Среда для инкубации митохондрий

 

Изобретение относится к медицине . Цель изобретения - усиление активации митохондрий. В стандартную среду дпя инкубации митохондрий вносят титрованные растворы кальция, левамизола и аденазинтрифосфат, Затем регистрируют дыхание и фосфорилирование митохондрий полярографически по известной схеме. 2 табл. (Л С

СОЮЗ ССВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (191 (111 (594 GOl N 30 28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

К А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3751630/28-14 (22) 12. 04. 84 (46) 23.09. 86. Бюл. У 35 (71) Научно — исследовательский институт экспериментальной и клинической медицины Министерства здравоохранения ЛитССР и Институт биохимии АН ЛитССР (72) М.Л.Черкасская, А.А.Матулис и А.А.Ясайтис (53) 616-0.89.9 (088.8) (6) Черкасская М.Д. Влияние ацетилсалициловой кислоты на дыхание митохондрий печени крыс. — Вопросы медицинской химии, 1976, с. 22,4, 443.

Черкасская М.Д. и др. Влияние простагландина на энергетические па:раметры изолированных митохондрий печени крыс., — Вопросы медицинской химии, 1982, 3, 110-114. (54) СРЕДА ДЛЯ ИНКУБАЦИИ МИТОХОНДРИИ (57) Изобретение относится к медицине. Цель изобретения — усиление активации митохондрий. В стандартную среду для инкубации митохондрий вносят титрованные растворы кальция, левамизола и аденазинтрифосфат. Затем регистрируют дыхание и фосфорнлирование митохондрий полярографически по известной схеме. 2 табл.

1259134

Таблица I

Левамиэол (1 мМ) +

+ca f

/(50 мкмоль)+

+ АТФ (мМ), и= 10

Показатели, ммкАО/мин мг белка

Левамизол (1 мМ) + АТФ, Н= 15

Интактные

Интактные митохонд рни и= 20 митохонд рии + 1 мМ левамизола, п =15

V (скорость дыхания до добавки АДФ

11,8+0 5

20,2+l,7

13„6+О 96 14,6+1,1

Ч (скорость фосфорилируемо го дыхания) 33,7+1,8

35,8+2,7

43,6+2,4

33,6+1,8

Изобретение отно сится к медицине и может быть использовано при экспериментальном изучении энергетических процессов в клетках тканей миокарда, печени, почек и других органов с целью разработки рациональной схемы регуляции биохимических процессов в тканях.

Целью изобретения является усилие активации митохондрий за счет того, что среда в качестве стимулирующего препарата содержит левамизол, а также ионы кальция, Среда содержит стимулятор левамизол, хлористый кальций, аденозин-. триофосфат (АТФ)и воду при следующем соотношении компонентов, мас.Ж:

Левамизол 0,8-1,0

Хлористый кальций 0,03-0,05

Аденозинтрифосфат 0,8-1,О

Вода Остальное

Левамизол является g -иэомером тетрамизола -2,3,5,6-тетрагидро-6 фенилимидаэол-(1,1 — 5)тиазола, проявляет свойства антигельминтного препарата и представляет собой белый порошок, без запаха, хорошо растворяется в воде. В сочетании с другими компонентами, входящими в состав среды, левамиэол приобретает новое свойство,, благодаря которому предлагаемая композиция становится активным стимулятором функции митохондрий..

Оптимальной концентрацией левамизола является 0,6-1,0 мМ, она способна вызывать физиологически благо приятную активацию дыхания и досфори, лирование митохондрий. При концентрации левамизола выше 1 мМ снижается дыхательный контроль и коэффициент эффективности окислительного фосфорилирования АДФ/О. Используемые концентрации левамизола в предлагаемой среде не вызывают неблагоприятных !

О .изменений митохондрий типа разобщения оксилительного фосфорилирования.

Для того, чтобы усилить благоприятное действие левамизола на дыхание и фосфорилирование митохондрий

I5 используют АТФ, сопрягающее действие которого на митохондрии известно, и кальций, как модулятор ряда биологически активных веществ на митохондрии.

В отдельности ни кальций, ни АТФ в пределах минимально действующей

I мМ концентрации левамизола существенно не влияют на функцию митохондрий. Действие резко меняется при

25 включении в состав всех трех компонентов: 1 ммоль левамизола, 50 мкмоль кальция и 1 мМ АТФ.

Из табл.1 видно, что при воздейст3II вии на митохондрии всех трех компонентов значительно активируется дыхание во всех метаболических состояниях, увеличивается скорость фосфорилирования, повышается коэффициент

З АДФ/О, т.е. работа митохондрий становится физиологически более эффектив чой. з )259)34 4

t ) ——

V< (скорость .контгэлируемого дых ания ) 28,!+1,3

26 ° 5+ 1 э 5 1 7 8+ I э 2

21,7+0,9

V+ (скорость фосфорилирования, ммкАО/мин!

43,7+3,5

28,8+1,9

28,2+1,5

25,6+2,3 (скорость р аз о бщенн о го динитрофенолом дыхания) 43,2+1,5

46, 1+2, 7

5 ),6+3,9

65,1+3,4

Дыхательный контроль

1,5+0 04

),27+0,02 2,1+0,06

1,6+0,04

Коэффициент эффективности окислит. фосфорилирования (АДФ/О) 0,85+0,02 0,85+0,01 0,70+0,03

1 О+0,04

Продолжение табл.2

Содержание компонентов,мас.Ж, в составе

Компоненты! (2 3

Аденозинтрифо сфат

1,0

0,8 0,9

0сОс- ОсВода таль- таль- тальное ное ное

Т аблица 2

Компоненты

1 2

Левамизол

Хл ори стый кальций

0,03 0,04 0,05

В стандартную общепринятую среду инкубации (0,1 М сахароза, 50 мИ KCf, 1,5 MM трис -буфер, 3 мИ К)) РО, би- 30 дистиллированная вода )00 мл, рН 7,5) вносят титрованные растворы кальция, левамизола в сочетании с общепринятой физиологической концентрацией

АТФ. Далее регистрируют дыхание и фосфорилирование митохондрий полярографически по известной схеме.

Примеры составов приведены в табл.2.

Содержание компонентов, мас.Х, в составе

08091055

Формула и зо бр ет ения

Среда для инкубации митохондрий, содержащая стимулятор, соли кальция, аденоэинтрифосфат и воду, о т л и— ч а ю щ а я с я тем, что, с целью усиления активации митохондрий, среда в качестве стимулятора содержит левамиэол, а в качестве солей кальция — хлористый кальций при следующих соотношениях компонентов, мас.7:

Левамизол 0,8-1,0

Хлористый кальций 0,03-0,05

Аденозинтрифосфат 0,8-1,0

Вода Остальное