Способ получения иммобилизованной на носителе нуклеиновой кислоты
(!476263!
":о!оа Советск!!»
Социалистических
Респуолик
ОП ИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. св !д-Ву— (22) Заявлено 22.06.73 (21) 1942254/23-4 (О1) Ч. 1хл. С 070 51/50 с присоединением заявки— (23) Приоритет—
Государствен!!ый комитет
Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий! 53) ДК 547.т)63.32 (088.8 !
Оп3 бликовапо 05.07.75. bio.",, :oòñ»ü .хЪ 25
1ятя опу бликОВанпя oil!le Il!1!H 1.05. О (72) Авторы изобретения
Б. М. Куриненко и Ф. Ф. Шаги-Мухаметовя (71) Заявитель
Казанский государственный университет им. В. И. Ульянова (Ленина) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИЗОВАННОЙ
НА НОСИТЕЛЕ НУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ
Изобретение относится к усовершенствоВанию способа получения иммобилпзованной на носителе нуклеиновой кислоты, который используется для получения эффективных препаратов для аффинной хроматографии.
Известны способы иммобилизации различных производных нуклеиновых кислот на носителях, используемые для аффинной хроматографии. Обычно носитель активируют бромциагном и для привязки производных нуклеиновых кислот используют различные «вставки», например этилендиамин, 3,3-дияминодипропиламг!но! руппу.
С целью увеличения эффективности иммобилизации нуклеиновых кислот предложено активацию носителя проводить цианурхлорпдом и непрореагировавшие хлоридные группы циапурхлорида,нейтрализовать диэтиламином.
B качестве «вставки» целесообразно использовать гексаметилендиамин.
Для осуществления способа к яктивированному цианурхлоридом сефадексу G-75
IIðèëèâàют раствор гексаметилендиамина и через некоторое время проводят повторную активацию циаяурхлоридом. Дважды активированный сефадекс промывают раствором ацетона, дистиллированной водой, боратным буфером и затем приливают к,нему раствор пятивной или ден;!Tóðèðoâàïèoé ДНК плп зо
РНК. Стадшо связывания нуклеиновых кис;!От проводят Ilpii тщательном перемешцв",нпн. Для нейтрализации,lellpopenII!po!3a;гшпх реакционноспособ:!ых групп цпянурхлорпда получен Il»e препараты промывают раствопом дпэтпламш!а, дпстпллцров llllloll водой и хря:-!Ят Ооычно прп 4 С.
Предложенный способ позволяет связывать кяк Осгпоцспо !ечньic, тя!, и дВ3 хцс110че»ПЬ:С !1УК;1СППOВ!>!С .ПСЛОТЫ.
Количество нуклеиновых кислот, связавц!!!хся с сефадексом с прпменеьп!ем «вставки», составляет 70 — 90",о.
Пример. К 300 .яг сефадекса С 75, яктивпрованного 200 лгг цпанурхлорпда в
5 !гл ацетона, прил.!Ва!От 10 гпл 6,. о-ного гексаметилендиамина и через 20 агин про:3одя !. повторную актпвац!!ю 100 .1гг циянурхлорпда.
Активнрованный сефадекс отмыва!от холодным ацетоном, О,! М боратным буферо»,, пстиллированной Водой гп затем добавляют к нему 5 .1гл раствора .нативной ДНК (2 лгг/л! г).
Смесь при осторожном перемешивании выдерживают 16 час при 37 С. Полученные препараты прот!ывя!От 50 я.г 1Ч раствора дпэтпламина прн 37 С для нейтряг!!!зацпп Iol!рореагировавших реакционноспособных хлоридных групп цианурхлорида, а зятем отмывают
1000 — 15000 .нл дистиллированной воды.
476263
Предмет изобретения
Составитель E. Соколова
Техред 3. Тараненко
Редактор 3. Горбунова корректор В. Гутман
Заказ 233/452 Изд. № 857 Тираж 529 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, Ж-35, Раушскаи наб., д. 4/5
Тип. Харьк. фил. пред. «Патент»
Способ получения им|мобилизованной на носителе луклеиновой кислоты путем связывания ее с предварительно активированным гидрофильным носителем с применением промежуточных реагентов с определенной длиной молекулярной цепи, выполняющих роль
«вставок», с последующим выделением целевого продукта известными приемами, отличаЮЩ ЙСЯ Teihl, HTO, C Ue.7bIO jj Be 7HWeHHH ЗффЕКтивпости иммобилизации нуклеиновых кислот, активацию яосителя проводят цианурхлоридом и нейтрализуют непрореагировавшие хлоридные группы цнанурхлорпда днэтиламином.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве «вставки» используют гексамети10 лендиамин.
