Способ отбора лиц для вакцинации против бактериальных инфекций

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 6 01 и 33/53

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4886767/14 (22) 29,11.90 (46) 07.03.93, Бюл. hk 9 (71) Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения АН СССР (72) В.А.Черешнев, В.П.Рочев и И,В.Фельдблюм (56) Фельдблюм И,Б. и др. Совершенствование методов исследования иммунитета и иммунодиагностики. Пермь, 1982, т. 56, 26—

28.. (54) СПОСОБ ОТБОРА ЛИЦ ДЛЯ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и предназначено для отбора лиц для вакцинации против бактериальных инфекций.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Укаэанная цель достигается тем, что к исследуемой цельной крови добавляют микродозу вакцины или иммунные антитела специфически повышающие фагоцитоэ и определяют фагоцитарную активность лейкоцитов, затем по уровню специфического изменения фагоцитоза распределяют обследуемых на две группы и лицам первой группы с повышенным фагоцитозом проводят вакцинацию против бактериальных инфекций.

Способ осуществляют следующим образом, К 0 1 мл крови, взятой иэ пальца или ,вены, обследуемого лица или эксперимен„„Я3„„1800367 А1 (57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для отбора лиц для вакцинации против бактериальнь.х инфекций. Цель изобретения — повышение точности отбора.

Это достигается тем, что к цельной крови добавляется микродоза вакцины или иммунных антител, специфически повышающих фагоцитоз, и определяется фагоцитарная активность лейкоцитов, затем по уровню специфического изменения фагоцитоэа распределяют обследуемых на две группы и лицам первой группы с повышенным фагоцитозом проводят вакцинацию против ба ктериальных инфекций. тального животного, стабилизированной ге парином иэ расчета 50 АЕ/мл, добавляют

0,1 мл раствора бактериального антигена, полученного путем разведения коммерческого препарата (вакцины бактериального диагностикума) в 1000-10000 раз физиоло- Q гическим раствором или иммунные антитела к вводимому антигену; титром 320-640 в (Д

РПГА, к контрольным пробам крови прили-, 0 вают 0,1 мл физиологического раствора. с4

Смесь выдерживают при td = 36,5-37,0 С в течение 30 — 45 мин..

Оболедуеммх лии вакцинируют в обще- принятых дозах. Кроликам вводят подкожно взвеси шигелл Зонне, Ньюкестл или Флекснера в дозе 300-600 млн, микробных тел в 0,1-0,2 мл физиологического раствора.

Определяют уровни фагоцитоза интактHblx,è активированных ин витро микродоэа- . ми бактериального антигена и иммунными антителами лейкоцитов. У кроликов изучают

1800367 специфическое изменение фагоцитоэа s первые 1-2 ч и через неделю после вакцинации бактериальным антигеном.

Доза вводимых бактериальных антигенов и сроки исследования специфического . 5 изменения фагоцитоза после вакцинации применены с использованием данных литературы.

Для оценки фагоцитоза к пробам добавляют по 0,1 мл 1-2 $-ной взвести эритроци- "0 тов диагностикумов из вводимого бактериального антигена (специфический объект фагоцитоза), Для контроля специфичности изменения фагоцитоза используют 0,1 мл 1-2 -ной взвеси контрольных 15 эритроцитов (неспецифический объект фагоцитоза). flробы выдерживают при 1 - 36,5 — 37,0 в течение 10-15 мин делают мазки, их красят по методу РомановскогоГимза. Подсчитывают количество объектов 20 фагоцитоза в 100 полинуклеарных фагоцитах. Уровень фагоцитоза определяют по фагоцитарному числу — среднему количеству объектов фагоцитоза, фагоцитированных 1 лейкоцитом из 100. 25

Одномоментно с исследованием фагоцитоза определяют титр антител до и после введения бактериального антигена в РПГА по наставлению. ,По уровню специфического изменения 30 фагоцитоза ин витро обследуемых распределяют на две группы, К t группе относят лиц с повышением специфического повышения фагоцитарной активности лейкоцитов и титра антител, К 2-й группе 35 распределяют лиц со снижением фагоцитоза или без изменений, вакцинация которых нецелесообразна. У этих обследуемых после иммунизации отмечают снижение активности факторов иммунитета или 40 реакцию не определяют.

В приведенных примерах отражена динамика индивидуальной величины специ. фического изменения фагоцитоза и титра антител с использование заявляемого спо- 45 саба при вакцинации против бактериальных инфекций.

Пример 1, Определение специфического изменения фагоцитарной активности 50 лейкоцитов к антигену шигелл Зонне.

Исследования проведены с кровью 7 кроликов весом около 3-х кг. Для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов у . животных из вены уха брали кровь, стабили- 55 зировали ее гепарином. К 0,1 мл крови для индукции специфического изменения фагоцитоза добавляли 0,1 мл раствора антигена шигелл Зонне активностью 0,01 АЕ/мл в

РТПГА. К контрольным пробам приливали

0,1 мл физраствора, Смесь обрабатывали при tо 37,0 С в течение 45 мин.

Оценку фагоцитоза проводили с использованием 0,1 мл; взвеси эритроцитов антигенного диагностикума шигелл Зонне, неспецифического — со взвесью контрольных эритроцитов с аналогичным содержанием этих клеток, Смесь обрабатывали при

t0- 37 С в течение 10 мин. Уровни фагоцитоза оценивали по выше описанной методике.

Показано, что отмечаются значительные индивидуальные колебания как исходной величины фагоцитоза, так и уровня специфического изменения фагоцитарной активности лейкоцитов ин витро под влиянием антигена, у 1-4 кролика t повышение фагоцитоэа, И, наоборот 5-7 кролика отмечается специфическая депрессия фагоцитоза.

Статическая обработка результатов выявляет обратную зависимость уровня специфического изменения фагоцитоза под влиянием антигена шигелл Зонне от исходной активности лейкоцитов (козффициент корреляции (r) = — 0,95 0,04, 0,01).

Результаты исследований позволяют сделать заключение, что у животных с высоким уровнем специфического повышения фагоцитоза ин витро и после вакцинации будет значительное усиление .его величины.

Кроликов вакцинировали подкожно взвесью шигелл Зонне с содержанием 600 млн. микробных тел в 0,20 мл физиологического раствора. Фагоцитарную активность лейкоцитов определяли в динамике через

1 — 2 ч после вакцинации животных.

Как видно иэ таблицы, как и предполагалось, у 1-4 кролика отмечается значительное специфическое повышение фагоцитоза в ранние и поздние сроки после иммуниза- . ции кроликов антигеном шигелл Зонйе, У

5-6 кроликов реакция носит несущественный характер, а у 7 кроликов в 1-е часы выявлено специфическое снижение фагоцитоза. В то же время отмечается прямая корреляционная связь между уровнями специфического изменения активности лейкоцитов ин витро, в ранние и поздние сроки после введения шигелл Зонне в организм (г соответственно+ 0,96 + 0,03, P с 0,01 и

+ 0,96 и 0,07 Р с 0,01).

Выявленные результаты в этой серии исследований подтверждают возможность определения специфического изменения фагоцитоза до введения животным антигена шигелл Зонне.

1800367 вакцинации экспериментальных животных бактериальным антигеном.

Пример 3. Определение специфического изменения титра антител к столбнячному анатоксину.

Исследования проведены с кровью 20 здоровых мужчин в возрасте от 20 до 40 лет.

До вакцинации к 0,1 мл крови, взятой из вены, добавляли.0,1 мл раствора с содержанием микродоз столбнячного антоксина, полученного путем разведения коммерческого препарата в 10000 раз физиологическим раствором, К контрольным пробам приливали 0,1 мл физиологического раство5 ра. Пробы обрабатывали при t = 36,5 С в течение 20 мин. Для оценки фагоцитоэа к смеси добавляли по 0,1 мл 1 % взвеси эритроцитов столбнячного диагностикума.

Смесь выдерживали при t - 36,5 С 10 мин.

Оценивали фагоцитоз. Одномоментно определяли в сыворотке титр антител к столбнячному анатоксину в РПГА, Показано, что средняя исходная величина фагоцитоэа составляет 0,72, индивиду5 альные вариации — от 0,38 до 1.38.

Исходный средний титр к столбнячному анатоксину равняется 54, колебания его величины — от 5 до 640. В то же время не установлена прямая корреляционная связь между уровнями исходного фагоцитоэа и титра антител к столбнячному анатоксину. После взаимодействия крови ин витра со столбнячным анатоксином отмечается статистически достоверное повышение фагоцитоза к этому анатоксину.

С учетом характера изменения специфического фагоцитоза, обследуемых делили на две группы: к группе 1 отнесли — с повышением специфического фагоцитоза, ко 2— со снижением или без изменения его величин-ы.

20

35

40 ческого повышения фагоцитоза в сравне- 45 нии с низким ин витро под влиянием иммунных антител уровень специфического усиления фагоцитарной активности лейкоцитов после вакцинации антигеном шигелл

Результаты этих исследований свидетельствуют о возможности по уровню специфического повышения фагоцитоза ин 55 витра под влиянием иммунных антител. к вводимому антигену определить индивидуальный уровень специфического усиления фагоцитарной активности лейкоцитов до о

Пример 2. Определение специфического повышения фагоцитарной активности к антигену шигелл Ньюкестл.

Исследования проведены с кровью 6 кроликов. К 0,1 мл крови взятой иэ вены, добавляли 0,1 ммл раствора иммунных антител к антигену шигелл Ньюкестл титром в 256 в РПГА, к контрольным пробам — 0,1 мл физиологического раствора. Смесь выдерживали прил - 36,5 С в течение 45 мин, Для оценки уровня фагоцитарной активности лейкоцитов к пробам добавляли

0,1 мл 2 % взвеси эритроцитов антигенного диагностикума шигелл Ньюкестл. Смесь выдерживали при to = 36 5 С в течение 10 мин.

Оценивали фагоцитоэ.

Показано, что несмотря на значительные индивидуальные вариации исходного фагоцитоза и специфического повышения фагоцитоза под влиянием иммунных антител к шигеллам Ньюкестл реакция вносит статистически достоверный характер, В то же время выявлена обратная корреляционная связь между исходными уровнями фагоцитоза и изменениями их величин после введения шигелл Ньюкестл животным (I = соответственно — 0,93 +. 0,06, P < 0,01).

С учетом выявленных результатов исследований обосновано предположение, что после вакцинации антигеном шигелл Ньюкестл у.1 — 3 кролика с высоким уровнем специфического повышения фагоцитоза ин витро будет выявлено значительное усиление его величины, а у 4-6 кролика — реакция будет носить менее существенный характер, Кроликам подкожно вводили взвеси шигелл Ньюкестл с содержанием 300 млн микробных тел в 0,1 мл физиологического раствора.

Уровни фагоцитарной активности лейкоцитов определяли в динамике через 8 дней после вакцинации животных.

У кроликов с высоким уровнем специфиНьюкестл носит более яркий характер, (r =

= + 0 73 и 0,21 P < 0 01) Обследуемых лиц вакцинировал вакциной АДС-M в дозе 0,5 мл, Уровень специфического изменения титра антител определяли по кратности изменения его величины к столбнячному анатоксину в РПГА через 4 недели после вакцинации.

Отмечается статистически достоверное повышение титра специфических антител к анатоксину. В то же время, как и предполагалось, у лиц 1 группы отмечается значительное 20-кратное повышение титра антител; индивидуальная величина усиления колеблется от 8 до 512 раз, И только у 1 обследуемого из 15 с невысоким уровнем повышения фагацитоза не определяется усиления титра антител.

1800367

Таким обрезом, полученные результвты исследований убедительно подтверждают возможность отборв лиц для ввкцинации против столбнячной инфекции. В сравнении с прототипом точность определения специфического изменения титра антител до вакцинации анатоксином повышается с

Составитель Г.Крюкове

Техред М.Моргентал Корректор М,Шароши

Редактор С.Кулакова

Заказ 1161 (ирэж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета,по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издэтельский комбинат "Патент", г, Ужгород,.ул.Гагарина, 101

И, наоборот. из 5 обследуемых 2 группы только у 1 отмечается повышение титра ан-. тител к анатоксину.

Коэффициент корреляции между уровнями специфического повышения фагоцитозэ ин витро под влиянием микродоз анатоксина и крвтности повышения титра антител после введения всем обследуемым этого внатоксина составляет+ 0,92 и 0,03, P < 0,001. использованием заявляемого способа с 45 до 90 .

Формула изобретения

Способ отбора лиц для вакцинации про5 тив бактериальных инфекций путем иммунологического исследования крови, о т л ич а ю щи йс я тем,что, с целью повышения точности способа путем. выявления колебаний индивидуальной чувствительности, к

10 исследуемой крови добавляют специфическую вэкцину или специфические иммунные антитела, инкубируют в течение 20 мин при

36,5ОС, далее вводят специфический эритроцитарный антигенный диагностикум, on15 .ределяют фагоцитарную активность лейкоцитов и осуществляют отбор лиц для вакцинации с повышенной фагоцитврной активностью лейкоцитов,