Способ определения гемолитической активности bacillus аnтнrасis
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при бактериологической диагностике сибирской язвы. Цель изобретения - повышение точности способа. В лунку двухслойной питательной среды, содержащей агар и физиологический раствор (нижний слой 1-1,5 мас.% агара, верхний 0,6-0,8 мас.% с 6-8% отмытых эритроцитов барана) засевают исследуемую бульонную культуру. Посевы инкубируют при 37°С в течение 48 ч и выявляют наличие зон гемолиза эритроцитов вокруг колоний микроорганизмов. При наличии зон гемолиза культуру относят к гемолитически активной. 3 табл.
СОЮЗ СОНЕТСНИХ социдлистичесних
РЕСПУБЛИК (51) С 12 c? 1/04
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
Н А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4472016/30-13 (22) 02.08.88 (46) 07,10,90. Бюл. Р 37 (71) Научно-исследовательский противочумный институт Кавказа и Закавказья (72) О.И. Цыганкова и Н.П.Буравцева (53) 576.8.093.31(088,8) (56) Ткаченко В. Методика учета реакции гемолиза с помощью фотоэлектроколориметра ФЗК-М. — Доклады Иркутского ПЧИ, Улан-уде, 1961.
Коротич А С ., Погребняк Л.И. Сибирская язва. — Киев: Урожай, 1876, с. 89. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕМОЛИТИЧЕС.:КОИ АКТИВНОСТИ BACILLUS АМТНВАС?$
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при бактериологической диагностике сибирской язвы и исследовательских целях.
Цель изобретения - повьппение точности способа.
Crrocob осуществляют следующим образом. В стерильные чашки Петри рааливают расплавленный 1-1,5%-ный агар на физрастворе по 20 мл. После застывания наслаивают 5 мл 0,6-0,8%-ного агара, содержащего 6-8% отмытых эритроцитов барана. После застывания верхнего слоя пробойником делают лунки, дно .которых запаивают 1-2 каплями расплавленного 1Х-ного агара. Оптимальное количество лунок на одной агаровой пластине 6.. эК» 1597 А 1
2 (57) Изобретение относится к медицинской микроЬиологии и может быть использовано при бактериологической диагносi èêå сиЬирской язвы. Цель изобретения — повьппение точности способа. В лунку двуслойной питательной среды, содержащей агар и физиологический ргствор (нижний слой 1-1,5 мас.Х агара, верхний 0,6-0,8 мас.Х с 6-8Х отмытых эритроцитов барана), засевают исследуемую бульонную культуру. Посевы инкубируют при 37 С в течение
48 ч и выявляют наличие зон гемолиза эритроцитов вокруг колоний микроорганизмов. При наличии зон гемолиза культуру относят к гемолитически актив- а ной. 3 табл. ф
В лунки вносят по 0,1 мл 20-24-часовой бульонной культуры. Бульон засевают из расчета 1-5 млн. спор на
1 мл среды. После внесения бульонной культуры в лунки чашки Петри помещают в т рмостат при 37 С ° Учет результатов производят через 24 и 48.ч. При помощи миллиметровой линейки измеряют от края лунки ширину зоны гемолиэа.
Учитывают ширину зоны полной прозрачности, так как она соответствует зоне лизиса эритроцитов.
Пример 1. В чашку Петри нали-. вают 20 мл 1Х-ного расплавленного araра на физрастворе. После застывания вторым слоем наливают 5 мл 0,6Х-ного расплавленного агара на физрастворе, содержащего 6% отмытых эритроцитов барана. После застывания верхнего слоя пробойником делают лунки, дно кото"
1597404
Таблица 1
7,5
О
7,0
4;5
9,0
СТИ
Ихтиман
Т (СО)615/3
881
Т(СО), Таблица 3
О б
О
4
СТИ
Ихтиман
I(C0)615/3
881
z (co) Та блица 2
Штамм: т
50
Ихтиман
Т(СО)615/3
881
I(C0) 8
О
4
55 рых запаивают 1-2 каплями расплавленного 1%-ного агара. В лунки вносят по 0,1 бульонных культур различных штаммов Bacillus anthracis (посевная доза 1 млн. спор на 1 мл среды). Чашки Петри помещают в термостат при о, 37 С. Через 48 ч ширину зоны лизиса эритроцитов вокруг лунок с каждым штаммом измеряют при помощи миллимет.-.10 ровой линейки. Результаты измерений зон гемолиза представлены в табл. 1.
Штамм Ширина зоны лизиса, мм
Пример 2. В чашку Петри наливают 20 мл 1,2%-ного расплавленного
arapa на физрастворе. После застывания вторым слоем наливают 5 мп О, 7Хного расплавленного агара на физраст- 30 воре, содержащего 7% отмытых эритроцитов барана. После застывания верхнего слоя пробойником делают лункы, дно которых запаивают 1-2 каплями расплавленного 1,2Х-ного агара. В лунки вносят по 0,1 мл 24-часовой бульонной культуры различных штаммов В.anthracis (посевная доза 2 мпн. спор на
1.мп бульона). Чашки Петри помещают . в термостат при 37 С. Через 48 ч шири- 0 .ну зоны гемолиза вокруг лунок с каждым штаммом измеряют при помощи ли-, нейки. Результаты измерения зон гемолиза представлены в табл. 2.
Пример 3. В чашку Петри наливают ".О мл 1,5Х-ного расплавленного агара на физрастворе. После застывания вторым слоем наливают 5 мл 0,8Хного расплавленного агара на физраствор е, содержащего 8% отмытых эритроцитов барана. После застывания верхнего слоя пробойником делают лунки, дно которых запаивают 1-2 каплями 1,5%ного arapa. В лунки вносят по О, 1 мл
24-часовой бульонной культуры различных штаммов В. anthracis (посевная доза 5 млн. спор на I мл бульона), Чашки Петри помещают в термостат при
37 С. Через 48 ч ширину зоны лизиса эритроцитов вокруг лунок с каждым штаммом измеряют при помощи линейки.
Результаты измерений зон гемолиза эритроцитов представлены в табл .3.
Штамм " Ширина зоны лизиса, мм
Предлагаемый способ позволяет определять гемолитическую активность
В, anthracis, тогда как по известному способу из-за плотности агара при относительно невысокой продукции гемолитических веществ агаровыми культурами В ° anthracis гемолитическая активность практически не выявляется.
Формула изобретения
Способ определения гемолитической активности Bacillus anthracis путем посева исследуемой культуры на плот-. ную питательную среду с последующим инкубированием посевов в присутствии эритроцитов барана и учетом результатов по наличию зон гемблиза эритроцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве плотной питательной среды используют двуслойный агар, приготовленный на физиологическом растворе, при концентрации arapa a нижнем слое 1,0-1,5 мас,% а в верхнем слое 0,6-0,8 мас.Х, при этом эритроциты барана вносят в верхний слой в концентрации 6-8% от объема среды, затем в arape формируют лунки,t :в которые осуществляют посев исследуемой культуры.
