Патент ссср 159605
№ 159605
Класс А 61k; 30h, 6
СССР
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ...Подписная группа № И9
А. А. Воробьев, А. М. Коробов, И. H. Васильев, Н. А. Калинская, Л. В. Ларионова и С. В. Чсботарева
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОЧИЩЕННЫХ И КОНЦЕНТРИРОВАННЫХ
БАКТЕРИАЛЬНЫХ АНАТОКСИНОВ
Заявлено 23 ноября 1962 г. aa ¹ 804568i81-!6 в Комитет по делам изобретений и открытий гри Совете Министров СССР
Опубликовано в «Бюллетене изобретений и товарных знаков» ¹ 1 за 196-1 г.
Изобретение относится к способам получения концентрированных и очищенных бактериальных анатоксинов, напримег столбнячного и дифтерийного, путем обработки очнгце1п1ого и концентрированного токсина дробными дозами формалина.
По предлагаемому способу, с целью стабилизации свойств антигена при очистке и уменьшения опасности работы с активным материалом, предварительно производят кратковременную (приблизительно
1 cvTI Кратковременная односуточная формалинизация культур позволяет резко снизить их токсичность (до 0,5 — 0,05% от нсходнон велнчины1 при полном сохранении антигенности препарата; в обрабатываемом материале отсутству QT сенсиби7изир ющне клеточные оелкн; эффективность последующего процесса очистки пе снижается. Д.7я очистки столбнячного токсина нз кратковременно форма7HIIHзированных культур его осаждают 1 и. соляной кислотой с добавкой 0,2% гексаметафосфата натрия (pH 3,9), осадок растворяют в фосфатI.oì буферном растворе. вновь осаждают уксусной кислотой прн рН 4 и присутствии гексаметафосфата натрия (0,2О/в) и промывают осадок ацетатным буферным раствором (pH 4), взятым в количестве 1/1;, ог объема исходной культуры. Промытый осадок обрабгтьпзают сукцш1атII0-боратным буферным раствором (рН 6,5 — 6,7), взятым в количестве ¹ 159б05 0.5 объема первичного концентрата, и фильтруют через стерилизующие пластины фильтра Зейтца. Полученный концентрат подвергают дополнительному обезвреживанию формальдегидом (0,2%) при рН 7,3 и температуре 38 С в течение 10 суток. По окончании детоксикации получают безвредные анатоксины, содержащие в среднем в 1 лл 120 EC (к ЛЕ) при удельной активности препаратов 450 EC/ë(ã общ. азота. Для получения очищенного и концентрированного дифтерийного токсина кратковременно формализированпую культуру без отделения микробных клеток и предварительной декантации охлаждают до 8 —— 10 С и при перемешивании добавляют гексаметафосфат натрия до его концентрации в растворе 1% и 1 и. соляную кислоту до рН 3,9 — 4,1. Выпавший осадок отделяют центрифугированием, суспендируют в дистиллированной воде, взятой в количестве 1/в от объема исходной культуры, вновь центрифугируют и обрабатывают боратным буферным раствором (pH 7,2 — 7,4), взятым в том же количестве. Нерастворившиеся балластные белковые вещества и микробные клетки удаляют цептрифугированием, а жидкость, имеющую характерную малиновую окраску, депигментируют активированным углем. Полученный раствор очищенного токсина подвергают стерилизующему фильтрованию через фильтр Зейтца или свечи Беркфельда Ф-5 и дообезвреживают путем инкубирогания в присутствии 0,3% формалина при температуре 40 С и рН 7,0— 7,4 в течение 14 — 18 суток. Предмет изобретения Способ получения очищенных и концентрированных бактериальных анатоксинов, например столбнячного и дифтерийно(о, путем обработки очищенного и концентрированного токсина дробными дозами формалина, отличающийся тем, что, с целью стабилизации свойств антигена при очистке и уменьшения опасности работы с активным материалом, производят предварительную кратковременную (приблизительно 1 сутки) обработку культур или нативных токсинов формалином в количестве около 0,3 — 0,7%, в зависимости от культуры, а затем очищают, концентрируют и дообезвреживают препарат известными приема ми. Составитель В. А. Таратута Редактор Ь. А. Шнейдерман Техред Т. П. Курилио Корректор Т. С. Дрож>кина Поди, к печ. 11>11 — 64 г, Форм ат бум. 70 Х 1080 >; Обьсм 0,18 изд. и. Заказ 3542>7 Тираж 400 11сна 5 и >п. Ц11ИИПИ Государственного коми > ез а пи делам из<>б>(и тсиий и о> кры гий (Х(Р М;гк»а (((-и1(и и(. (Рина, л. 4 Т>ин>г(>афин пр. (.àïè >>âà. 2
