Способ идентификации -плазмид в штамме

САН ИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

ОПИ и > 787470

Союз Советских

Социалистических

Республик

Х АВТОРСХОМУ СВИЯЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено 050229 (21) 2720974/28-13 с присоединением заявки Йо (23) Приоритет (51)М. Кл З

С. 12 K 1/04

Государствеииый комитЕт

СССР по делам изобретеиий и открытий

Опубликовано 15.1280. бюллетень hi-46 (53) УДК 576.8. .093.31(088.8) Дата опубликования описания 1Ы280 (72) Авторы изобретения

A. И. Коротяев, Н. Н. Кисличкин и И. В. Домарадский (71) Заявитель

Кубанский государственный медицинский институт имени Красной Армии (54 ) R-ПЛАЗМИД В НТАИМЕ

ESCHERICHIA C0L1

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для идентификации R-плазмид, обусловливающих устойчивость к лекарственным препаратам большинства З штаммов энтеробактерий.

Известен способ идентификации

R-плазмид в штамме Escherichia coli путем внесения бульонной культуры

Escherichia coli, содержащей нссле- 1р дуемую R-плазмиду,к расплавленному и охлажденному агару с последующим контактом с лиэатом фага, инкубированием посева и учетом результата по наличию или отсутствию зон просветле- 15 ния в растущей культуре. 11.

Однако данный способ не позволяет выявлять R-плазмиды групп несовместимости inc А и inc J, Целью изобретения является выявле- 2р ние R-плазмид групп несовместимости

inc А и inc

Эта цель достигается тем, что в качестве исходной культуры используют штамм Escherichia coli M и кон» 25 тактируют с лнэатом фага Ъ .

Способ осуществляют следующим образом.

Несколько капель подрзщенной бульонной культуры Е. coli и с иссле-Зр

2 дуемой R-плазмидой добавляют к расплавленному и охлажденному до 47оС

0,7li-ному агару и смесь быстро выливают на поверхность питательного

1,5Ъ-ного arapa в чашку Петри. Как только поверхность агара подсохнет,иа нее наносят каплю лнзата фага ТЗ.После подсушивания чашки инкубируют в термостате. На чашке в месте нанесения лиэата фага, если плаэмида обусловливает чувствительность Е. co!i Н к фагу Т7,, наблюдают большую зону просветления со слабым вторичнюи роСтом культуры. Если плазмида не обусловливает чувствительность Е. celt Н к фагу Ъ,, наблюдают г месте мамесения капли лизата фага сплоевной рост культуры.

Пример 1. 0,25 мл трехчасовой бульонной культуры E. coli Н с плазмидой R 391 (группа несовместимости inc J) добавляют к 2,5 мл расплавленного и охлажденного до 46ЕС, 0,7Ъ-ного агара и смесь быстро выливают на поверхность 1,5%-ного пита,тельного агара в чашку Петри.Как толами. ко поверхность агара подсохнет.на иее наносят каплю лиэата фага То, (титр фага — 1Ф фаговых частиц в 1 мл).

После подсушивания чашки ннкубиоуют в л р с

787470

Формула изобретения

Составитель С.Малютина

Техред И. Асталош Корректор М.Демчик

Редактор Т.Кинь

Заказ 8279/26 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, _#_-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 термостате при 37оС 18 ч. На чашке в месте нанесения фаголиэата наблюдают большую зону просветления со слабым вторичным ростом культуры.

Hp и м е р 2. 0,3 мл трехчасовой бульонной культуры Е co li И с плаз - 5 дой р1А6012 (группа несовместимости

inc А) добавляют к 2,5 мл расплавленного и охлажденного до 47оС, 0,7%-ного агара и смесь быстро выливают на поверхность 1,5Ъ-ного питательного агара в чашку Петри. Как только поверхкость агара подсохнет, на нее наносят каплю лизата фага Т (титр фага — 1Ф фаговых частиц в 1 мл). После подсушивания чашки инкубируют в термостате при 37 С 16 ч. На чашке в месте 15 нанесения фаголиэата наблюдают большую зону просветления со слабым вторичным ростом культуры.

Пример 3. 0,3 мл трехчасовой .бульонной культуры Е.coli M с плазми- 2() дой L621a (группа несовместимости

inc lj) добавляют к 2,5 мл расплавленного и охлажденного до .47оС 0,7%ного агара и смесь быстро выливают на поверхность 1,5В-ного питательного

arapa в чашку Петри. Как только поверхность агара подсохнет, на.нее наносят каплю лиэата фага Т (титр фага — 10 фаговых частиц в 1 мл).

После подсушивания чашки инкубируют в термостате при 37 С 17 ч. На чашке в месте нанесения фаголиэата наблюдают сплошной рост культуры.

Предложенный способ позволяет с помощью фага Т в штамме Е. coll И идентифицировать плазмиды группы несовместимости inc А (плазмида p1A6012) и i nc J (плаэмида R 391) .

Способ идентификации R-плаэмид в штамме Escherichla со1i путем внесения бульонной культуры Escherichia со11, содержащей исследуемую R-плаэмиду, к расплавленному и охлажденному агару с последующим контактом с лизатом фага, инкубированием посева и учетом результата по наличию или отсутствию зон просветления в растущей культуре, о т л и ч а ю щ и и с. я тем, что, с целью выявления й-плазмид групп несовместимости incA u

inc J, в качестве исходной культуры используют штамм Е сЬег1сЬ а со1 M и контактируют с лизатом фага Т3.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Кудлай Д.Г. Внехромосомные факторы наследственности бактерий и их значение в инфекционной патологии.

М., "Просвещение", 1977, с.176.