Способ выявления живых интактных иксодовых клещей, зараженных вирусом клещевого энцефалита

 

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской паразитологии. Цель - повышение точности и упрощение способа. Разделение клещей на зараженных и незараженных вирусом клещевого энцефалита проводят под действием запаха растительного происхождения, например почек тополя , душистого перца, эстрагона или мелиссы, который изменяет направление движения зараженных клещей на противоположное по сравнению с незараженными, Способ позволяет в течение 5 мин полностью отделить зараженных клещевым энцефалитом клещей от незараженных, 7 ил., 1 табл. fe

(19) (! Ц

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (и)з С 12 0 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4805073/13 (22) 22,03.90 (46) 07,04,92, Бюл.%13 (71) Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов АМН СССР (72) А.Н.Алексеев, Л.А, Буренков и С,П.Чунихин (53) 576.895.7 (088,8) (56) Авторское свидетельства СССР

l4 1510365, кл, С 12 Q 1/04, 1989.

А в сев А,Н„6ypeHKosa Л,А., Чунихин

С,П. Особенности поведения клещей 1хобез

persulcatus, зараженных вирусом клещевого энцефалита. — Медицинская парвзитология, 1988, Q2, с,71-75. (54) СПОСОБ 8ЫЯВЛЕНИЯ ЖИВЫХ ИНТАКТНЫХ ИКСОДОВЫХ КЛЕЩЕЙ, ЗАРАИзобретение относится к биологии и медицине, а именно к медицинской паразитологии и вирусологии, к способам определения зараженности живых объектов (потенциальных переносчиков) возбудителями болезней, Известны способы определения содержания возбудителей в переносчиках. связанные с их умерщвлением v определением содержания возбудителей в них заражением чувствительных животных, культур клеток или сред, или индикацией антигенов возбудителей в них с исполь сованием серологических реакций.

Известен также способ определения вируса клещевого энцефалита в слюне иксодовых клещей, ЖЕННЫХ ВИРУСОМ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА (57) Изобретение Относится к медицине, в именно к медицинской паразитологии. Цель— повышение точности и упрощение способа.

Разделение клещей на зараженных и незараженных вирусом клещевого энцефалита проводят под действием запаха растительного происхождения, например почек тополя, душистого перца, эстрагона или мелиссы, который изменяет направление движения зараженных клещей на противоположное hO сравнению с незараженными, Способ позволяет в течение 5 мин полностью отделить зараженных клещевым энцефалитом клещей От незараженных, 7 ил., 1 табл.

Однако все эти способы связаны либо с умерщвлением переносчиков либо, как в последнем случае, с введением в их полость Э химических веществ, фь

Наиболее близким техническим реше- (7 нием является выявление различий в позе- К ) дении зараженных и незараженных клещей, проявляющееся в повышении подвижности зараженных особей и в их движении от градиента влажности, отличающее их от неза, раженных клещей, ю Ь

Однако указанные различия носят среднестатистический характер и не могут быть использованы для быстрого разделения живых клещей нв две четко различающиеся па признаку зараженности группы, Целью изобретения является упрощение и повышение точности выявления зара1724692 женных клещей, Поставленная цель достигается тем, что разделение клещей происходит под влиянием запаха растительного происхождения эа счет расползания в противоположные стороны зараженных и незараженных особей.

На фиг.1 изображена схема, реализующая способ; на фиг.2 — 7 — графики реакции на запах зараженных и незараженных клещей.

Пример 1, Демонстрация распределения зараженных и незараженных иксодовых клещей по реакции на запах почек тополя.

Самок и самцов клещей рода

Dermacentor и рода Нуа!оваа, собранных на территориях, свободных от клещевого энцефалита (КЭ), заражают парентерально вирусом КЭ (2) и затем через различные сроки (но не менее суток) помещают в ольфактометр (фиг.1) для измерения реакции на запах тополевых почек. Для этого 1 г тополевых почек растирают в ступке, экстрагируют 10 мл ацетона, смачивают гигроскопическую вату и (после испарения ацетона) помещают в патрон 1 ольфактометра, B противоположный конец 2 ольфактометра помещают такой же ватный тампон, слегка смоченный дистиллированной водой, а затем в центральное отверстие

3 — смешанную партию зараженных и незараженных клещей. На сосок ольфактометра надевают шланг 4, соединенный со штуцером аквариумного компрессора 5 для просасывания воздуха через оба патрона

Ол ьфактометра.

Выраженность реакции отмечают по расстоянию, пройденному клещом к (+) или от(-) источника запаха за 5 мин. Результаты наблюдений представлены на фиг.2 — 4 (род

Dermacentor) и на фиг.5 (род Hyalomma).

После расползания клещей к источнику или от источника запаха их собирают. а затем каждого клеща исследуют индивидуально общепринятым вирусологическим тестом (интрацеребральное заражение новорожденных белых мышей) на наличие вируса, Как видно из данных, представленных в таблице и фиг.2 — 5, происходит распределение клещей на группы зараженных и незараженных. "Нулевая" группа — не более

10 особей, вся составлена из незараженных клещей. Как видно из фиг.4, клещи с более высоким титром вируса дают более выраженную реакцию на запах, проходя большее расстояние.

У клещей рода Dermancentor (О marginatus и D,reticuiatus) зараженные самцы направляются в сторону источника запаха, а незараженные — от этого источника. Самки этого рода демонстрируют противоположную реакцию: зараженные двигались от источника запаха, незаражен5 ные — к источнику (фиг.2 — 3).

У клещей Hyalomma anatolicum реакция зараженных самцов и самок на запах тополевых почек была положительной (+), незараженных — отрицательной (-) (фиг.5).

10 Таким образом, у трех изученных видов иксодовых клещей реакция зараженных и незараженных вирусом КЭ особей на запах тополевых почек была противоположной, что позволило в 100 случаев выделить под15 группу зараженных.

При одновременном использовании известного способа, основанного на выявлении различий в поведении зараженных и незараженных клещей в градиенте влажно20 сти доля зараженных клещей в подгруппе с отрицательным гигротаксисом (no результатам 10 опытов) составила 50 — 92 (в среднем 69 ).

Пример 2. Демонстрация противо25 положной реакции у зараженных и незараженных клещей рода Dermacentor на запах душистого перца.

Используют два вида клещей

Dermancentor (D marglnatus u D.retlculatus).

30 Методика опыта аналогична примеру 1. Как видно из фиг.6, самцы и самки обоих видов при наличии в них вируса дают положительную реакцию на запах душистого перца, незараженные - противоположную, 35 отрицательную.

Пример 3. Демонстрация противоположной реакции зараженных и незараженных клещей рода Dermacentor на запахи эстрагона и мелиссы.

40 Используют два вида клещей:

О.marginatus и О.retlculatus. Методика опыта аналогична примерам 1 и 2.

Как видно из фиг.7, самцы и самки обоих видов дают отрицательную реакцию на

45 запахи эстрагона и мелиссы, будучи зараженнымии, и положительную, будучи свободными от вируса.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет быстро и точно (100 совпадений в слепом опыте) рассортировать клещей

50 по признаку наличия в них вируса клещевого энцефалита, что существенно удешевляет и ускоряет как оценку экстенсивности заражения природных популяций клещей, так и получение биологического эксперименталь10 ного материала с заведомо известными качествами.

Точность метода такова, что любую группу можно использовать для различных целей: проверки экстенсивности и интен1724692 сивности заражения популяции, уровня зараженности особей разного пола, реакции на стандартные репелленты зараженных и незараженных клещей и т.д.

Формула изобретения

Способ выявления живых интактных иксодовых клещей, зараженных вирусом клещевого энцефалита, включающий воздействие на исследуемую группу клещей

15 внешним фактором, разделяющим ее на подгруппы зараженных и незараженных клещей, и последующий их анализ на наличие вируса стандартным вирусологическим тестом, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью

20 повышения точности и упрощения способа, в качестве факторов внешнего воздействия используют запахи почек тополя, или мелиссы, или душистого перца, или эстрагона.

1724692

t

Фиг. 2

1724692

1724692

73 >

/ 1 !

)

i т2 USI i у Е2

Фиг, 7

Составитель С. Чунихин

Редактор И. Дербак Техред М.Моргентал Корректор Н. Ревская

Заказ 1151 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат. "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101