Устройство для получения градиентного полиакриламидного геля

Авторы патента:

G01N27/26 - путем определения электрохимических параметров; путем электролиза или электрофореза (определение коррозионной стойкости G01N 17/00; путем разделения на составные части с использованием адсорбции, абсорбции или подобных процессов или с использованием ионного обмена, например хроматографии G01N 30/00; иммуноэлектрофорез G01N 33/561; электрохимические процессы и аппараты вообще B01J; стандартные элементы H01M 6/28)

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ > 565242

Союз СоветскиХ

Социалистинескик

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-вувЂ” (22) Заявлено 09.06.75 (21) 2146087/25 с п рисоединен ием заявки ¹â€” (23) ПриоритетвЂ” (43) Опубликовано 15.07.77. Бюллетень № 26 (45) Дата опубликования описания 24.10.77 (51) М. Кл, G 01N 27/26

Государственный комитет

Совета Министров СССР ао делам изобретений н открытий (53) УДК 543.544(088.8) (72) Авторы изобретения

А. А. Покровский, Б. В. Оттесен и К. А. Коровников

Институт питания АМН СССР (71) Заявитель (54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ГРАДИЕНТНОГО

ПОЛИАКРИЛАМИДНОГО ГЕЛЯ

Изобретение относится к устройства м, используемым в практике биохимических и клинических лабораторий для получения столбиков градиентного полиакриламидного геля, применяемого в электрофоретических исследованиях веществ белковой природы.

Известно устройство для получения градиентного полиакриламидного геля, содержащее две емкости, разделенные герметичной прокладкой, связанные тройниковой трубкой с регулятором .и выводным каналом.

Недостатками этого устройства является сложность регулировки, зависимость от вязкости жидкости и температуры.

Известно устройство для получения градиентного полиакриламидного геля, содержащее два цилиндра с поршнями, связанными через редукторы с электродвигателями, управляемыми электронным программатором.

Конструкция этого устройства сложна, оно громоздко, отсутствует распределительное устройство для заполнения электрофоретических трубочек, Прототипом предлагаемого изобретения является устройство для получения градиентного геля, содержащее смеситель в виде блока двух цилиндров,с поршнями, камерой смешения, мешалкой и,приводом и имеющее вывод ной канал.

Гель в этом устройстве получается в виде

2 блока, который затем необходимо разрезать.

Целью изобретения является обеспечение возможности заполнения множества электрофоретичеоких трубочек смесью с одинаковым линейным распределением концентрации акриламида по их высоте.

Поставленная задача достигается тем,чго известное устройство для получения градиентного полиакриламидного геля, содержащее смеситель в виде блока двух цилиндров с поршнями, мешалкой и приводом, снабжено дозатором-распределителем, расположенным симметрично под центральной частью смесителя, Дозатор выполнен в виде конической

15 тефлоновой пробки, связанной с вращающим приводом. Верхний торец пробки служит дном камеры смешения и мешалкой. От его центра под углом к оси вращения проходит канал, выход которого соединен с распредели20 тельной трубкой. Конец этой трубки имеет возможность касаться фитилей, укрепленных на резиновых полосках, расположенных наклонно к вертикальной оси, н опускающихся в электрофоретические трубочки, расположен25 ные по окружности на штативе.

Изобретение иллюстрируется чертежом.

Устройство состоит из блока двух цилиндров 1 и 2, изготовленных из нержавеющей стали, двух тефлоновых поршней 3 и 4 с упзо лотнениями из сплоконовой резины, перем"-565242

3 щаемых приводом через механические устройства 5, 6 кулачкового типа. Рабочие объемы цилиндров 1, 2 через выведенные наружу резиновые трубочки-петли 7 и 8 соединены с камерой смеш"- ния 9. Дозатор-распределитель выполнен в виде тефлоновой пробки 10 с ка налом, выход которого соединен со стеклянной трубочкой 11, сужающейся на конце.

На диске 12 под углом 40 закреплены полоски резины 13 с фитилями 14 из ленточек фильтровальной бумаги. Вращение механических устройств 5 и 6, а также тефлоновой пробки 10 (дозатора-распределителя .осуществляется от редуктора и гистерезианого трехфазного двигателя. Электрическая схема устройства обеспечивает кнопочное управление основ ными операциями и сигнальными лампочками, информирующими оператора о характере работы прибора.

Работает устройство следующим образом.

Поршни 3 и 4 находятся в верхнем положении (рабочие объемы цилиндров максимальны). Исходные растворы акриламида во избежание преждевременной полимеризации приготовляют непосредственно перед заполнением цилиндров. Заполняют цилиндры с помощью 20-миллилигрового шприца, начиная с цилиндра 1, низкоконце нтрированным раствором акриламида через имеющуюся в поршне 3 трубочку (на чертеже не показана), предназначенную для жидкости. Через другую трубочку в поршне 3 (на чертеже не показана) из цилиндра 1 выводится воздух.

Далее вытесняется воздух из,петли 7 и камеры смешения 9. Цилиндр 2 заполняют раство ром высокой концентрации таким жс образом, как и цилиндр 1.

После вытеснения воздуха из петли 8 цилиндра 2 и низкоконцентрированного раствора из камеры смешения 9 о существляется смачивание всех десяти фитилей высококонцентрированным раствором акриламида через трубочку 11.

На неподвижный стол устанавливают круговой штатив 15 с электрофоретичеокими трубочками 16, фитили 14 вставляют внутрь трубочек, включается электродвитатель. Растворы акриламида из цилиндров 1 и 2 выжимаются поршнями через петли 7 и 8 в камеру смешения 9, где они перемешиваются за счет вращения пробки 10. Смешанная жидкость проходит через трубочку 11. В процессе вращения на ее конце образуется каплч диаметром около 1,5 мм. При контакте с очередным фитилем капля снимается. Жидкость то нкой пленкой стекает по фитилям 14, затем по внутренним стенкам трубочек 16 и наслаивается на поверхность слитой ранее жидкости. Наслаивание начинается с раствора ма к симальной концентрации и завершается раствором минимальной концентрации Распределение акриламида по длине трубочек ли нейно (постоянный градиент).

Для повышения точности распределения

Устройство для получения градиентного полиакриламидного геля, содержащее смеситель в виде блока двух цилиндров с поршнями, камерой смешения, мешалкой и приводом и имеющее выводной канал, о т л и ч а ю щ ее ся тем, что, с целью заполнсния множества электрофоретических трубочек смесью с одинаковым линейным распределением концентрации акриламида по их высоте, устройство снабжено дозатором-распределителем, расположенным симметрично под центральной ча4 раствора акриламида между электрофорети ческими трубочками 16 сужающийся конец труб очки 11 обрабатывают гидрофобным веществом, например парафином. Той же цели

5 способствует смазка в нутренних поверхностей цилиндров 1 и 2 и трущейся поверхности пробки 10 силиконовым маслом.

Во избежание перемешивания раствора акриламида в трубочках общий цикл запол10 пения .их проводят в течение 20 мин, при этом скорость вращения пробки 10 составляет

1 об/4 сек.

Для предотвращения полимеризации раст15 воров акриламида в устройстве после окончания разлива внутренние объемы смесителя и трубочки 11 промывают водой.

Эффективность изобретения состоит в получении столбиков геля с постоянным градиентом одновременно в десяти стандартных электрофоретичсских трубочках, приготовление которого, например, вручную, невозможно. Программированное перемещение поршней, обеспечивающее принудительный и стро25 смешения исходных расгворов в предлагаемом устройстве гарантирует, как показали проведенные испытания, стандартность закона распределения концентрации акриламида по высоте геля, независимо от вязкости, кочцентрации и температуры растворов, что, в конечном итоге обеспечивает высокую воспроизводлмость определения молекулярного веса и геометрических размеров молекул белковых фракций от их относительного пробега в «градиентном» геле. Кроме того, использование градиентного геля расширяет сферу применения электрофоретического метода: позволяет проводить изучение законов электрофоретической подвижности белковых молекул в геле с меняющейся структурой молекулярных сит. Это особенно существенно при изучении физико-химических свойств новых белковых веществ методом электрофореза.

45 Автоматическая работа устройства и исключение благодаря этому ошибок оператора делают прибор удобным в работе при достаточно высокой производительности (60 вЂ” 80 заполненных трубочек за рабочий день). При50 бор может найти практическое применение в работе биохимических лабораторий.

Фо р мул а из о бр етени я

565242

Составитель Л. )Каркова

Техред 3, Тараненко

Коррсктор Л, Денискина

Редактор P. Киселева

Изд. № 585 Тираж 1109 Подписное

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская паб., д. 4/5

Заказ 6249

МОТ, Загорский филиал стью смесителя, вылолненным в виде конической тефлоновой пробки, связанной с вращающим приводом, причем верхний торец пробки служит дном камеры смешения и мешалкой, от центра верхнего торца пробки под углом к оси вращения проходит канал, выход которого соединен с распределительной труб6 кой, конец которой имеет возможность касаться фитилей, укрепленных на резиновых полосках, расположенных по окружности на клонно к вертикальной оси и опускающихся

5 в электрофоретические трубочки, расположенные по окружности на штативе.

Устройство для получения градиентного полиакриламидного геля

Устройство для электрофореза // 558206

Способ измерения содержания магнетита в руде // 554490

Устройство для препаративного электрофореза // 544898

Способ определения штерновского -потенциала несферических коллоидных частиц // 507811

Ячейка для измерения электрокинетического потенциала // 495596

Способ определения морозоустойчивости растений // 488548

Состав для производства твердых электролитов // 459448

Измеритель электрофоретической подвижности всплывающих частиц // 458756

Способ автоматического контроля содержания газов в жидких и газовых средах // 446820

Способ определения нитрит-иона в растворе // 2105296

Изобретение относится к электрохимическим методам анализа с использованием ионоселективных электродов и может быть использовано для повышения чувствительности и селективности способа

Способ определения мышьяка (iii) // 2105297

Изобретение относится к электроаналитической химии, а именно к способу определения мышьяка (III), включающему концентрирование мышьяка на поверхности стеклоуглеродного электрода в растворе кислоты с последующей регистрацией аналитического сигнала, при этом концентрирование мышьяка (III) проводят на поверхности стеклоуглеродного электрода, покрытого золотом, в растворе до 3,0 M в интервале потенциалов -0,40-(-0,45)B в течение 1-10 мин с последующей регистрацией производной анодного тока по времени при линейной развертке потенциала

Способ измерения потенциала рабочего электрода электрохимической ячейки под током // 2106620

Изобретение относится к области электрохимии, электрохимических процессов и технологий в части измерения потенциала электродов под током, а именно к способу измерения потенциала рабочего электрода электрохимической ячейки под током, основанному на прерывании электрического тока, пропускаемого между рабочим и вспомогательным электродами, и измерении текущего потенциала рабочего электрода, при этом процесс измерения текущего потенциала Eизм рабочего электрода производят относительно электрода сравнения непрерывно по времени t, затем по измеренным значениям потенциала рассчитывают первую производную от зависимости изменения текущего потенциала рабочего электрода от времени: (t)=Eизм

Способ получения активированных кислого и щелочного растворов // 2108300

Изобретение относится к способу получения активированных кислого и щелочного растворов, включающему электрохимическое разделение водного раствора электролита, при этом электрохимическому разделению подвергают мочу животных и/или человека

Способ адсорбционного концентрирования необратимо адсорбирующихся на металлах соединений // 2114424

Изобретение относится к адсорбции компонентов, а именно к способу адсорбционного концентрирования необратимо адсорбирующихся на металлах соединений путем наложения электрического поля в электрохимической ячейке, при этом перед концентрированием проводят адсорбцию на жидкометаллическом электроде из раствора, содержащего адсорбируемые соединения, при интенсивном перемешивании и потенциале электрода, обеспечивающем необратимую адсорбцию, а концентрирование после отстаивания осуществляют путем сокращения поверхности электрода с необратимо адсорбируемыми соединениями при переводе электрода из ячейки в капилляр. Изобретение относится к анализу материалов с помощью оптических методов путем адсорбции компонентов

Способ определения потенциала поверхности // 2119157

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к области аналитической электрохимии, и может быть использовано при определении свойств грунтов, горных пород, строительных материалов, а также свойств поверхностей раздела фаз

Полупроводниковый материал для адсорбционных сенсоров низкомолекулярных органических соединений и способ его изготовления // 2119695

Изобретение относится к составу полупроводниковых материалов, используемых в адсорбционных сенсорах для обнаружения и количественной оценки концентрации низкомолекулярных органических соединений, преимущественно кетонов в выдыхаемом людьми воздухе, и к технологии изготовления таких полупроводниковых материалов

Электрохимический датчик концентрации водорода в газовых и жидких средах // 2120624

Способ определения содержания нефтепродуктов в воде // 2126965

Устройство для анализа воды // 2132049