Способ выделения jersinia реsтis

 

Использование: медицина, микробиология , а именно выделение возбудителя из кантаминированного патологического материала и объектов внешней среды. Сущность изобретения: с исследуемых образцов делают посев на питательную среду - агар Хоттингера рН 7.2, содержащую селективный агент - фосфомицин - в концентрации 50- 100 мкг/мл. Чашки с посевами инкубируют в термостате при 28°С в течение 24-48 ч и проводят учет роста бактерий/Питательная среда с фосфомицином подавляет рост микробов рода Е. coli, Proteus vulgarls. Salmonella typhimurium не ингибирует роста как типичных, так и дефектных по плазмидам pFra/Tox, pPst I штаммов Yerslnta pestis. 1 табл. 4 OJ о ел ел

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (н)з С 12 Q 1/04 ..

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ. СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

; 3

С)

Сл

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 (21) 4837133/13 (22) 11.06.90 (46) 30.04.92. Бюл. М 16 (71) Всесоюзный научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" (72) М.П.Салабуда, И.Н.Ежов, А.М.Кокушкин, О.П.Плотников, Т.Н.Донская, Э.А.Амплеева и И.Г.Дроздов (53) 576.8.078576.851.45 (088,8) (56) Руководство по профилактике чумы./Под ред..Н.И,Николаева. Саратов, 1972, с. 160.

= Тезисы 10 научной конференции противочумных учреждений Средней Азии и Казахстана. Алма-Ата, 1979., вып. 1. с. 68-70, Вестник микробиологии. эпидемиологии и паразитологии. Саратов, 1938. т. 17, вып. 1-2, с. 20 — 28.

Вестник микробиологии, эпидемиологии и паразитологии, Саратов, 1938, т. 17, вып. 3-4. с. 201-214.

Известия Иркутского государственного научно-исследовательского противочумного института Сибири и Дальнего Востока, 1954, вып. 2, с. 11-12.

Франклин Т., Сноу Дж. Биохимия антимикробного действия. Пер, с англ. М.: Мир, 1984, с. 50-51.

Руководство по профилактике чумы./ред. Н.И.Николаев, Саратов, 1972. с.

122.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при диагностике чумы.

Целью Изобретения является упрощение и повышение чувствительности способа, „„ А „„1730155 А1 (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ YERSINIA

PESTIS (57) Использование: медицина, микробиология, а именно выделение возбудителя из кантаминированного патологического материала и объектов внешней среды. Сущность изобретения: с исследуемых образцов делают посев на питательную среду — агар Хоттингера рН 7,2, содержащую селективный агент — фосфомицин — в концентрации 50100 мкг/мл. Чашки с посевами инкубируют в термостате при 28 С в течение 24-48 ч и проводят учет роста бактерий. Питательная среда с фосфомицином подавляет рост микробов рода Е. col!, Proteus vulgarls, Salmonella typhlmurium не ингибирует роста как типичных, так и деФектных по плазмидам pFra/Tox, pPst l штаммов тегзЫа pestls.

1 табл.

Способ осуществляют следующим образом.

С исследуемых образцов делают посев на питательную среду. включающую селективный агент(агар Хоттингера рН 7,2) и антибиотик фосфомицин в концентрации

50-100 мкг/мл. Чашки с посевами инкуби1730155

Выделение Yerslnia pestis из смешанных культур на агаре с различными концентрациями фосфомицина руют в термостате при 28 С, Учет результатов производят через 24 — 48 ч, Пример 1. Готовят бактериальную взвесь штамма вульгарного протея 19 в

0,9,-ном растворе хлористого натрия кон- 5 центрацией 10 м.к,/мл и смешивают с

7 взвесью культуры штамма чумного микроба

231 концентрацией 10 м.к./мл в одной пробирке в объемным соотношениях 1:1, Затем смесь в количестве 0,2 мл высевэют на пла- 10 стинки агара, содержащего фосфомицин в концентрации 25, 50, 100 и 200 мкг/мл. Посевы инкубируют в термостате 24-48 ч. На чашках с 25 мкг/мл фосфомицина наблюдается рост изолированных колоний чумного 15 микроба и единичных изолированных колоний вульгарного протея. На чашках с 50, 100 и 200 мкгlмл фосфомицина роста вульгарного протея не отмечается. На среде, содержащей 200 мкг/мл фосфомицина, 20 количество колоний возбудителя чумы снижается (см. табл,).

Пример 2. Бактериальную взвесь штамма кишечной палочки К-12 в 0,97,-ном растворе хлористого натрия концентрацией 25

10 м,к./мл смешивают с взвесью культуры штамма чумного микроба 231 концентрацией 10 м.к./мл в соотношении 1:1. Затем смесь по 0,2 мл высевают на пластинки агара Хоттингера рН 7,2 с фосфомицином в 30 концентрации 25, 50, 100 и 200 мкгlмл. Через 24-48ч на чашках с 25 мкгlмл при 28 С наблюдается рост изолированных колоний чумного микроба и единичных изолированных колоний кишечной палочки. На чашках 35 с 50, 100 и 200 мкг!мл фосфомицина роста кишечной палочки не отмечается. На чашках с 200 мкг/мл фосфомицина число колоний возбудителя чумы снижается (см. табл.).

Пример 3. Бактериальную взвесь 40 штамма брюшнотифозных бактерий ГУ24 в

0,9%-ном растворе хлористого натрия концентрацией 10 м.к./мл смешивают с взвесью культуры штамма чумного микроба

231 концентрацией 10 м.к./мл в объемном соотношении 1:1, Затем смесь по 0,2 мл высевают на пластинки агара рН 7,2 с фосфомицином в концентрации 25, 100 и 200. мкг/мл. Через 24-48 ч на засеянных чашках при 28 С с 25 мкг/мл фосфомицинэ наблюдался рост изолированных колоний чумного микроба и единичных изолированных колоний сальмонелл. На чашках с 50, 100 и 200 мкгlмл фосфомицина роста сальмонелл не отмечалось. На среде, содержащей 200 мкг/мл фосфомицина, количество колоний возбудителя чумы снижается (см. табл.).

Установлено, что оптимальным количе-. ством фосфомицина в среде является концентрация 50-100 мкг/мл.

Предлагаемый способ по своей чувствительности превосходит известный способ выделения чумного микроба, так как не ингибирует роста как типичных, так и дефектных по собственным плазмидам (pFra/Тох, pPst 1) штаммов чумного микроба. Кроме того, он позволяет выделять возбудитель чумы при посеве единичных клеток и одновременно подавлять рост его антагонистов при больших посевных дозах. Способ может быть использован для выделения возбудителя чумы иэ органов загнивших животных, содержимого кишечника и объектов внешней среды.

Формула изобретения

Способ выделения Yersinia pestis путем посева исследуемых образцов на питательную среду, включающую селективный агент, инкубирование посевов при 28 С и учет результатов через 24 — 48 ч, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью упрощения и повышения чувствительности способа, в качестве селективного агента используют антибиотик фосфомицин в количестве 50-100 мкг/мл среды.