Патент ссср 380326
О п И С А Н И Е »>389326
ИЗОБРЕТЕН Ия
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства— (22) Заявлено 28.05.71 (21) 1682201/31-16 с присоединением заявки №вЂ” (32) Приоритет—
Опубликовано 25.04.74. Бюллетень № 15
Дата опубликования описания 08.01.75 (53) М. Кл. А 61k 23/00
Государственный комитет
Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 615 371 (088.8) (72) Автор из об р етен ия
M, E. Липкин (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ХОЛЕРНОГО АНТИГЕНА
Изобретение относится к области медицины — иммунологии.
Известен способ приготовления гретой противохолерной вакцины путем выращивания холерных вибрионов на казеиновом агаре, суспензировании их в сахарозо->келатиновой среде с последующим прогреванием в течение 1 час при 54 — 56 С и добавлением
0,25",>-ной карболовой кислоты в качестве консерванта.
Однако имеющиеся холерные вакцины эффективны только частично.
Цель изооретения — получение высокоиммуногенного растворимого холерного антигена.
Цель достигается тем, что холерные вибрионы выращивают»а целлофановых пластинках на щелочном мясопептонном агаре, выросшую культуру смывают, центрифугируют, надосадочную жидкость стерилизуют фильтрацией, фильтрат фракционируют, отбирают фракцию с наибольшим содер>канием вещества,и фильтруют.
Пример. В качестве питательной среды применяют 2% -ный мясопептонный агар, приготовленный из мясного гидролизата Хоттингера. Содер>кание аминного азота в средах колеблется от 180 до 200 лг, пептона 0,5%, хлористого натрия 0,5%, двухзамещенного фосфорнокислого натрия 0,1%, рН 7,9 — 8,0.
В чашках Петри на слой застывшего агара помещают стерильные целлофановые пластинки (из пищевого целлофана), «а которые шпателем высевают 20-часовую культуру холерного вибриона, предварительно выращенного на щелочном агаре. Через 24 час инкубации в термостате при 37 С выросший газон с каждой чашки смывают 2,5 л.г физиологического раствора и взвесь собирают в пробирки. После центрифугирования при 3000 ool>яин в течение 30 >иин надосадочную жидкость отсасывают в стерильные флаконы, а затем фильтруют через асбестовые фильтры в стерильные колбы Бунзена. Профильтрованную жидкость стерильно извлекают, проверяют на полноту стерилизации и хранят при 4 С.
Полученная жидкость и является цельным растворимым антигеном, который содержит в
1 лл> оелка 1,25 лг, полнсахаридов 0,0525 >яг, SH-групп 3.25 икг.
Отдельные фракц|ш получают при фракционировании электрофорезом цельного растворимого антигена при напряжении 300 в, силе тока 20 — 25 яа и использовании мсдинал-вероналового буфера с рН 8,6 ионной спло, 0,2.
Подачу цельного растворимого ",нтигена
".а разделяющую поверхность производят не380326
Предмет изобретения
Составитель С. Щенева
Текред E. Борисова
Корректор В. Гутман
Редактор 11. Каранова
Заказ 1673/532 Изд. М 819 Тира .82 Г1одписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Тип, Харьк. фил. пред. «Патент» прерывно в теченне 1 — 2 суток по фитилю, скрученному из 12 марлевых ниток.
:При изучении титра агглютинов и преципитинов в сыворотках кроликов, иммунизированных цельным растворимым антигеном, а также отдельными фракциями, наилучшие результаты получают в опытах, где использована для вакцинации двадцатая фракция.
После стерилизации путем фильтрования двадцатой фракции через асбестовые фильтры полученный фильтрат разводят физиологическим раствором в 20 раз, проверяют на стерильность и используют для внутрикожной иммунизации людей.
Способ получения холерного антигена путем выращивания холерных вибрионов на пи5 тательной среде, отлича ощийся тем, что, с целью получения высокоиммуногенного растворимого холерного антигена, холерные вибрионы выращивают на целлофановых пластинках на щелочном мясопептонном агаре, 10 выросшую культуру смывают, центрифугируют, надосадочную жидкость стерилизуют фильтрацией, фильтрат фракционируют, отбирают фракцию с наибольшим содержанием вещества и фильтруют.
