Способ определения термолабильных вирусотропных ингибиторов

Ь1иал Йотека ("::" " ..А юе,,780261

ОП ИСАНИЕ

И 306РЕТЕ Н ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

COIO3 COBOTCKNX

Социалмстических

Республик (61) Дополнительное к авт. сеид-ву (22) Заявлено 06. 06. 79 (21) 2766904/28-13 (51)М. Кл.

А 61 В 10/00 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Гоеуааретвенный квинтет

СССР

II0 делам изебретеннй н вткрытнй

Опубликовано 07. 09. 81. Бюллетень № 3

Дата опубликования описания 09.09.81 (53) УДК 616-07 (088. 8) i (72) Авторы изобретения

P. Й. Авророва и Е. П. Москаленко

Ростовский государственный, медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ -ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕРМОЛАБИЛЬНЫХ ВИРУСОТРОПНЫХ

ИНГИБИТОРОВ

Изобретение относится. к медицине, в частности. к области микробиологии и может применяться в массовых иммунологических исследованиях, которые необходимы для правильной оценки воспри- имчивости населения к вирусным инфекциям (гриппу и другим ОРЗ вирусной этиологии).

Известен. способ определения термолабильных вирусоитропных ингибиторов в РТГА.ингибиторочувствительиого виру10 са гриппа Al у людей, не содержащих антител к вирусу гриппа Al (11.

Недостатком указанного способа определения термолабильных ингибиторов : "lS у людей является ограниченность его использовайия из-за необходимости спе- циального подбора контингента лиц, не соДержащих антител к вирусу гриппа, 20 с помощью которого они определяются, что значительно снижает чувствительI ность метода, а также определенная сложность постановки 1 ТГА в связи с

2 необхоцимостью использовать нативные куриные эритроциты.

Целью изобретения является повышение чувствительности и упрощение способа определения термолабильных вирусотропных ингибиторов сыворотки.

Эта цель достигается тем, что для определения термолабильных вирусотропных ингибиторов, к сыворотке крови добавляют взвесь хлопьеобразующих дрожжей Saccharomyces сегечiз1ai и нормальную лошадиную сыворотку, смесь выдерживают в течение 1-2 час при температуре 20-22 С и по образованию о хлопьевидного осадка определяют наличие термолабильных вирусотропных ингибиторов.

Способ осуществляют следующим. образом.

У обследуемых людей забирают кровь из вены в количестве .1-2 мл и приготавливают сыворотку, в которой наряду с антителами определяют термолабильные ингибиторы. Сыворотку разводят в

30

3 - 7802

0,025 мл физиологического раствора хлористого натрия, начиная с 1:5 до I:320 в лунках полистироловых пластин, затем в каждую лунку добавляют нормальную лошадиную сыворотку (разведенную .1:40) в количестве 0,025 мл и 34-миллиардную взвесь хлопьеобразующего штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiai (по стандарту мутности для кишечных бактерий) также по 0,025 мл. Смеси !О встряхивают и оставляют на 2 час при

20-22 С для оседания дрожжей.

Положительным считается результат, при котором дрожжи выпадают в виде хлопьев на дно лунки, выстилая его. t-5

-При отрицательном результате дрожжи оседают в виде колечка или круга с ровными краями.

Лица, сыворотка которых не содержит термолабильных ингибиторов или 20 еодержит их в разведении, меньшем

1 .20,являются потенциально восприимчивыми к гриппу и другим 0Р3 вирусной этиологии, что может проявиться в более тяжелом течении заболевайия,, 25 появлении осложненных форм.

Напротив, контингент лиц, у которых содержание термолабильных ингибиторов в сыворотке превышает титр

1:20, можно считать в определенной мере резистентными к острым респираторным инфекциям, что выражается в более легком течении„у них гриппа и других ОР3.

Пример 1. У одного обследуемого лица берут кровь из вены в количестве 1-2 мл, приготавливают сыворотку, которую последовательно разводят в лунках полистироловых пластин в

0,025 мл физиологического раствора, начиная с 1:5 до l:320. Затем в каждую лунку капельницей добавляют нормальную лошадиную сыворотку разведенную

1:40 по 0,025 мл и 34-млрдную взвесь хлопьеобразующего штамма дрожжей

Sacch cereviз1а1, а также по 0,025 ил.

Смеси встряхивают и оставляют 2 час для оседания дрожжей при 20-22оС. В первых шести лунках обнаруживают выпадение хлопьев дрожжей, что указыва50 ет на наличие ингибиторов у этого лица в.разведении сыворотки, равном

1:160, т.е. на высокий уровень их содержания в сыворотке. Эти данные согласуются с результатами, полученными параллельно общепринятым методом

РТГА с вирусом гриппа Al, с помощью которого обнаружили термолабильные ингибиторы в обследуемой сыворотке в разведении, равном 1: 80 ингибиторы разрушались после прогревания сыворотки при 65 С в течение 30 мин

Полученный результат обследования указывает на высокую резистентность данного лица к гриппу и другим острым респираторным заболеваниям, которая будет способствовать если не предотвращению инфекции, то во всяком случае более легкому ее течению.

Пример 2. У обследуемого лица проводят аналогичное исследование (т.е. берут кровь, готовят сыворотку и т.д.) . Однако при учете зарегистрировано выпадение хлопьев дрожжей только в первой лунке, что собтветствует разведению сыворотки 1:5. В остальных лунках дрожжи осели на самое цно в виде колечка с ровными краями., Такой результат можно расценивать каф низкий уровень ингибиторов. Параллельно общепринятым методом РТГА с вирусом гриппа Al ингибиторы в этой сыворотке также не обнаружены. Результат обследования второго лица свидетельствует о его возможной восприимчивости .к гриппу и другим ОРЗ вирусной этиологии, которая может проявиться в более тяжелом течении заболевания, появлению осложненных форм.

Предложенный способ является высокочувствительным и обеспечивает значительно больший процент возможных обследований, более доступен и прост, это делает его пригодным для применения в массовых обследованиях большого контингента люДей.

Формула изобретения

Способ определения термолабильных вирусотропных ингибиторов в сыворотке крови, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, к сыворотке крови добавляют взвесь хлопьеобразующих дрожжей Saccharomyces cerevisial и нормальную лошадиную сыворотку, смесь выдерживают в течение 1-2 час при температуре:20-22оС и по образованию хлопьевидного осадка определяют наличие термолабильных вирусотропныхингибиторов.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Неведомская Г.Н., Лузянина Т.Я., Смородинцев А,А., "Результаты сравнительного изучения антигемагглютинирующей активности термолабильных бетаингибиторов в сыворотках людей". Сб.

II

Механизмы противогриппозного иммунитета", 1972, с. 86-96.