Способ препаративного электрофореза

Авторы патента:

G01N27/26 - путем определения электрохимических параметров; путем электролиза или электрофореза (определение коррозионной стойкости G01N 17/00; путем разделения на составные части с использованием адсорбции, абсорбции или подобных процессов или с использованием ионного обмена, например хроматографии G01N 30/00; иммуноэлектрофорез G01N 33/561; электрохимические процессы и аппараты вообще B01J; стандартные элементы H01M 6/28)

260953

О П И С А Н И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социевистических

Ресвубвик

Зависимое от авт. свидетельства ¹

Кл, 42/, 3/06

Заявлено 24.1.1968 (¹ 1214438/23-26) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 06.1.1970. Бюллетень № 4

Дата опубликования описания 5Л .1970

МПК С Oln

УДК 543.545(088.8) Комитет ио девам изобретеиий и открытий ори Совете Мииистрое

СССР

Автор изобретения

В. Jl Волжин

Заявитель

СПОСОБ ПРЕППАРАТИВНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

Изобретение касается способа электрофореза (разделения веществ в электрическом поле).

Известен способ препаративного электрофореза, заключающийся в том, что препаративное выделение веществ из колонки, заполненной гелем, с электрическим полем, наложенным в осевом направлении, возможно элюированием через узкую проточную кювету, расположенную поперек колонки, При этом наблюдается малая разрешающая способность, т. е. разделение ограниченных количеств веществ (например, не более 100 иг белков).

Кроме того, применяют полупроницаемые мембраны для ограничения проточных кювет, на которых сорбируется часть разделяемых веществ.

По предлагаемому спосг,бу элюирование разделяемых компонентов ведут не в поперечном, а в осевом направлении колонки. Подача буфера, введение электрода в проточную кювету и отвод образующихся газов осуществляют с помощью осевой трубки. Для обеспечения надежного обмыва электрода, находящегося в непосредственной близости ог осевого выходного отверстия колонки предлагают прерывистый режим электрофореза. При прерывистом режиме электрофореза питание электродов осуществляют лишь в начале образования капли. Осевое элюирование и отсутствие полупроиицаемых мембран позволяет работать в более широких колонках с болыпими количествами вещества и лучшей разделяющей способностью.

Пример, Проводят разделение суммарных

5 белков фасоли сорта «Сакса», экстрагированных трис-глициновым буфером с рН 8,3.

Диаметр опытной колонки на выходе 50 мм (приборы, выполненные по способу поперечной проточной кюветы, имеют колонки диаметром

10 не более 20 лтм), в средней части колонкивЂ”

70 мха. Высота полиакриламидного геля 8 см (7 сл 7,5% гель+ 1 сл 3,5% гель) .

150 вЂ” 160 чг белка (рассчитан по азоту) наносят в смеси с линейным полимером акрила15 мида. Элюирование проводят трис-глициновым буфером, разбавленным вдвое, по сравнению с взятым для экстракции.

Около 30 час приоор работает в постоянном режиме электрофореза для разгонки белка, за20 тем еще свыше 150 час вЂ” в прерывистом режиме с элюированием. Скорость элюирования

10 вЂ” 15 мл/час. Фракции собирают коллектором ХККВ-1 по 50 капель (около 4 мл). Количество белка в пробирках определяют в 1 лл

25 по Лоури.

Соотношение активного и гассивного режимов электрофореза задают 1: 1 при времени образования капли около 40 сек.

Режим электрофореза: сила тока 20 лба, наgo пряжение 150 вЂ” 200 в, Электроды платиновые

260953

ФЛ, 25И

Составитель Ю. Ефремов

Текред Д. В. Куклина Корректор P. И. Крючкова

Редактор О. С. Филиппова

Заказ 1033, 12 Тираж 499 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Мииисчров СССР в1осква, 1К-35, Раушская иаб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

3 (анод в проточной кювете точечный вЂ” 0,3 см, катод кольцевой). Охлаждение колонки осуществляют водой со льдом. Прерывистый режим поддержива1ют автоматически через систему: реле счета капель коллектора вЂ” реле 5 времени вЂ” магнитный пускатель в цепи анода.

В результате разделения получают препаративно 23 компонента, которые идентифицируют кривой, построенной по интенсивности окраски белка по Лоури (с реактивом Фолина), 10

Кроме препаративного выделения, кривая позволила рассчитать фракционный состав исследуемой сложной смеси в процентах от нанесенного белка (по площади пиков).

На чертеже изображена полученная кривая Т5 элюирования суммарного белка семян фасоли сорта «Сакса».

Кривая на графике свидетельствует о хорошей разделяющей способности описанного способа. 20

С точки зрения особенностей фракционного состава фасоли отмечают, что белковый комплекс ее в основной массе представлен электрофоретически подвижными компонентами с относительно низкими молекулярными весами, так как подвижность белков в полиакриламидном геле зависит от величины молекул и связана с конкурентной гельфильтрацией.

Отмечено, что разделяющая способность препаративного электрофореза выше, чем непрепаративного микрометода диск вЂ” электрофореза. По собственным данным (литературные данные отсутствуют) микрометодом выявлялось около 16 компонентов в исследуемой смеси, а препаративным вЂ” более 28.

Предмет изобретения

Способ препаративного электрофореза, основанный на разделении компонентов под действием электрического поля в колонке, заполненной гелем, при элюировании разделенных компонентов буфером, огличаои1ийся тем, что, с целью повышения разделяющей способности, компоненты смеси элюируют из кюветы, находящейся под колонкой в осевом направлении при прерывистом режиме элекгрофореза.

Способ фазового анализа сплавов на вольфрамовойоснове // 221981

Устройство для определения гранулометрического состава пульп и суспензий // 189219

Датчик влажности газов // 187363

Денситометр для определения содержания белковых фракций // 181869

Способ определения бикарбоновых кислот // 178566

Способ электрофоретического разделения ионоввеществ // 177147

Способ концентрирования катионов // 171659

Метод оценки антикоррозионных свойств смазоки масел // 164461

Патент 153082 // 153082

Способ определения нитрит-иона в растворе // 2105296

Изобретение относится к электрохимическим методам анализа с использованием ионоселективных электродов и может быть использовано для повышения чувствительности и селективности способа

Способ определения мышьяка (iii) // 2105297

Изобретение относится к электроаналитической химии, а именно к способу определения мышьяка (III), включающему концентрирование мышьяка на поверхности стеклоуглеродного электрода в растворе кислоты с последующей регистрацией аналитического сигнала, при этом концентрирование мышьяка (III) проводят на поверхности стеклоуглеродного электрода, покрытого золотом, в растворе до 3,0 M в интервале потенциалов -0,40-(-0,45)B в течение 1-10 мин с последующей регистрацией производной анодного тока по времени при линейной развертке потенциала

Способ измерения потенциала рабочего электрода электрохимической ячейки под током // 2106620

Изобретение относится к области электрохимии, электрохимических процессов и технологий в части измерения потенциала электродов под током, а именно к способу измерения потенциала рабочего электрода электрохимической ячейки под током, основанному на прерывании электрического тока, пропускаемого между рабочим и вспомогательным электродами, и измерении текущего потенциала рабочего электрода, при этом процесс измерения текущего потенциала Eизм рабочего электрода производят относительно электрода сравнения непрерывно по времени t, затем по измеренным значениям потенциала рассчитывают первую производную от зависимости изменения текущего потенциала рабочего электрода от времени: (t)=Eизм

Способ получения активированных кислого и щелочного растворов // 2108300

Изобретение относится к способу получения активированных кислого и щелочного растворов, включающему электрохимическое разделение водного раствора электролита, при этом электрохимическому разделению подвергают мочу животных и/или человека

Способ адсорбционного концентрирования необратимо адсорбирующихся на металлах соединений // 2114424

Изобретение относится к адсорбции компонентов, а именно к способу адсорбционного концентрирования необратимо адсорбирующихся на металлах соединений путем наложения электрического поля в электрохимической ячейке, при этом перед концентрированием проводят адсорбцию на жидкометаллическом электроде из раствора, содержащего адсорбируемые соединения, при интенсивном перемешивании и потенциале электрода, обеспечивающем необратимую адсорбцию, а концентрирование после отстаивания осуществляют путем сокращения поверхности электрода с необратимо адсорбируемыми соединениями при переводе электрода из ячейки в капилляр. Изобретение относится к анализу материалов с помощью оптических методов путем адсорбции компонентов

Способ определения потенциала поверхности // 2119157

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к области аналитической электрохимии, и может быть использовано при определении свойств грунтов, горных пород, строительных материалов, а также свойств поверхностей раздела фаз

Полупроводниковый материал для адсорбционных сенсоров низкомолекулярных органических соединений и способ его изготовления // 2119695

Изобретение относится к составу полупроводниковых материалов, используемых в адсорбционных сенсорах для обнаружения и количественной оценки концентрации низкомолекулярных органических соединений, преимущественно кетонов в выдыхаемом людьми воздухе, и к технологии изготовления таких полупроводниковых материалов

Электрохимический датчик концентрации водорода в газовых и жидких средах // 2120624

Способ определения содержания нефтепродуктов в воде // 2126965

Устройство для анализа воды // 2132049