Способ препаративного диск-электрофореза

Авторы патента:

G01N27/26 - путем определения электрохимических параметров; путем электролиза или электрофореза (определение коррозионной стойкости G01N 17/00; путем разделения на составные части с использованием адсорбции, абсорбции или подобных процессов или с использованием ионного обмена, например хроматографии G01N 30/00; иммуноэлектрофорез G01N 33/561; электрохимические процессы и аппараты вообще B01J; стандартные элементы H01M 6/28)

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (»») 697900 (51)M. Кл.2

G 01 Ы 27/26 (61) Дополнительное к авт, саид-ву (22) Заявлено 200278(21) 2581744/18-25 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Государственный комитет

СССР ио делам изобретений и открытий

Опубликовано 15.11.79 Бюллетень ¹ 42

Дата опубликования описания 151179 (53) УДК543. 544 (088. 8) (72) Автор изобретения

Н.П. Дмитренко (71) Заявитель (54 ) СПОСОБ ПРЕПАРА.с ИВНОГО ДИСК-ЭЛЕК1 РОФОРЕЗА

Изобретение относится к области биохимии и предназначено для разделения белков, нуклеиновых кислот, углеводов и других биополимеров, имеющих заряд.

Известный способ препаративного диск-электрофореза в полиакриламидном геле состоит в том, что через край разделяющего полиакриламидного геля, удаленный от концентрирующего полиакриламидного геля, непрерывно в течение всего времени проведения электрофореза пропускают буферный раствор, в который попадают разреленные компоненты по мере их выхода из геля, после прохождения через край разделяющего геля буферный раствор собирают с помощью коллектора равными фракциями в пробирки (1) .

Однако известный способ препаративного диск-электрофореза не позволяет получить качественного разделения компонентов, поскольку при алюции и сборе по фракциям последних в процессе электрофореза нельзя точно согласовать производительность ряда приборов (как минимум, микронасоса., электрофоретической камеры и комплектора фракций, объединенных в единый комплекс), зависящую, в свою

2 очередь, от условий проведения электрофореза. Компоненты получаются слишком разведенными или же элюируются не полностью.

Наиболее близким к предложенному способу является способ препаративного диск-электрофореза, при котором в вертикальной колонке на гидростатическую пробку наносят слой концентрирующего голиакриламидного геля, со смесью исследуемых компонентов, на который затем наносят слой разделяющего геля и электродный буфер, проводят электрофорез и собирают фракции разделенных компонентов (2) .

Однако и этот способ препаративного диск-электрофореза не обеспечивает качества разделения компонентов в связи с тем, что разделенные в полиакриламидном rеле компоненты в процессе элюции буферным раствором в зависимости от скорости протекания последнего разбавляются или полностью не элюируются.

Целью изобретения является повышение качества разделения компонентов.

Для достижения этой цели перед нанесением электродного буфера на слой разделяющего геля наслаивают столб жидкости с градиентом плотности

697900 формула изобретения

30 сахарозы и таким же буфером, как в разделяющем геле.

На чертеже приведена схема предлагаемого препаративного диск-электрофореза.

В электрофоретическую камеру, представляющую собой вертикальную колонку 1, на гидростатическую пробку 2 из полиакриламидного геля.,содержащую электродный буфер, наносят слой

3 концентрирующего геля, полиакриламидного или сафадекса, содержащего исследующую смесь компонентов, например белков, и концентрирующий буфер.

На концентрирующий полиакриламидный гель наносят разделяющий полиакриламидный гель 4, включающий в себя разделяющий буфер и сахарозу, над поверхностью которого затем создают столб 5 жиДкости с градиентом плотности сахарозы, также содержащий разделяющий буфер, Наибольшая концен.вЂ” трация сахарозы в столбе жидкости равна или несколько меньше, чем ее концентрация в разделяющем геле, Поверх этого столба жидкости наслаивают .электродный буфер 6 не содержащий сахарозы. После проведения электрофореэа жидкость с градиентом плотности сахаровы, в которую перешли из геля разделенные компоненты исследуемых веществ, собирают по фракциям.

Принцип работы предлагаемого устройства состоит в том, что в электрофоретическую камеру, представляющую собой вертикальную колонку, вносят с концентрирующим гелем (полиакриламидным или сефадексом) исследуемые белки или другие биополимеры, имеющие з аряд, Поверх концентрирующего геля насл аи в ают разделяющий гель, между поверхностью которого и верхним электродным буфером создают столб жидкости стабилизированной от перемешивания градиентом плотности сахарозы. В процессе электрофореза белки и другие биополимеры, имеющие заряд, двигаясь вверх по колонке, концентрируются и разделяются в соответствующих гелях, а затем переходят в жидкость с градиентом плотности сахаровы и разделяющим буфером, где продолжают двигаться и разделяться.

Таким образом, в предлагаемом способе препаративного диск-электрофореза разделение вначале происходит в полиакриламидном геле, а затем продолжается в жидком зональном носителе, стабилизированном от перемешивания градиентом плотности сахаровы.Сконцентрированные и разделенные биополимеры, попадая из полиакриламидного геля в жидкость с градиентом плотности сахаровы, при соответствующих условиях проведения электрофореза сохраняют устойчивость, существенно не уширяясь и не седиментируя. Последнее обусловленно тем, что движение заряженных биополимеров происходит снизу вверх, т.е. из области с большей концентрацией сахаровы в меньшую. Величина пре дельной загрузки белком в предлагаемом способе находится в прямой зависимости от величины градиента плотности сахарозы в столбе жидкости. Предлагаемый способ препаративного дискэлектрофореза может найти широкое применение в лабораторной практике при анализе белков, нуклеиновых кис25 лот, углеводов и других биополимеров, имеющих заряд, так как.он является простым и повышает качество разделения.

Способ препаративного диск-электрофореза, при котором в вертикальной колонке на гидростатическую пробку наносят слой концентрирующего по35 лиакриламидного геля со смесью исследуемых компонентов, на который затем наносят слой разделяющего геля и электродный буфер, проводят электрофорез и собирают фракции разделен4() ных компонентов, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения качества разделения, перед нанесением электродного буфера на слой разделяющего геля наслаивают столб жид4 кости с градиентом плотности сахарозы и с таким же буфером, как в разделяющем геле.

Источники информации, принятые во внимание при экспертиз

1. Маурер Г. Диск-электрофорез.

М., Мир, 1971, с, 141.

2. Furlong С.М. et ap AnaIyticaI

Biochemistry,1973, 5, р. 297 (прототип).

697900

Составитель Э. Скорняков

Техред Э.Чужик Корректор Е. Папп

Тираж 10 7 3 Подписное

ЦНИИПИ ГосударствеНного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва Х-35 Раушская наб ° д. 4/5

Редактор И. Шубина

Заказ 6919/31 ь с с с

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная,4

Способ препаративного диск-электрофореза

Устройство для электрофоретического разделения веществ // 616568

Аппарат для измерения волюмометрических изменений при химических реакций // 582483

Устройство для электрофоретического разделения частиц // 580490

Способ электрофоретического разделения частиц // 577447

Устройство для электрофоретического разделения частиц // 573744

Способ количественного определения содержания цветных металлов в многокомпонентных растворах // 567124

Устройство для получения градиентного полиакриламидного геля // 565242

Способ электрофоретического анализа белков // 561898

Устройство для электрофореза // 558206

Способ определения нитрит-иона в растворе // 2105296

Изобретение относится к электрохимическим методам анализа с использованием ионоселективных электродов и может быть использовано для повышения чувствительности и селективности способа

Способ определения мышьяка (iii) // 2105297

Изобретение относится к электроаналитической химии, а именно к способу определения мышьяка (III), включающему концентрирование мышьяка на поверхности стеклоуглеродного электрода в растворе кислоты с последующей регистрацией аналитического сигнала, при этом концентрирование мышьяка (III) проводят на поверхности стеклоуглеродного электрода, покрытого золотом, в растворе до 3,0 M в интервале потенциалов -0,40-(-0,45)B в течение 1-10 мин с последующей регистрацией производной анодного тока по времени при линейной развертке потенциала

Способ измерения потенциала рабочего электрода электрохимической ячейки под током // 2106620

Изобретение относится к области электрохимии, электрохимических процессов и технологий в части измерения потенциала электродов под током, а именно к способу измерения потенциала рабочего электрода электрохимической ячейки под током, основанному на прерывании электрического тока, пропускаемого между рабочим и вспомогательным электродами, и измерении текущего потенциала рабочего электрода, при этом процесс измерения текущего потенциала Eизм рабочего электрода производят относительно электрода сравнения непрерывно по времени t, затем по измеренным значениям потенциала рассчитывают первую производную от зависимости изменения текущего потенциала рабочего электрода от времени: (t)=Eизм

Способ получения активированных кислого и щелочного растворов // 2108300

Изобретение относится к способу получения активированных кислого и щелочного растворов, включающему электрохимическое разделение водного раствора электролита, при этом электрохимическому разделению подвергают мочу животных и/или человека

Способ адсорбционного концентрирования необратимо адсорбирующихся на металлах соединений // 2114424

Изобретение относится к адсорбции компонентов, а именно к способу адсорбционного концентрирования необратимо адсорбирующихся на металлах соединений путем наложения электрического поля в электрохимической ячейке, при этом перед концентрированием проводят адсорбцию на жидкометаллическом электроде из раствора, содержащего адсорбируемые соединения, при интенсивном перемешивании и потенциале электрода, обеспечивающем необратимую адсорбцию, а концентрирование после отстаивания осуществляют путем сокращения поверхности электрода с необратимо адсорбируемыми соединениями при переводе электрода из ячейки в капилляр. Изобретение относится к анализу материалов с помощью оптических методов путем адсорбции компонентов

Способ определения потенциала поверхности // 2119157

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к области аналитической электрохимии, и может быть использовано при определении свойств грунтов, горных пород, строительных материалов, а также свойств поверхностей раздела фаз

Полупроводниковый материал для адсорбционных сенсоров низкомолекулярных органических соединений и способ его изготовления // 2119695

Изобретение относится к составу полупроводниковых материалов, используемых в адсорбционных сенсорах для обнаружения и количественной оценки концентрации низкомолекулярных органических соединений, преимущественно кетонов в выдыхаемом людьми воздухе, и к технологии изготовления таких полупроводниковых материалов

Электрохимический датчик концентрации водорода в газовых и жидких средах // 2120624

Способ определения содержания нефтепродуктов в воде // 2126965

Устройство для анализа воды // 2132049