Набор питательных сред для диагностики урогенитальных инфекций и определения чувствительности к антибиотикам

Полезная модель относится к медицине, а именно, к лабораторной диагностике. Предлагаемая полезная модель представляет собой набор питательных сред для диагностики 4 видов урогенитальных микоплазм: U.urealyticum, М. hominis, T.vaginalis и M.genitalium, выделенных из клинического материала (моча, вагинальные пробы, сперма). Специфическое действие питательных сред обеспечено необходимыми ростовыми субстанциями; внесение индикаторов роста обеспечивает индивидуальное изменение цвета среды, характерное для каждой культуры. Полистироловый 96-луночный стрипированный планшет (6 пар стрипов), сорбированный 7 антибиотиками в 2 пограничных состояниях позволяет визуально оценивать антибиотикочувствительность каждой выделенной культуры. Специфическая активность компонентов набора отконтролирована стандартными штаммами U.urealyticum, М. hominis, T.vaginalis и M.genitalium.

Полезная модель относится к медицине, а именно к лабораторной (культуральной) диагностике.

Поражения органов мочеполовой системы микоплазменной этиологии за последнее время значительно участились и составляют более 40% всех воспалительных заболеваний мочеполовых органов. Они имеют упорное течение, часто рецидивируют, способствуют появлению осложнений. Многочисленные работы свидетельствуют о значительной распространенности микоплазма-инфекций при трихомонадных, гонококковых и хламидийных поражениях мочеполового тракта, острых и хронических воспалениях женской генитальной сферы невыясненной этиологии, патологии беременности и плода (Preundt, 1984, и др.). Большинство видов микоплазм человека являются комменсалами. Другие виды (М. pneumoniae, M. hominis, U. urealyticum, M. fermentans, M. penetrans) обладают потенциальной патогенностью. Микоплазмы относят к латентным инфекционным агентам, приводящим к развитию «оппортунистических инфекций», развивающихся в условиях, когда иммунная система организма-хозяина оказывается ослабленной или неадекватной. В этих условиях микоплазмы приводят к развитию патологических процессов, как воспалительных, так и аутоиммунных. Микоплазмы часто входят в состав смешанных инфекций. По отношению к другим микроорганизмам микоплазмы выступают как синергисты, а в ряде случае - как триггеры (И.Ю.Феофанова - Некоторые вопросы патогенеза внутриутробных инфекций - Ж. Лечащий врач, №10, 2004).

Как правило, при урогенитальных микоплазмозах преобладают малосимптомные формы, поэтому разноречивы данные об инкубационном периоде, что объясняется тем, что у многих больных, особенно у состоящих в браке, не всегда можно точно установить время заражения. В связи с этим лабораторная диагностика играет решающую роль в распознавании урогенитальных микоплазмозов.

При диагностике микоплазмозов в настоящее время используют четыре группы методов: культуральные; цитологические; методы, в основе которых

лежат иммунологические реакции и методы, использующие принципы молекулярной биологии. Наиболее специфичным признан классический бактериологический метод.

Ростовые среды для культивирования микоплазм имеют сложный состав и содержат как природные, так и синтетические компоненты. Качественное приготовление таких сред в бактериологических лабораториях клиник весьма затруднительно. Фирма bioMerieux (Франция) поставляет на российский рынок готовый набор питательных сред для выделения М. hominis, и U. urealyticum ("Mycoplasma-IST2" набор). Содержимое набора: R1 - среда, предназначенная для первичных посевов клинических образцов, а также в качестве транспортной среды, что необходимо для сохранения жизнеспособности микоплазм в случаях, когда посев на питательный агар непосредственно после взятия образцов затруднен; R2 - лиофилизированный мочевино-аргининовый бульон, растворяемый в 3 мл R1; R3 - стрип для определения обсемененности образца и теста на чувствительность к антибиотикам. Стрип содержит 22 теста и разделен на 3 секции:

1 секция предназначена для идентификации возбудителя (1-я лунка - контроль роста; 2-я - идентификация U. urealyticum; 3-я - идентификация М. hominis);

2-я секция (лунки 4 и 5) предназначена для определения количества микоплазм и подсчета жизнеспособных клеток;

3-я секция (лунки с 6 по 22) используют для определения чувствительносьт штаммов к 9 антибиотикам (представленным в двух пороговых разведениях): доксициклину, джозамицину, офлоксацину, эритромицину, тетрациклину, ципрофлоксацину, азитромицину, кларитромицину, принстамицину.

Для проведения исследований необходимы следующие реагенты и материалы, не входящие в состав набора:

1. минеральное масло;

2. микоплазма-агар А7 (фирмы bioMerieux)

Однако предлагаемый набор имеет ряд существенных недостатков:

- набор предназначен для диагностики только двух видов возбудителей;

- высока стоимость набора и, соответственно, каждого проводимого исследования;

- наличие транспортной среды с последующим переносом в лиофилизированный бульон предполагает:

а) дополнительный технологический процесс, обусловливающий опасность контаминации другими микроорганизмами,

б) увеличивает опасность получения ложных результатов, если нарушен температурный (2°-25°С) или временной (5-48 часов) режимы;

- при низком титре пробы изменение цвета в диагностически значимом спектре (от оранжевого до красного) может отсутствовать, что может обусловить ложноотрицательный результат;

- затруднения в дифференциальной диагностике между U.urealyticum и М. hominis, обусловленные наличием единой среды для двух культур;

- дополнительные затраты на реагенты и материалы, не входящие в состав набора, но необходимые для исследований;

Вышеперечисленные недостатки затрудняют широкое использование набора в практическом здравоохранении.

Поставлена задача разработки набора питательных сред для диагностики урогенитальных инфекций и определения чувствительности к антибиотикам.

Поставленная задача осуществляется посредством предлагаемого набора, рассчитанного на обследование 5 пациентов по 4 урогенитальным инфекциям, в состав которого входят следующие реагенты:

- питательная среда для диагностики U.urealyticum - 5 флаконов по 2,5 мл, готовые к употреблению;

- питательная среда для диагностики М. hominis - 5 флаконов по 2,5 мл, готовые к употреблению;

- питательная среда для диагностики T.vaginalis - 5 флаконов по 2,5 мл, готовые к употреблению;

- питательная среда для диагностики M.genitalium - 5 флаконов по 2,5 мл, готовые к употреблению;

- полистироловый 96-луночный планшет (6 пар стрипов) сорбированный 7 антибиотиками (эритромицин, офлоксацин, левофлоксацин, доксициклин, ципрофлоксацин, азитромицин, кларитромицин) в 2-х пограничных концентрациях;

- масло вазелиновое (стерильное) - 1 флакон, 10 мл, готово к употреблению.

Специфическое действие питательных сред для диагностики указанных возбудителей урогенитальных инфекций обеспечено необходимыми ростовыми субстанциями:

- питательная среда для диагностики U.urealyticum содержит богатую питательную основу, мочевину, играющую роль в метаболизме возбудителя и индикатор роста - бромтимоловый синий, изменяющий цвет среды от лимонно-желтого до зеленого или синего в зависимости от концентрации возбудителя.

- питательная среда для диагностики М. hominis содержит богатую питательную основу, аргинин и индикатор - феноловый красный, который, в зависимости от количества возбудителя, изменяет цвет среды от оранжевого до желтого или малинового.

- питательная среда для диагностики T.vaginalis содержит МПБ, минеральные соли, сахара, сыворотку крови животных, что обеспечивает придонный рост трихомонад в виде плотного беловатого осадка.

- питательная среда для диагностики M.genitalium содержит питательные компоненты и обогащающие добавки (инфуз сердечной мышцы, дрожжевой аутолизат, лошадиную сыворотку, цистеин, индикатор (феноловый красный), субстрат (глюкоза) и антибиотики, подавляющие рост контамината.

Проведение анализа.

Пробы биологического материала (уретральные, вагинальные, моча. сперма) немедленно вносят во флаконы со средами для диагностики указанных возбудителей, соблюдая стерильные условия. Флаконы с пробами (не менее, чем через час после внесения) помещают в термостат, поддерживающий температуру 37°С на 24-72 ч. При наличии роста T.vaginalis во флаконе образуется плотный осадок белого цвета. При наличии роста микоплазм (определяется по изменению цвета среды) проводят определение их чувствительности к антибиотикам с помощью планшета, по прилагаемой схеме: из флакона со средой переносят 0,2 мл в новый флакон с соответствующей средой. Содержимое тщательно перемешивают встряхиванием и разливают во все лунки стрипа по 0,2 мл с помощью пипетки. Затем в каждую лунку стрипа вносят по 2 капли стерильного вазелинового масла, закрывают липкой лентой и инкубируют в термостате при 37°С в течение 24-72 часов.

Определение антибиотикочувствительности проводят визуально и оценивают как:

- чувствительная, если отсутствует рост в ячейках с малой и большой концентрацией;

- устойчивая, если наблюдается рост в обеих ячейках;

- умеренно-устойчивая, при наличии роста в ячейке с меньшей концентрацией и отсутствии роста в ячейках с большей концентрацией антибиотика.

Таким образом, предлагаемая полезная модель позволяет:

- одновременно провести диагностику по 4 видам урогенитальных инфекций;

- исключены дополнительные затраты на дополнительные реагенты и материалы, что снижает стоимость набора;

- отсутствие транспортной среды исключает технологическую стадию переноса исследуемого клинического материала и, как возможное следствие, дополнительную опасность контаминации, что повышает специфичность диагностики;

- наличие среды для каждого из 4-х урогенитальных инфекций повышает точность и специфичность исследования;

- использование предлагаемого набора возможно в любой КДЛ и кабинетах анонимного обследования, что позволяет считать проводимые исследования скрининговыми.

Набор питательных сред для диагностики урогенитальных инфекций и определения чувствительности к антибиотикам, включающий лунки со стрипами для определения чувствительности к антибиотикам и питательные среды, отличающийся тем, что он дополнительно содержит флаконы с питательной средой для диагностики T.vaginalis, флаконы с питательной средой для диагностики M.Genitalium, флаконы со стерильным вазелиновым маслом, а также планшет с лунками со стрипами для определения чувствительности к антибиотикам, сорбированный антибиотиками.