Способ оценки пролиферации лимфоцитов
Изобретение относится к медицине , в частности, к способам диагностики нарушения пролиферации иммунокомпетентных клеток. Цель изобретения - количественная оценка интенсивности пролиферации лимфоцитов человека. Достигается путем измерения интенсивности пролиферации при добавлении конканавалина А в дозах 2,5,40 мкг/мл и определения углов наклона к оси абсцис прямых, соединяющих значения интенсивности пролиференции при дозах 0 и 2, 2 и 5, 5 и 10 мкг/мл. Сравнение углов наклона и динамики их изменения по сравнению с нормой свидетельствует о нарушении пролиферативных процессов.
файф
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ вЂ” РЕСПУБЛИК (19«(11 I (51) 4 О 01 N 33/53
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
1
1,., »
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР (21 ) 41 919 60/28-1 4 (22) 06. 02. 87 (46) 23.08,89. Бюл, 1т 31 (71) 2-й Московский госyäëðñòçå«»«t««й медицинский институт им. Н.И.: про. а,(72) М,А.Стенина, А.А.Хакуаг«ен
H А.Ю,Скрипник (53) 612.015 (088,8) (56) Лабораторное де "с, 1985, )г 1 . „ с, 62 -630. (54) С11ОСОБ ОЦЕНКИ ПРОЛ«1ФЕРАНИ1; 31»«1ФОЦИТОВ (57) Изобретение относится к мед«»ц 1не, н частности к способам диагнасИзобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, Цель изобретения — количественная оценка нару«««ений интенсивности пралиферации.
Способ осуществляют следующим абразом.
К мононуклеарным клеткам крокH Iio.бавляют конканавалин А н дозах О, 2, 5 и 10 мкг/мп, культивируют клетки
72 ч при 37 С, добавляют к ним H-тимидин за 4 ч до окончания ку«льтиниравания, переносят на стекловолоконные фильтры, на сцинтилляционном счетчике определяют уровень связанной с клетками радиоактинности, регистрируют показатели интенсивности пролиферации в виде углов наклона к аси абсцисс кривой роста уровня, связанной с клетками радиоактивности при изменении доз конканавалина А от О до 2 от 2 до 5 и от 5 до 10 мкг/мл тики н, «,-н««я прап«;. »,:- ll;! f!f 1»му
КаМ.-. «те« "НЫХ КЛЕТОК. 1«Е Ib ff аб; Ст-.
Нпя - К, .1ИЧЕСтНЕННая С>«пс Гтяа т»; тЕН.-ч« «,>с l l пра:;!« cpa!1«f«» лимфапитон те.. ",;а — цасти« ается пу гег. 1«кмерен«.: интт нс« 1»ости прап«»ферс»ц»»г»;«11,!,л балле««ии канканавалина А н дозах
f э, 10 мкгт мл и апреле- ния углов
««ЗКЛа«»а К пС!! абецИС ПряМ«Х, СаЕ>11-.— ня «t. щ«»:: = !!;t че!f ия «««l тeн с ив Ht ти II, »фа1> с ° >Ill lit Пр. >» дС и 1 О и; 1-/f»-l, Гт„,н 1, ° ««:тс- с г т >н 1;;:,к— ттс>11 - . - . t× "f И« 1» 1Г- lт я iннi- Hlf I П«С1 С Р 1! неч«»ю с,«а;;май скщетс.;катку»» нару«««Е«11>1»:;раЛИЛЕратИННЫХ ПрОцЕС Or
1»Л .
И .раННИНаЮт »ГХ С Крнвай, т«а.-«уHt ННС,; при культикиранании нагма. ьных «с. .:— так, На фиг.» принелены данные с.-:1 »д ления динамики изменения наклона к аси абсцисс кривой раста урания рад«»аактиннс>ст«» при измс-;ненни ",с>3«l k»1»таг ена двух здаран«гх да««ораг«; ..а фиг. 2 — дан «ые опрс-д ления иптe««:.инности пралиферац«»и н группе -.,даровых донарон и больньгх а"..трой иненмс— нией.
П р и и е р 1. Кров дкух здароных данарон, взятую н ксличестнс
5 мл, разводят физиалс>гит«еск11««раствором н 2 раза, насла«»ка« т на с ft..cf, фикаллнераграфии (плотность и;лу;е«lного раствора 1,0$), цечтрифуl и; нри 1000 об/мин 45 мин, cvбпрают фракции мононуклеарных клеток, скснцентриронаншихся над слоем фикалла .
После днухкратнай отмывки н физислс
15О 3(1
ГИЧЕСКОМ раСтпорЕ М 1» е!НуКЛЕярп».»Е клетки ресуспендируют в среде 19с), дополненной эмбриональной Tt.!ячьеи сывороткой (57.), пенициллином (100 Ед/мл), стрептс мицином . 1()О 1е
/мл), гентамицином (2 м! /мл) и ло «,»"дят их концентрацию до 1 10 в 1»!»1.
Мононуклеарные клетки кажг!Ог с донора культивируют 72 ч в ячейках планшета для иммунологических пс следований, в которые добавляют по 0,02 мл конканавалина A в следующих концентрациях: О, 2, 5 и 10 мкг/мл.
3а 4 ч до окончания культивирования в ячейки вносят по 0,02 мл H-тимидина, а затем содержимое ячеек с помощью автоматического сборщика клеток переносят на стекловолоконные фильтры. Фильтры помещают во фг!эког!ы со сцинтилляционной жидкостью и на сцинтилляционном счетчике на каждом фильтре определяют уровень, связанный с клетками радиоактивности (имп/мин/10 клеток). Определяют уро5 вень, связанный с кле ткями радиоактивности, для каждой дозы митогена и углы наклона к оси абсцисс кривой измельчения величины пролиферации.
Доноры отличаются между собой по ве-личине углов наклона этой кривой при увеличении дозы конканавалина А от
0 до 2, от 2 до 5, от 5 до 10 мкг/1 и (фиг.г), Пример 2. Проводят исспедс вание интенсивности пролиферации
f! гр y !, ll 3 1 1 зг(орОВ»!х ДОИ IpoB и л «11l.i Острой п»»евме»»1!!е1!. Сред1!»о ве 1»;ины углов наклона у зпоровых 1 - п и больных острой пневмонией
»: " IfIppH0 пе различались, Однако
;»и: ямикя этого показателя в обеих группах была достоверно различной: зд. ровь»е доноры отвечают увеличением
1О интенсивности пролиферации на увеличение дозы митогена от 2 до 5 мкг/м !.
Однако пролиферятивный процесс лимфоцитон бсльных острой пневмонией отл»гче»ется одинаковыми значениями уг15 лов наклона при всех дозах митогена (фиг,2).
Ф О р м у л а и з о б р е т е н и я !
Способ оценки пролиферации лимфо20 цитов путем реакции блястной транс:формации, индуцировянной митогеном, С ПОСЛЕДУЮЩЕЙ ОЦЕНКС и »»»тЕ»1С»1н»1ОСтн пролиферации, О т л и ч а ю щ и и
t- я тем, что, с целью кол»чествс « .f!
Оц нки нарушений интенсивности пролиферации, в качестве митогеня ис— по:!ьзуют ко»»ка»»явялин А, строят гряфИ»е:1
gef .!»и пинают по и.»мепен!гю ве.IH иглы углов наклона к Оси аб ..цисс прям>.!х, со .д»п»як»щих налепив и«теис!!Иности
«ропиферяпии нри дозах конканавалиня 2 мкг/мл, 2 и 5 мкг/мл, 5 и
4 мкг/мл в i.ð»111»»е»»ии с: показателям»1 кt: Hтр Оле . дО ) ОЗыР дОНО )Б/
Больные ocmpou ю еУ/;"о вием
О-Z Г-1 5-10
Итер3ал ия ю,чу я дозы мип огена
А г. 2
Редактор С.Пекарь
Техреду М.Ходаннч
Корректор M,Âàcèëüåâä
Заказ 5080/55 Тираж 789 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Проиэводственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101
