Планшет "ифа-впг-2-igg" для выявления иммуноглобулинов класса g к вирусу простого герпеса ii типа

 

Полезная модель относится к медицинской промышленности, в частности к биотехнологии, вирусологии иммунологии, для качественного и полуколичественного определения иммуноглобулинов класса IgG к вирусу простого герпеса II типа. Техническим результатом полезной модели является устранение недостатков аналога и создания удобного и практичного планшета для выявления иммуноглобулинов класса G к вирусу простого герпеса II типа быстро с большой вероятностью (99% и более) в условиях сельских или подвижных лабораторий, совершенствование приготовления тест-системы, при повышении чувствительности и специфичности. Указанный результат достигается тем, что планшет для определения иммуноглобулинов класса IgG к вирусу простого герпеса 2 типа, выполнен из полистирола с сорбированным на поверхности лунок антигеном вируса герпеса 2 типа и реагентами, при этом планшет выполнен в виде корпуса и набора съемных полос с цилиндрическими или, выполненными в виде параллелепипеда лунками, высотой не менее 10 мм и толщиной стенки лунки не менее 1 мм, в качестве антигена, сорбированного на поверхности лунок, он содержит высокоиммуногенные белки вируса герпеса 2 типа в виде полного лизатного очищенного антигена и водного раствора солей натрия: натрия фосфорнокислого двузамещеного 12-водного, натрия фосфорнокислого однозамещенного 2-водного, натрия хлорида, детергент в виде твин-20 или твин-80 или сорбиталь Л-20, с добавлением казеина, натрия азид, фетальной сыворотки, при этом он упакован в герметичную упаковку.

Полезная модель относится к медицинской промышленности, в частности к биотехнологии, вирусологии иммунологии, для качественного и полуколичественного определения иммуноглобулинов класса IgG к вирусу простого герпеса II типа.

Известен набор для выявления антител класса IgG к вирусу простого герпеса 2 типа «ДС-ИФА-Анти-ВПГ-2-G» по ТУ 9398-028-05941003-2006, производства НПО «Диагностические системы». Набор содержит неразборный планшет и набор реагентов во флаконах.

Недостатком является большие размеры планшета и всего набора в целом, высокая стоимость невысокая эффективность выявления вируса при его использовании для проведения теста из-за пластика и формы планшета.

Техническим результатом полезной модели является устранение недостатков аналога и создания удобного и практичного планшета для выявления иммуноглобулинов класса G к вирусу простого герпеса II типа быстро с большой вероятностью (99% и более) в условиях сельских или подвижных лабораторий, совершенствование приготовления тест-системы, при повышении чувствительности и специфичности.

Указанный результат достигается тем, что планшет для определения иммуноглобулинов класса IgG к вирусу простого герпеса 2 типа, выполнен из полистирола с сорбированным на поверхности лунок антигеном вируса герпеса 2 типа и реагентами, при этом планшет выполнен в виде корпуса и набора съемных полос с цилиндрическими или, выполненными в виде параллелепипеда лунками, высотой не менее 10 мм и толщиной стенки лунки не менее 1 мм, в качестве антигена, сорбированного на поверхности лунок, он содержит высокоиммуногенные белки вируса герпеса 2 типа в виде полного лизатного очищенного антигена и водного раствора солей натрия: натрия фосфорнокислого двузамещеного 12-водного, натрия фосфорнокислого однозамещенного 2-водного, натрия хлорида, детергент в виде твин-20 или твин-80 или сорбиталь Л-20, с добавлением казеина, натрия азид, фетальной сыворотки, при этом он упакован в герметичную упаковку.

Планшет содержит не менее 10 полос с не менее 8 лунками в каждой полосе.

В упаковке дополнительно содержится реагент - жидкая сыворотка крови человека, содержащая иммуноглобулины класса G к вирусу простого герпеса 2 типа в титре 1:500, инактивированная прогреванием при 56°С в течение 2 ч,

В упаковке дополнительно содержится реагент - коньюгат, в качестве которого используется антитела моноклональные мышиные против иммуноглобулинов человека класса G, меченые пероксидазой хрена.

Герметичная упаковка выполнена в виде пленки с клейкой лентой, наконечники для пипеток и пластиковые ванночки для реагентов.

В герметичной упаковке дополнительно содержатся наконечники для пипеток и пластиковые ванночки для реагентов.

Съемные полосы могут быть снабжены фиксаторами

Данный планшет используется следующим образом. Вскрывают упаковку и достают из пакета рамку планшета с необходимым числом стрипов - количеством полос с лунками, на пипетки одевают наконечники. Неиспользованные стрипы допускается хранить в плотно закрытом пакете с влагопоглотителем при температуре от 2 до 8°С до истечения срока годности.

Планшет выполнен в виде корпуса и набора съемных полос с цилиндрическими или параллелепипедными лунками, высотой не менее 10 мм и толщиной стенки лунки не менее 1 мм, а в качестве антигена, сорбированного на поверхности лунок, он содержит высокоиммуногенные белки вируса герпеса 2 типа в виде полного лизатного очищенного антигена и водного раствора солей натрия: натрия фосфорнокислого двузамещеного 12-водного, натрия фосфорнокислого однозамещенного 2-водного, натрия хлорида, детергент в виде твин-20 или твин-80 или сорбиталь Л-20, с добавлением казеина, натрия азид, фетальной сыворотки, при этом он упакован в герметичную упаковку. При таком исполнении не происходит влияние пластика и формы лунок планшета на результаты исследований (преломление лучей), и являются оптимальными для упрощения работы лаборанта с пипетками.

При использовании одного стрипа в одну лунку вносят 100 мкл РРО, в три последующие лунки - по 100 мкл К+, К+пор и К-, в остальные лунки - по 100 мкл предварительно разведенных (1:100) исследуемых образцов (при использовании вспомогательного планшета для разведения исследуемых образцов в эти лунки внести вначале по 90 мкл РРО, а затем - по 10 мкл сывороток, предварительно разведенных 1:10 во вспомогательном планшете).

При использовании двух и более стрипов в одну лунку внести 100 мкл раствора для разведения образцов (РРО), в следующие лунки вносят по 100 мкл положительного контроля (К+), контрольного образца (К+пор) и отрицательного контроля (К- ) (по две лунки на каждый контрольный образец). В остальные лунки вносят по 100 мкл разведенных (1:100) исследуемых сывороток (при использовании вспомогательного планшета для разведения исследуемых образцов в эти лунки внести вначале по 90 мкл РРО, а затем - по 10 мкл сывороток, предварительно разведенных 1:10 во вспомогательном планшете)

Отрезают пленку требуемого размера и закрывают лунки планшета, плотно прижав пленку.

Инкубируют планшет с необходимым количеством полос с лунками 30 минут при температуре от 21 до 25°С в защищенном от света месте.

С помощью промывателя удаляют образцы из лунок, 4 раза промывают планшет ФСБ-Т, внося в лунки 350-370 мкл раствора. По окончании промывки удаляют влагу из лунок, постукивая планшетом по фильтровальной бумаге, положенной на полиэтиленовую пленку.

При ручной отмывке заполненные ФСБ-Т лунки выдерживают не менее 30 с.

Во все лунки планшета вносят по 100 мкл конъюгата, заклеивают пленкой, инкубируют 30 минут при температуре от 21 до 25°С в защищенном от света месте.

С помощью промывателя удаляют содержимое лунок, 4 раза промывают планшет.

В лунки вносится по 100 мкл раствора индикаторного и помешают планшет в защищенное от света место и инкубируют 10-15 минут при температуре от 21 до 25°С.

В лунки (в той же последовательности, с которой вносился раствор индикаторный) вносят по 100 мкл солей натрия, перемешивают содержимое лунок и не более чем через 10 мин приступают к учету результатов.

Результаты регистрируют спектрофотометрически, измеряя оптическую плотность (ОП) при двух длинах волн - 450 нм и 620-650 нм. При отсутствии референс-фильтра на 620-650 нм оптическую плотность (ОП) измеряют при длине волны 450 нм, а выведение спектрофотометра на нулевой уровень ("бланк") осуществляют по лунке А1.

При наличии в исследуемом образце иммуноглобулинов класса G к вирусу простого герпеса I, II типа (ВПГ-1, ВПГ-2) они во время первой инкубации связываются с антигеном, сорбированным на поверхности лунок полистиролового планшета. Этот комплекс во время второй инкубации связывается с конъюгатом - антителами против IgG человека, меченными пероксидазой хрена. Далее, после добавления индикаторного раствора (хромоген - тетраметилбензидин) в результате ферментативной реакции реакционная смесь в лунках планшета окрашивается пропорционально концентрации антител класса G к ВПГ-1, ВПГ-2. Реакция останавливается добавлением стоп-реагента. Интенсивность окрашивания (оптическая плотность) регистрируется с помощью спектрофотометра.

Результаты оценивают если: среднее значение ОПК+ - не менее 0,60; среднее значение ОПК+пор - не менее 0,20; отношение среднего значения ОПК+ к среднему значению ОПК+пор - не менее 1,5; среднее значение ОПК- - не более 0,10. В противном случае исследование необходимо повторить.

Результаты считать положительными, если ОПобразца больше 1,1×ОПК+пор; отрицательными, если ОПобразца меньше 0,9×ОПК+пор; сомнительными, если ОПобразца = (1+0,1)×ОПК+пор. При получении сомнительных результатов сыворотки рекомендуется исследовать повторно в двух лунках планшета. Если результаты опять попадут в пределы сомнительных, следует провести тестирование сывороток, отобранных через 2-4 недели. Если и в данном случае результаты попадут в пределы сомнительных, образцы сывороток считать отрицательными.

Для определения титра антител класса G к ВПГ-2 на стандартном бланке строится калибровочный график. Для этого по оси абцисс (логарифмическая шкала) откладываются значения титров К+ (1:500) и К+пор (1:100), а по оси ординат (пропорциональная шкала) -соответствующие им средние значения ОП, полученные в ИФА. Полученные точки соединяются прямой линией. Титр антител в исследуемом образце определяется по калибровочному графику как абсцисса точки, ордината которой равна полученному в ИФА значению ОП.

Если ОП образца превышает ОПК+, для более точного определения титра рекомендуется при повторном анализе развести данный образец дополнительно в 4 раза (конечное разведение 1:400). Повторить анализ и полученное по графику значение титра увеличить в 4 раза.

Преимуществами разработанного планшета является высокая чувствительность и специфичность, готовность к работе в любых лабораториях. Отсутствие необходимости уничтожения неиспользованных стрипов планшета, благодаря наличию упаковочного и дополнительного стерильного материала (наконечников, ванночек, пленки и клейкой ленты). Все реагенты готовы к использованию и не требуют предварительных разведений. Планшет может быть использован для полуколичественного определения анти-HSV2 с целью изучения иммунного статуса населения.

1. Планшет для определения иммуноглобулинов класса IgG к вирусу простого герпеса 2 типа, выполненный из полистирола с сорбированным на поверхности лунок антигеном, при этом планшет выполнен в виде корпуса и набора съемных полос с цилиндрическими или выполненными в виде параллелепипеда лунками высотой не менее 10 мм и толщиной стенки лунки не менее 1 мм, съемные полосы снабжены фиксаторами, планшет содержит не менее 10 полос с не менее 8 лунками в каждой, в качестве антигена, сорбированного на поверхности лунок, он содержит белки вируса герпеса 2 типа.

2. Планшет по п.1, отличающийся тем, что он может быть упакован в герметичную упаковку.

3. Планшет по п.2, отличающийся тем, что в упаковке могут дополнительно содержаться: реагент - жидкая сыворотка крови человека, содержащая иммуноглобулины класса G к вирусу простого герпеса 2 типа в титре 1:500, инактивированная прогреванием при 56°C в течение 2 ч; реагент - коньюгат, в качестве которого используется антитела моноклональные мышиные против иммуноглобулинов человека класса G, меченые пероксидазой хрена.

4. Планшет по п.2, отличающийся тем, что герметичная упаковка выполнена в виде пленки с клейкой лентой.

5. Планшет по п.2, отличающийся тем, что в герметичной упаковке могут дополнительно содержаться наконечники для пипеток и пластиковые ванночки для реагентов.



 

Похожие патенты:

Полезная модель относится к медицине, в частности, к клинической лабораторной диагностике и касается диагностики возбудителей инфекций TORCH-группы (токсоплазмоза, краснухи, цитомегаловируса, герпеса первого и второго типов)

Изобретение относится к области охраны окружающей среды, преимущественно к устройствам для оценки степени загрязненности донных отложений, при проведении рекогносцировочных обследований донных отложений поверхностных водных объектов, загрязненных нефтью и нефтепродуктами

Изобретение относится к устройствам для сбора, отведения, аккумулирования и очистки ливневых сточных вод и может быть использовано в коммунальном хозяйстве городов и промышленных предприятий при стесненных условиях канализируемой территории
Наверх