Способ диагностики невынашивания беременности

 

Изобретение относится к медицине. Цель изобретения - повышение точности способа. Из цельной крови получают взвесь мононуклеарных клеток. После второго центрифугирования этой взвеси оставшиеся лимфоциты ресуспендируют в среде 199 и подсчитывают количество клеток. Смесь клеток с папаинизированными эритроцитами барана центрифугируют и после инкубации осадок клеток ресуспендируют, наслаивают на раствор фиколл-верографина и повторно центрифугируют. Полученные эритроциты лизируют методом гипотонического шока. Затем клеточную суспензию отмывают, осадок ресуспендируют и подсчитывают концентрацию клеток. Обогащенную взвесь Тлимфоцитов смешивают с эритроцитарным диагностикумом. Взвесь после инкубации центрифугируют, добавляют к ней глютаровый альдегид и повторно инкубируют. Мазок фиксируют и окрашивают. После этого производят подсчет розеткообразуюших клеток в мазке. При снижении процента розеткообразующих клеток нкже 40% для Iтриместра беременности, ниже 30% для ю IIтриместра и ниже 15% для III тримест (Л ра диагностируют угрозу невынашивания беременности.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕПЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3801779/28-14 (22) 17.10.84 (46) 07.10.86. Бюл. № 37 (71) Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства (72) Н. Ю. Сотникова и Л. А. Бабакова (53) 615.375(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 822814, кл. А 61 В 10/00, 1982. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ HEBbIHAШИВАНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ (57) Изобретение относится к медицине.

Цель изобретения — повышение точности способа. Из цельной крови получают взвесь мононуклеарных клеток. После второго центрифугирования этой взвеси оставшиеся лимфоциты ресуспендируют в среде 199 и подсчитывают количество клеток. Смесь клеток с папаинизированными эритроцитами ба„.SU„„1261668 1 (Su 4 А 61 39 00 5 01 N 33/49 рана центрифугируют и после инкубации осадок клеток ресуспендируют, наслаивают на раствор фиколл-верографина и повторно центрифугируют. Полученные эритроциты лизируют методом гипотонического шока.

Затем клеточную суспензию отмывают, осадок ресуспендируют и подсчитывают концентрацию клеток. Обогащенную взвесь Тлимфоцитов смешивают с эритроцитарным диагностикумом. Взвесь после инкубации центрифугируют, добавляют к ней глютаровый альдегид и повторно инкубируют.

Мазок фиксируют и окрашивают. После этого производят подсчет розеткообразующих клеток в мазке. При снижении процента розеткообразующих клеток ниже 40% для

1 триместра беременности, ниже 30% для

II триместра и ниже 15% для 111 триместра диагностируют угрозу невынашивания беременности.

1261668

Формула изобретения

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для иммунологической диагностики невынашивания беременности.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет определения снижения уровня Т-лимфоцитов в крови беременных женщин, несущих, рецепторы к трофобластическому бета -гликопротеиду (ТБГ).

Способ осуществляется следующим образом.

Берут кровь из локтевой вены в пробирку, содержащую 25 ед. гепарина, 3 мл цельной крови разводят раствором Хенкса в соотношении 1:3 и осторожно наслаивают с помощью пастеровской пипетки на раствор фиколл-верографина, плотность 1,077.

После центрифугирования при 400 g в течение 40 мин в горизонтальном роторе удаляют верхний слой жидкости и осторожно переносят взвесь мононуклеарных клеток из кольца и 2 / 3 фиколл-верографина до интерфазы в отдельную пробирку. Полученные клетки дважды отмывают средой 199 путем центрифугирования в течение 10 мин при 200 g. После второго центрифугирования супернатант отбрасывают, а оставшиеся лимфоциты ресуспендируют в 1 мл среды 199 и подсчитывают количество клеток.

4 х 10 кл/мл смешивают с равным объемом 1Р/o — ной суспензии отмытых папаинизированных эритроцитов барана. Для этого

20Р/р-ную суспензию эритроцитов барана обрабатывают в течение 10 мин при 37 С папин-цистеиновой смесью (1 ч. 0,25Р/р-ного раствора папина, 1 ч. 1Р/р-ного раствора цистеина и 2 ч. среды 199).

Полученную смесь клеток с папаинизированными эритроцитами барана центрифугируют при 100 g в течение 10 мин при

37 С. После одночасовой инкубации при

+4 С осадок клеток осторожно ресуспендируют, наслаивают на охлажденный (+4 С) раствор фиколл-верографина и центрифугируют при 400 g 15 мин при +4 С. Эритроциты в полученном на дне пробирки осадке, состоящем в основном из Е-розеткообразующих лимфоцитов, лизируют методом гипотонического шока. С этой целью к осадку клеток приливают 0,9 мл дистиллированной воды, ресуспендируют в течение 10 с. после чего добавляют 0,1 мл 10-кратного раствора Хэнкса и 5 мл среды 199. Клеточную суспензию дважды отмывают в избытке среды 199, осадок ресуспендируют в 1 мл среды 199 и подсчитывают концентрацию клеток.

Параллельно готовят эритроцитарный диагностикум следующим образом: эритроциты быка инкубируют 1 ч при комнатной температуре с раствором ТБГ в концентрации 60 мкг/мл. Затем обогащенную взвесь

Т-лимфоцитов в дозе 2 х 10 кл/мл смешива5

f5

40 ют с равным количеством приготовленного описанным способом эритроцитарного диагностикума. После 10-минутной инкубации при 37 С взвесь центрифугируют 10 мин при 150 g, добавляют глютаровый альдегид в количестве 0,05 мл и инкубируют при комнатной температуре 20 мин. После лизиса эритроцитов описанным способом фиксируют мазок метанолом и окрашивают по

Романовскому, затем производят подсчет розеткообразующих клеток в мазке под световым микроскопом на 200 клеток. «Розеткой» считают лимфоцит с прикрепленными к нему 3 и более эритроцитами.

При снижении "/o розеткообразующих клеток ниже 40Р/o для I триместра беременности, ниже 30 /р для II триместра и ниже

15% для III триместра диагностируют угрозу невынашивания беременности.

Пример 1. Больная М., 19 лет 1 три. местр беременности. Содержание Т-лимфоцитов, несущих рецепторы к ТБГ, 35,8Р/р.

Женщина срочно направлена в стационар с начавшимся выкидышем.

Пример 2. Больная Ш., 18 лет. 1 триместр беременности. Содержание Т-лимфоцитов, несущих рецепторы к ТБГ, 21,3р/,. У женщины произошел выкидыш.

Пример 8. Больная Р, 18 лет. II триместр беременности. Содержание Т-лимфоцитов, несущих рецепторы к ТБГ, 19,8Р/р.

У женщины начавшийся выкидыш.

Пример 4. Больная Л., 25 лет. III триместр беременности. Содержание Т-лимфоцитов, несущих рецепторы к ТБГ, 31,2Р/р, Беременность закончилась рождением доношенного ребенка с массой 2950 г.

Пример 5. Больная Б., 24 г. III триместр беременности. Содержание T-лимфоцитов, несущих рецепторы к ТБГ,13,8 /р. Женщина направлена в стационар, прозошли преждевременные роды.

Таким образом, с помощью предлагаемого способа удается диагностировать угрозу невынашивания беременности и повысить точность диагностики до 100Р/р, что, в свою очередь, позволяет своевременно начать лечение.

Способ диагностики невынашивания беременности путем определения изменения концентрации лимфоцитов в крови беременных женщин, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют концентрацию Т-лимфоцитов, несущих рецепторы к трофобластическому бета 1- гликопротеиду, и при уменьшении ее для I триместра беременности ниже 40Р/р для II — ниже 30 /р и для III — ниже 15 /р диагностируют угрозу невынашивания беременности.