Способ определения дозы облучения костного мозга живых организмов

ОПИСЛНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Ъ гутен в, фу с . и - "

Союз Советских

Социалистических

Республик

<о766584

l т

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 050577 (21) 2487195/28-13 с присоединением заявки N9 (23) Приоритет

Опубликовано 3009.80. Бюллетень Ì9 36

Дата опубликования описания 300980 (51)М. Кл.

A 61 В 10/00

Государственный комитет

СССР по дедам изобретений н открытий (53) УДК 616-074 (088. 8) (72) Авторы изобретения

И. П. Москаленко, H. A. Митряева и A. М.. Поверенный

Харьковский научно-исследовательский институт медицинской ради оло гни (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДОЗЫ ОБЛУЧЕНИЯ КОСТНОГО

МОЗГА ЖИВЫХ ОРГАНИЗМОВ

Изобретение ° относится к медицинс-кой радиологии и может быть использовано в диагностических целях при обследовании пациентов, подвергшихся ра- 5 диационному облучению, Известен .способ определения дозы облучения костного мозга живых организмов путем цитологического исследования клеточных повреждений в мазке костного мозга (1) .

Однако известный способ не позволяет определять дозы и диагностировать лучевые поражения в ранние сроки после облучения, 15

Целью изобретения является определение дозы на ранней стадии облучения, Эта цель достигается тем, что в мазок вводят антитела к однотяжевой

ДНК и по процентному содержанию клеток,связанных с антителами, определяют дозу облучения., Пример . Белых крыс весом

140-160 r облучают на аппарате РУМ-З, 197„ кв, 10 ма, фильтр 0,5 мм С+1 мм 25

А 1, Рик 40 см, мощность дозы

Зlг6 р/мин, Мазки костного мозга крыс, облученных в дозах 100, 400, 600, 800 и

1000.р через 0; 05г 1.0г 3 Оч послезо облучения, с целью прекращения жизнедеятельности клеток помещают в охлажденный ацетон (+4-6 С) на 5 мин.

Затем на высувтЕнные мазки наносят гамма-глобулиновую фракцию, содержащую антитела к однотяжевой ДНК, выделенную иэ сыворотки кроликов, иммунизированных комплексом однотяжевая ДНК-.метилированный бычий сыворо1очный альбумин.

После этого, во избежание высыхания гамма-глобулина на препарате, мазки костного мозга — иммунный гамма-глобулин помещают во влажную камеру на 30 мин, Температура в камере поддерживается +37 C, при которой за время инкубации (30 мин) происходит связывание антител с клетками, имющими однотяжевые участки ДНК.

Затем для удаления несвязавшихся антител мазки прогывают фосфатным буфером 0,01 М, рН 7,5 на физиологическом растворе с последующим просушиванием на,воздухе.

На,мазки наносят смесь ослиной сыворотки против глобулинов кролика,. окрашенную ФИТЦ, с бычьим альбумином, меченным радаминсульфофторидом, в .разведении обоих компонентов 1г4.

766 584 ролях наблюдают. неспецифичную флюоресценцию цитоплазмы, а в первом контроле — незначительную флюоресценцию ядер. Это снидетельствует о том, что AT к ОДНК специфично связывается преимущественно с клетками, имеющими поврежденные ДНК.

Данные наблюдений сведены в табл.1.

Как видно из таблицы, число флюоресцирующих клеток в мазке облученных крыс пропорционально дозе облучения.

Путем статистической обработки получены уравнения регрессии

У = А+ Вх, где У вЂ” процент флюоресцирующих кле-!

5 ток; х — доза облучения, р;

А и  — постоянные коэффициенты.

В табл. 2 приведены полученные уравнения регрессии, соответстЩ вующие различному времени после облучения.

Таким образом, исследуя мазок костного мозга живого организма,подвергнутого радиационному облучению, можно, определив процентное содержание клеток с поврежденной ДНК, свяэаншихся с антителами, судить о дозе облучения, а следовательно, и о степени радиационного поражения.

Предлагаемый способ позволяет определить степень поражения в ранние сроки после облучения — от нескольких минут до трех часов.

0 2010 6 710,6

100 3111,7 10+0,8 1310,9 32 0,9 7,5+1,6 15+1,8 22t0,8

15+1ã6. 36+1 р8 1310,9 1611,6 2711,7 1210,6

820,6 35 1, 7 11 и 0 7 12+ ly 4 33+1, 3 1210,5

9tP,7 53+1,6 10 0,4 12+0,5 36 1,2 10 -0,5

13 0,8

10+0,6

134 0,5

13i0,9 11+1,2 64 1,5

6:1,03 10+0,6 4722,7 6 0,6

810,6

Т а б л и ц а 2 от вет ст вующее авнение perpecсии

Время лу

25+0 05х

25+0,05х

19+0 04x

19. 0,025х

60

180

Снова помещают маэ ки но влажную камеру на 30 мин при +37 С для обеспечения взаимодействия ослиной сыворотки с глобулинами кролика. После чего для удаления несняэавшейся меченной сыворотки мазки промывают фосфатным буфером О, 01 М, рН 7, 5 с последующей сушкой на воздухе.

В подготонленных укаэанным образом мазках клетки, содержащие однотяжевые

ДНК, с которыми прореагировали антитела к однотяжевой ДНК, приобретают способность флюоресцировать при их наблюдении под люминисцентным микроскопом.

Мазки наблюдают под микроскопом

МЛ-2. фильтры ФС-1-1, 03С14-4, БС-8-2, При этом наблюдают по 12 мазков с одинаковой дозой облучения и на каждые 10Ь клеток мазка считают процент, флюоресцирующих клеток.

Для выяснения иммунологической специфичности используют контроли: маэ ки необлученных крыс, о бр абот анные антителами к однотяженой ДНК !

AT к ОДНК); мазки облученных крыс, обработанных гамма-глобулином, выделенным из сыворотки неиммуниэирован— ных кроликов (Донорский); мазки облученных крыс, обработанные истощенной иммунной сывороткой (без AT к ОДНК) .

При наблюдении под микроскопом н мазках облученных крыс, обработанных .AT к ОДНК, интерфаэные ядра флюоресцируют, в То время как н других конт400 4511,1 9 Й1,4 2311,6 4541,06 9+0,7

600 61+0,63 16+2,5 1011,7 59+1,2 10+1у l

800 6811,1 1011,2 1210,7 66 1 03 910,5

1000 7310,9 1721 8 19+ 1,6 72+0,9

941,4 8,5+0,7 23+1,2 12+1,03 16 0,9

766 584

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

ТехРед И. Нинц КорректоР Н. Григорук

Редактор Г. Прусова Заказ 7036/2 Тираж 673

БНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Подпи оное

Филиал ППП Патент, r, ужгород, ул. Проектная, 4

Способ опре делен и я дозы облуче ни я костного мозга живых организмов путем цитологического исследования клеточных повреждений в мазке костного мозга,отличающийся тем, что, с целью определения дозы на ранней стадии облучения, в мазок вводят антитела к однотяжевой ДНК и по процентному содержанию клеток, связанных с антителами определяют дозу обУ л учения.

Источники информации, 5 принятые во внимание при экспертизе

1 ° Основы цито ген ети ки чело в ека.

Под ред.. А. A. Прокофьевой -Бельговской. М,, Медицина", 1969, с. 186192 (прототип),