Способ экспресс-диагностики сифилиса

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике сифилиса . Цель изобретения - повышение чувствительности способа. В реакции микропреципитации на стекле используют озвученный трепанемный антиген, эмульгированный в масле, и при выявлении преципитации диагностируют сифилис. По сравнению с прототипом увеличивается чувствительность способа, достигается экономичность метода.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)ю G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (lOCflATEHT СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4750904/14 (22) 17,10.89 (46) 23.02.93. Бюл. М 7 (71) Ставропольский государственный медицинский институт (72) О.П.Крылова, О.А.Версютина и А.Х.Казиев (56) Инструкция МЗ СССР для реакции микропреципитации на сифилис от 20.10.78 г. (54) СПОСОБ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ

СИФИЛИСА

Изобретение относится к иммунологии и касается серологических способов исследования.

8 последние годы возросла потребность в более широком охвате населения серологическими исследованиями на сифилис при профосмотрах, массовом обследовании доноров, беременных, больных инфекционными заболеваниями в стационарах, в гематологической и хирургической практике. Так, большое распространение за рубежом получили микроосадочные реакции с кардиолипиновым антигеном и сыворотной крови больного — тест ДР1 и его модификации касались сыворотки и крови больных — активная или инактивная сыворотка, плазма крови, нативная кровь из пальца, но при всех модификациях в качестве антигена использован кардиолипин.

Начиная с 1978 года, при массовых обследованиях на сифилис больших групп населения в нашей стране все чаше используется микрореакция с кардиолипиновым антигеном.

Однако общепризнано, что микрореакция чаще, чем другие реакции на сифилис, „„. Ж,, 1797067 А1 (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике сифилиса. Цель изобретения — повышение чувствительности способа. В реакции микропреципитации на стекле используют озвученный трепанемный антиген, эмульгированный в масле, и при выявлении преципитации диагностируют сифилис, По сравнению с прототипом увеличивается чувствительность способа, достигается экономичность метода. может давать ложноположител ьн ые резул ьтаты. В связи с этим она и называется ориентировочным (отборочным) тестом.

Наиболее близким (прототип) по своей сущности к предлагаемому изобретению является кардиолипиновый антиген, утвержденный М3 СССР для реакции микропреципитации на предметном стекле для серологического обследования на сифилис, представляющий собой раствор ливи- »О дов и холестерина в абсолютном этаноле.

Однако данный антиген является неспе- (..) цифическим, в связи с чем он дает опреде- 0» ленное количество неспецифических»» результатов.

Цель предлагаемого изобретения — по- ьм вышение чувствительности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Готовят масляный специфический антиген из озвученного культурального трепонемного антигена (Ставропольский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток) для PCK по методике приготовления масляного антигена для реакции агломерации — одной из реакций мо1797067 носистемного иммунологического метода. . Адсорбентом специфического антигенэ служат частицы масляной эмульсии, полученные из оливкового масла(или подсолнечного) Разбавителем является физиологический раствор поваренной соли (0,85$), в качестве эмульгатора используется 5%,-ный р-р буры.

Для этих целей в колбу с 20 мл физраствора добавляют 1,3 мл оливкового масла и

3-5 капель 5 -ного раствора буры, Смесь энергично встряхивают руками в течение 10 мин, Полученную мелкодисперсную эмульсию используют в дальнейшей работе, Для проведения сенсибилизации к Ю мг сухого коммерческого трепонемного озвученного антигена (eo флаконе) добавляют

5 мл физиологического раствора, встряхивают до полного растворения и оставляют на

5 мин при комнатной температуре. Затем равные объемы приготовленной масляной эмульсии и растворенного трепонемного озвученного антигена в физиологическом растворе. смешивают встряхиванием в пробирке в течение 2-3 мин. Приготовленная смесь выдерживается при комнатной температуре до 30 мин; После этого энтиген используют в реакции, Масляный трепонемный озвученный

- антиген не теряет своих свойств при хранении в холодильнике (при 3-5 С) в течение 10 дней (срок наблюдения).

В реакции микропреципитации на стекле используют инактивированную сыворотку крови людей в разведении 1:5, На предметное стекло с лунками или полистироловую пластинку "опыт" и "контроль" наносят по 1 капле масляного трепонемного озвученного антигена, В опытную лунку добавляют 1 каплю исследуемой сыворотки (1:5) и перемешивают стеклянной палочкой; в контрольную лунку 1 каплю физиологического раствора или 1 каплю сыворотки крови донора (заведомо отрицательную) в-разведении 1:5 и также сразу перемешивают стеклянной палочкой, Через 3-5 минут учитывэВт реакцию. Для лучшей видимости преципитации можно испольэовать черный фон.

Положительной реакцией (опыт) считают образование четко ограниченного преципитата в центре капли; по периферии капли наблюдается просветление.

При отрицательной реакции (контроль) капля остается гомогенно-мутной, Возможность использования в диагностическом тесте (ДТ) нэ сифилис масляного трепонемного озвученного антигена поясняется в примерах исследования сывороток крови людей больных сифилисом, обследующихся на сифилис больных другими заболеваниями несифилитической этиологии и практически здоровых людей — доноров, Результаты ДТ сравнивали с микрореакцией на стекле с кардиолипиновым энтигеном, применяющимся для экспресс-диагностики сифилиса (ЭДС), с результатами стандартного комплекса серологических реакций на сифилис (КСР) и реакции иммунофлуоресценции (РИФ, непрямой метод), которую ставили для

"0 уточнения результатов исследования некоторых сывороток.

Способ поясняют следующими примерами, Пример 1, 100 сывороток крови

15 людей с установленным диагнозом различных форм сифилиса инактивировали на водяной бане при 56 С в течение 30 мин. Для каждой испытуемой сыворотки готовили разведение 15 в пробирке (такое разведе20 we сыворотки используется для постановки РСК). На предметное стекло наносили 1 каплю готового масляного трепонемного антигена и 1 каплю исследуемой сыворотки больного (" Опыт" ), Рядом, для "Контроля", к 1 капле масляного трепонемного антигена добавляли 1 каплю физиологического раствора. Стеклянной палочкой тщательно перемешивали капли, Через 3-5 мин учитывали реакцию. Для

30 лучшей видимости преципитации можно использовать черный фон. Положительная реакция появилась образованием ограниченного преципитата в центре капли; по периферии капли наблюдалось просветление. В ""Контро35 ле" капля осталась гомогенно-мутной.

Положительные результаты в ДТ получены с 91 сывороткой, в ЭДС с кардиолипиновым с 86, в КСР— с 87. Расхождения в результатах исследования сывороток этой

40 группы составили 5 сывороток в пользу ДТ.

Эти сыворотки принадлежали людям с установленным диагнозом сифилиса.

П р и и е р 2. Исследование группы . сывороток от людей, обследующихся нэ си45 филис по различным.причинам (для снятия с учета после проведенного лечения, контактные люди, подозрение на сифилис ввиду наличия клинических признаков и т.д,) в количестве 58, проводили по предложенной

50 методике: на предметном стекле 1 каплю масляного трепонемного антигена тщательно смешивали с 1 каплей исследуемой сыворотки стеклянной палочкой; контролем служила капля масляного трепонемного ан55 тигена и капля физиологического раствора.

Учет результатов проводили через 3-5 минут. Положительные результаты в диагностическом тесте с масляным трепонемным антигеном получены с 37 сыворотками, в экспресс-диагностике с кардиолипиновым

1797067

40

50 антигеном — с 26, в КСР— с 26, Расхождения в результатах исследования по разным серологическим тестам были получены с 11 сыворотками. В ЭДС и KCP. У шести больных с клиническими проявлениями, сыворотки которых входят в группу давших расхождения в результатах исследования, в дальнейшем (по клиническим данным эрозивный твердый шанкр) установлен диагноз первичного активного и вторичного рецидивного сифилиса и в РИФ был получен положительный результат.

С тремя сыворотками людей, больных сифилисом, прошедших курс лечения и снимающихся с учета, получены положительные резул ьтаты не тол ько в диагностическом тесте с масляным трепонемным антигеном, но и в РИФ, при отрицательных результатах KCP и ЭДС. Учитывая чувствительность и специфичность РИФ, можно. положительные результаты с ДТ вышеуказанными сыворотками считать подтверждающими чувствительность масляного трепонемного антигена.

Больные, с сыворотками которых получены положительные результаты только в ДТ с масляным трепонемным антигеном при отрицательных результатах в других серологических тестах, требуют более глубокого обследования и дальнейшего наблюдения.

Пример 3, С сывороткой больного

А-ва А.М. с диагнозом: "зрозивный беланопостит" получены отрицательные результаты и в комплексе серологических реакций и в ЭДС с кардиолипиновым антигеном. В диагностическом тесте на стекле с масляным трепонемным антигеном и в РИФ был получен положительный результат. В дальнейшем данному больному был поставлен диагноз первичного активного сифилиса.

Пример 4. Сыворотка больного М-ва

С.Н, с диагнозом первичного активного сифилиса, прошедшего курсы лечения и снимающегося с учета, дала положительный результат в ДТ с масляным трепонемным антигеном и в РИФ при отрицательных результатах в KCP и ЭДС с кардиолипиновым.

Пример 5, Исследование сывороток крови людей с заболеваниями несифилитической этиологии (гонорея, кожные болезни и др.) в количестве 24 s диагностическом тесте на стекле выявляет достаточную специфичность масляного трепонемного антигена: с 22 сыворотками получены отрицательные результаты, с 2-мя — положи-. тельные. В КСР все сыворотки дали отрицательный результат, в ЭДС с кардиолипиновым — 23 отрицательных результата и один положительный. Две сыворотки с положительным результатом в реакции преципитации на стекле с масляным трепонемным антигеном, принадлежали людям с хронической гонореей; РИФ с ними — отрицательна. Поэтому, эти два результата можно оценить как неспецифические, Т.к. предлагаемый тест является отборочным, полученные положительные результаты требуют дальнейшего клинического обследования и наблюдения за больными для установления окончательного диагноза.

Пример 6. Группа сывороток крови доноров (56) во всех серологических тестах — КСР, ЭДС, с кардиолипином и ДТ с трепонемным масляным антигеном дала отрицательные результаты. Это свидетельствует о выраженной специфической реакции с масляным трепонемным антигеном.

Проведенные исследования сывороток крови больных сифилисом и здоровых людей подтвердили большую специфичность и чувствительность диагностического теста с масляным трепонемным антигеном в сравнении с кардиолипином в аналогичной реакции преципитации на стекле, Т.о, предлагаемый отборочный тест позволяет при простоте постановки и учета реакции повысить надежность получаемых результатов при массовых обследованиях больших групп людей на сифилис.

Для получения масляного трепонемного культурального озвученного антигена для отборочной реакции на сифилис не требуется отдельного производства, т.к. он готовится на основе коммерческого трепонемного озвученного антигена для PCK

В данном диагностическом тесте используется специфический антиген, что по45 зволяет повысить надежность получаемых результатов при исследовании сывороток для выявления больных сифилисом людей сравнительно с кардиолипиновым антигеном.

Масляный трепонемный озвученный антиген, как приготовленный для реакции, так и недоиспользованный, сохраняет свою работоспособность в.течение 10 дней (срок наблюдения).

1797067

Составитель В.Eraposa

Техред M.Ìîðãåíòýë Корректор Л,Пилипенко

Редактор

Заказ 651 Тираж - Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открйтиям при ГКНТ СССР

113036, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/6

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Формула изобретения

Способ экспресс-диагностики сифилиса, включающий забор крови, выделение сыворотки, инкубацию ее со специфическим антигеном и при появлении Микропреципитата диагностируют сифилис, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве специфического антигена используют энтиген из разрушенных ультразвуком культурэльных трепэнем, змульгированный в масле.