Способ получения полинуклеотидов

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ »1 46!927

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 26.07.73 (21) 1954540!23-4 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 28.02.75. Бюллетень ¹ 8

Дата опубликования описания 26.09.75 (51) М. Кл. С 070 51/50

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР ло делам изобретений и открытий (53) УДК 547.963.32 (088.8) (72) Лвторы изобретения У. Я. Микстайс и И. P. Чаксте (71) Заявитель Латвийский филиал Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института химических реактивов и особо чистых химических веществ (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИНУКЛЕОТИДОВ

О ц

INR, На — F — ОН С

ОН

0 4С 0 В

С1

Но т

Ho — Р=О!

ОН,C 0 В

Изобретение усовершенствует спосоо получения полинуклеотидов.

Известен способ получения полинуклеотидов путем химической полимеризации нуклеозидфосфатов в присутствии различных активирующих агентов, например дициклогексилкарбодиимида.

С целью обеспечения высокой полимеризационной способности и упрощения процесса предложено в качестве производных нуклеозидфосфатов использовать хлорапгидриды нуклеозидмоносфорных кислот и полимериза5 цию проводить преимущественно в присутствии оснований, например третичных аминов.

Согласно настоящему изобретению способ осуществляют по следующей схеме:

Ho — p=o

OHMIC 0 В

НО

461927

NRg в(С2нб)Ь1 ) / \

НCN О

Предмет изобретения

Составитель Е. Соколова

Техред О. Гуменюк

Редактор E. Дайн

Корректоры: Л. Денискииа и И. Позняковская

Заказ 2086/4 Изд. М 1250 Тираж 530 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 где Х обозначает хлор, водород;

Y — водород, оксигруппа;

 — гетероциклическое основание;

N — метилморфолин.

В качестве исходных веществ можно использовать как моно-, так и дихлорангидриды нуклеозидмонофосфорных кислот.

Преимущество применения хлорангидридов и в том, что они лучше растворяются в органических растворителях. В отличие от известных способов при проведении процесса с дихлорангидридами реакция не слишком чувствительна к небольшим количествам воды, так как при взаимодействии дихлорангидрида с молярным количеством воды образуется также реакционноспособный монохлорангидрид.

Третичные амины являются акцепторами выделяющегося хлористого водорода и активаторами хлора в хлорангидридах, они не вызывают побочных реакций.

Пример 1. 4,01 г (10 мм) дихлорангидрида гуанозин-5 -монофосфорной кислоты, полученного при хлорфосфорилиравании гуанозина, растворяют в 18 мл триметилфосфата. К раствору добавляют 0,018 мл (10 мм) воды и смесь перемешивают 3 час при комнатной температуре. К раствору монохлорангидрида гуанозин-5 -монофосфорной кислоты при комнатной температуре добавляют 0,5 мл триэтиламина. Через час смесь обрабатывают

50 мл эфира. Осадок растворяют в 20 мл воды и переосаждают 200 мл спирта.

Продукт исследован методами бумажной и ионообменной хроматографий и электрофореза на бумаге. Анализ данных показывает наличие полинуклеотидов различной степени полимеризации. Наличие фосфодиэфирных связей доказано также методом электрометрического титрования.

Прим ер 2. 3,62 г (10 мм) дихлорангидрида уридин-5 -монофосфорной кислоты, полученного при фосфорилировании уридина, рас5

35 творяют в 15 мл триметилфосфата, раствор охлаждают до 5 С и при этой температуре добавляют 0,5 мл пиридина, оставляют час при комнатной температуре. Смесь обрабатывают 100 мл эфира, осадок растворяют в

15 мл воды, добавляют 1 мл 2 и, раствора гидроокиси натрия и переосаждают 300 мл спирта.

Продукт исследуют, как описано в примере 1. Анализ данных показывает наличие полинуклеотидов различной степени полимеризации.

Пример 3. 3,85 r (10 мм) дихлорангидрида дезоксигуанозин-5 -монофосфорной кислоты, полученной при фосфорилировании дезоксигуанозина, растворяют в 11 мл триметилфосфата, раствор охлаждают до 10 С и прн этой температуре добавляют 0,5 мл триэтиламина. Через час смесь обрабатывают 100 мл эфира. Осадок растворяют в 10 мл воды и переосаждают 300 мл спирта.

Продукт исследован, как описано в примере 1. Анализ данных показывает наличие полинуклеотидов различной степени полимеризации.

Пример 4. 3,67 г (10 мм) монохлорангидрида дезоксигуанозин-5 -монофосфорной кислоты растворяют в 11 мл триметилфосфата, раствор охлаждают до 10 С мл эфира. Осадок растворяют в 10 мл воды и обрабатывают 100 мл эфира. Осадок растворяют в 10 мл воды и переосаждают 300 мл спирта.

Продукт исследован как описано в примере

1. Анализ данных показывает наличие полинуклеотидов различной степени полимеризации.

1. Способ получения полинуклеотидов путем химической полимеризации производных нуклеозидфосфатов, отличающийся тем, что, с целью обеспечения высокой полимеризационной способности и упрощения процесса, в качестве производных пуклеозидфосфатов применяют хлорангидриды нуклеозидмонофосфорных кислот.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что полимеризацию проводят в присутствии оснований, например третичных аминов.