Способ очистки дифтерийного токсина для реакции шикавоесоюс! ;д;^' г;.\т:;п';:о --i"^'..:л!:0'1

ОПИСАН ИЕ l72959

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства Х0

Кл. 30h, 6

Заявлено 01.1×.1963 (№ 828413/31-16) с присоединением заявки М0

Приоритет

Опубликовано 07.Ч1!.1965. Бюллетень Хю 14

Дата опубликования описания 25 Ч111.1965

Государственный комитет по делам изобретений и открытий СССР

МПК А 61k

УДК 615.372(088 8) Авторы изобретения

1О. А. Хавкин, М. А. Морозова и Н. С. Кристаллинская

Заявитель

СПОСОБ ОЧИСТКИ ДИФТЕРИИНОГО ТОКСИНА

ДЛЯ РЕАКЦИИ ШИКА

//одпиская группа Л3 189

Известны способы очистки дифтерийного токсина для реакции Шика, например, путем обработки сульфатом аммония.

Однако осаждение сульфатом аммония ввиду лабильности токсина дает непостоянные результаты и значительно снижает удельную активность токсина.

Предлагается концентрат токсина фильтровать через гель декстрана, например сефадекс типа Г-75.

Такой метод очистки исключает воздействие денатурирующих факторов на белки в процессе разделения и позволяет значительно повысить стабильность дифтерийного токсина.

Процесс очистки заключается в концентрации токсина и фильтровании через гель.

Первый этап осуществляют путем вымораживания при температуре от — 5 до — 10 С.

Концентрат, составляющий около. 20 об.0/0, помещают в стерильный целлофановый мешок и диализуют 18 — 24 час дистиллированной водой при 2 — 6 С. После диализа мешок кладут на 18 — 24 час в холодильник для криодиализа. При этом на поверхности мешка образуется ледяная корка, а внутри него — густой сиропообразный концентрат недиализуемых компонентов. Концентрат переносят в стерильную пробирку, а мешок ополаскивают стерильным боратным буферным раствором (3,56 г буры, 5,25 г борной кислоты и 6,18 г хлорида натрия разбавляют до 1 л). Общий выход токсина на стадии концентрирования составляет 70 — 80",0.

Полученный концентрат в количестве 10—

12,нл/час пропускают через хроматографическую колонку, заполненную 10 г геля декстра10 на (сефадекс Г-75) . Фильтрацию проводят порциями по 2,0 мл. Регенерируют колонку боратным буферным раствором.

При всех операциях очистки токсин необходимо оберегать от прямого воздействия света

15 и действия высокой температуры.

Очищенный дифтерийный токсин сохраняет свою активность не менее 12 месяцев.

20 Предмет изобретения

Способ очистки дифтерийного токсина для реакции Шика, отличающийся тем, что, с целью повышения его стабильности. концент25 рат токсина фильтруют через гель декстрана, например сефадекс типа Г-75.