Способ определения шигелл zonne в молоке
ОП ИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6! ) Дополнительное к авт. свнд-ву(22) Заявлено 05.03.81 (21) 3258713/28-13
< 11,992571
Саеоз Соеетсммк
Соцйаанстнчеаанк
Ресвубянк (5l)N. Кл.
С 12 ф 1/04 с присоединением заявки М
Гаеумувтвюва twNTet
CCCt ю аваэш 1364фвтвввй в еткумткй (23)прноритет(53) Удт(576..8.093.1 (088.8) Опубликовано 30.01 ° 83. тиоллетень М 4
Дата опубликования описания 30. 01. 83 (?2) Авторы изобретения
А.И, Минеев и Н.Н. Расстегаева
Горьковский медицинский институт им. С.И. Кирова (11) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ШИГЕЛЛ ZONNE
8 МОЛОКЕ
Изобретение относится к микробиологии и .может быть использовано для определения дизентерийного возбудителя шигелл Zonne в молоке.
Известен способ определения шигелл
Zcene в молоке путем посева исследуемого материала в. среду Кесслера с последующими пересевом на плотные дифференциальные среды Зндо или. Левина и исследованием вырасших колоний 1 1i
Однако известный способ обладает низкой чувствительностью.
Известен также способ определения шигелл Zonne в молоке путем посева .исследуемого материала в среду обо" гащения инкубирования:посевов с по,следующим пересевом на дифференциально-диагностические среды и иденти. фикации выделенных микроорганизмов 1.23.
Однако известный способ обладает низкой чувствительностью и позволяет обнаружить шигеллы Zonne в пробах молока лишь при наличии более 1000
2 микробных клеток в 1 мл молока, причем процент высеваемости возбудителя невелик и составляет всего 283.
Цель изобретения - повышение чувствительности способа.
Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения шигелп Zonne в молоке путем посева исследуемого материала в среду обогащения, инкубирования посевов с последующим пересевом на дифференциальнодиагностические среды и идентификации выделенных микроорганизмов, моло.ко предварительно сбраживают с помощью сычужного фермента, отделяют сыворотку, разводят ее в 5- 10 раз физиологическим раствором, разведенную сыворотку вводят в количестве
О, 1-0,2 мл в аллантоисную полость куриного эмбриона, используемого в качестве среды обогащения, и инкубирование осуществляют при 40-42 С в о течение 12-13 ч.:
2571 4 жидкость засевают на дифференциальнодиагностическую среду. Далее проводят идентификацию подозрительных колоний по биохимическим и серологическим
s признакам. Результаты идентификации:
Лактоэа
Глюкоза +
Мочевина
Сахароза
Подвижность
Индол
Ливис бактериофагом +
Реакция агглютинации +
ККП +
С помощью предлагаемого способа в молоке обнаружены возбудители дизентерии-шигеллы 2оппе. Известными
20 же способами выявить возбудителя не удается. Предлагаемый способ является высоко чувствительным: минимально определяемая доза заражения молока25 10 микробных клеток в 1 мл, т.е. в
100 раз меньше, чем в известном способе (1000 микробных клеток в мф).
Кроме того, процент высева шигелл из молока при применении предлагаемого зо способа на 65-954 выше (в зависимости от дозы заражения) (см. таблицу).
Результаты определения шигелл Zonн пе в пробах искусственно зараженного молока с помощью предлагаемого и изз> вестного способов, приведены в таблице.
Количество положительных результатов, 3, в способе
Предлагаемый
Доза заражения молока, микробных клеток в 1 мл
Известный
95.
58
100
100 000 l0 000
100
1 000
95 . 95
100
3 99
Предлагаемый способ осуществляет-, ся следующим образом.
Молоко, в,котором определяют шиге.плы Zonne, сбраживают. Затем отде.пяют сыворотку и разводят ее в
5- 1О раз физиологическим раствором.
Подготовленную таким образом сыворотку вводят в аллонтоисную полость
9-lO дневного куриного эмбриона при помощи шприца. Эмбрион инкубируют при 40-42ОС в течение 12-13 ч. 3*.тем отсасывают аллантоисную жидкость пастеровской пипеткой и засевают на дифференциально-диагностические среды, Далее шигеллы идентифицируют путем постановки реакции агглютинации с адсорбированной агглютинирующей сывороткой к шигеллам Zonne, а также по биохимическим признакам.
Пример. Исследуют молоко на содержание возбудителя дизентерии.
С помощью известного способа показано, что шигелл Zonne в молоке нет.
Для уточнения проведено дополнительное исследование молока предлагаемым способом. Для этого к 5 мл молока добавляют 0,1 мл 13-ного сычужного фермента и термостатируют при 37 С в течение 20 мин. Затем отделяют сы" воротку, разводят ее стерильным физиологическим раствором в 10 раз и вводят шприцем в аллонтоисную полость
9 дневного куриного эмбриона. Эмбрио инкубируют l2 ч при1 42 С, после чео
ro вскрывают и отсасывают аллонтоисную жидкость пастеровской пипеткой.
При использовании предлагаемого способа значительно облегчается иден- 55 тификация атиПичных штаммов шигелл
Zonne при постановке реакций агглютинации.
Предлагаемый способ может широко использоваться в практических лабораториях санэпидемстанций для обнаружения зараженного молока дизентерийным возбудителем при малых его
Составитель С. Иалютина
Редактор 6. Ковач Техред С, Мигунова . Корректор И. Коста
Тираж 521 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Иосква, И-35, Раушская наб., д. 4/5
Заказ 371/31
Филиал OllA "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4
5 . 992571. 6 концентрациях. Это поможет своевре- ротку, разводят ее в 5-10 раз физиоменно выявить очаг заражения и пред- логическим раствором, разведенную . отвратить дальнейшее распростране- сыворотку вводят в количестве 0,1ние инфекции. - .. 0,2 мл в аллантоисную полость курино- в го эмбриона, используемого в качестве среды обогащения, и инкубирование формула изобретения осуществляют при 40-42+C в течение
12-13 ч.
Способ определения шигелл Zanne в молоке путем посева исследуемого 14 Источники информации, материала в среду обогащения, инку-. принятые во внимание при экспертизе бирования посевов с йоследующими пе- 1. Справочник по.микробиологичес" ресевом на дифференциально-диагности- ким и вирусологическим методам иссле» ческие среды и идентификации выделен- дования. Под ред. И.Б. Биргера. И., ных микроорганизмов., о т л и ч à e - ->> "Иедицина", 1973, с. 416-418. шийся тем, что, с целью повыше- . 2. Сидоренко Г.И. Иетоды санитарнония чувствительности способа, молоко микробиологического исследования предварительно сбраживают с помощью - объектов окружающей среды. И., "Месычужного фермента, отделяют сыво- дицина", 1978, с. 179-180.