемым веществом.

Т а блица 1

Светопропускание культуры,7

Бремя после перемешивания культуры, с до экспозиции с 1,2-дихлорэтаном в концентрации 7,5 мг/мл (контроль) 57,0

58,0

56,0

61,0

62,0

58,5

40

60,5

59 0

61,0

60,5

64,0

62,5

63,0

66,5

63,5

69,0

63,,5

71,.0

64,0

100

71,5

64,0

110

73,0

64,0

75,0

120. 130

64,5

76,0

76,8

64,5

140

65,0

78,0

150

Сопоставляя значения концентраций, вызывающих снижение двигательной активности на 50Х и учитывая, что чем ниже концентрация, приводящая к данному снижению двигательной активности, тем вещество токсичнее, находят, что изученные вещества по токсичности на основании рассматриваемо. го показателя распределяются следующим образом: наиболее токсичен 1,2- 1О

-дихлорэтан, далее следует ацетонитрил и диметилформамид.

Исследование одной концентрации изучаемого вещества проводится за

40-60 мин, в то время как аналогичс но исследование методом Bovee принятым в качестве прототипа, осуществляется за 12 ч. после 30 мин экспозиции с 1,2-дихлорэтаном в концентрации 7,5 мг/мл (опыт) 1257518

Продолжение табл.1

Светопропускание культуры,X

° л

65,0

79,5

160

65 0

81,0

170

65,0

81,0

180

Таблица 2

Степень сниКонцентрация, мг/мл

Вещество жения двигательной жение двигательной акактивности;

Х тивности, мг/мл

82,8

12,5

1,2-дихлорэтан

64,3

6,0

61,5

5 0

2,5

140,0

31,1

87,7

Диметил-формамид

70,5

114,2

86,4

63,3

50,0

34,8

28,8

14,4

14,9

Ацетонитрил

70,5

92,5

62,6

81,8

72,4

54,8

37,0

39,1

60,7

23,4

23,5

Определено графическим путем методом нробитанализа.

ВНИИПИ Заказ 4910/41 Тираж 778

Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Бремя после перемешивания культуры, с до экспозиции с .1,2-дихлорэтаном в концентраЦии 7,5 мг/мп (контроль) после 30 мин экспозиции с 1,2-дихлор- этаном в концентрации 7,5 мг/мл (опыт) й

Концентрация вызывающая

50%-ное сни