Питательная среда для выращивания микроорганизмов

О П И С А Н И Е 362048

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства М

Заявлено 04,V111.1970 (№ 1466532 30-15) с присоединением заявки М 1469257;30-15

Приоритет

М. Кл. С 12k 1 06

С 12d 7 00

Комитат по делан изобретений и открытий при Совете Мииистров

СССР

Опублштовauî 13.Х11.1972. Б1оллетеш> Хо 2 за 1973

Дата опубликования описания 13.11.1973

УДК 576.8.093.1:576.8.095 .3(088.8) Авторы изобретения

М. М. Файбич, В. А. Ширтпов, B. П. Моторная, Л. П. Синицина,, T Ф. Костенко, Е. М. Шагов, Э. Б. Данилова, Н. А. Белова и E. В. Васильева, Д. Я. Медман и A. H. Лапотышкина

Всесоюзный научно-исследовательский институт микробиологических средств защиты растений и бактериальных препаратов

Заявитель

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ

МИКРООРГАНИЗМОВ

Изобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии.

Известны для производства глубинным методом многих препаратов, продуцентами которых являются микрооы н грибы (энтобактерин, дендробациллин, инсектин, бовернн, многие антибиотики, ферментныс препараты, культуры патогенных и непатогенных микробов и грибов и др.) питательные среды для выращивания микроорганизмов, содержащие (кроме минеральных солей и разли иных стимуляторов роста) в качестве источника углерода различные углеводы и в качестве источника азота кукурузный экстракт. Кукурузный экстракт является нестандартным, нестабильным при хранении и дефицитным продуктом.

Предложенная питательная среда отличается от известных тем, что для получения более высоких съемов биомассы при биологическом синтезе в нее дополнительно введены дрожжи.

В процессе проведенной научно-исследовательской работы по изучению условий культивирования Bacillus thuringiensis u Beauveria

bassiana, являющихся основой производства энтомопатогенпых, инсектицидных препаратов, установлено, что включение в регламентные среды сухих кормовых дрожжей (парафиновых, гидролизных пли сульфитных) создаются болсс благопрпятныс условия для развития микроорганизмов, чем в кмкурузной илн другой среде.

Кормовые дрожжи по своим питательным

5 свойствам обладают ценными качествами. Сухие дрожжи содержат 47 — 60% бе.>1ка, 20 ——

0,, „, то, „,. „„,„, гр.пины В би минеральные солu и другие соединения, необходимые для выращивания микроорганизмов.

10 Кормовые дрожжи являются доступным, недефицитным продуктом, приготавливают их из непищевого и некормового сырья, причем они могут быть изготовлены в количествах, удов лстворяющпх потребности микробиологической

15 промышленности.

Для глубинного выращивания Bacillus

thuringiensis x аг. ga!leriae, var. insectus и других разновпдностеи, а также Beauveria различных видов, предлагается жидкая питатель20 ная среда, содержащая: сухие кормовыедрожжи не менее 1%, крахмал не менее 0,1%, либо продукты или субпродукты, содержащие ттолисахарпды п другие углеводы не менее 1 /о (различного рода мука и отруби, солод, кар25 тофель, отходы мукомольного производства и другие отходы прп обработке сельскохозяйственных продуктов), а также минеральные соли: хлористый натрий 0>2%, хлористый каль362048

Предмет изобретения

Составитель М. Файбич

Корректоры: А. Дзесова и Е. Сапунова

Текред Л. Богданова

Редактор М. Макарова

Заказ 251/3 Изд. Хо 1038 Тираж 404 Подписное

LIHHHIlH Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

3 ций 0,05%, хлористый или сернокислый марганец либо магний — 0,01%. рН среды 6,0 — 7,0.

В зависимости от вида микроорганизмов и режима выращивания количество дрожжей и полисахаридов углеводов увеличивают, при этом минеральные соли не прибавляют, так как они содержатся в дрожжах, Кроме того, кормовые дрожжи рекомендуется использовать для выращивания микроорганизмов на поверхности твердой агаровой среды. Для этой жс цели в среду прибавляют 2 — 3 /о агара, не менее 2% дрожжей и остальные компоненты, которые вносят в жидкую среду для глубинного выращивания.

Дрожжевая среда, разработанная на примере указанных микроорганизмов, являсгся пригодной для выращивания других микроб,зв и грибов в средах, в состав которых взамен кукурузного экстракта введены дрожжи.

Для приготовления питательной среды применяют сухие кормовые дрожжи в виде суспензии (болтушки), содержащей цельныс клетки и их оболочки. Вместо сухих дрожжей может быть применена жидкая культура дрожжей (бражка), состоящая из дрожжевых клеток. Этот принцип использования кормовых дрожжей в нативном виде с целью выращивания микроорганизмов для промышленных целей является простым, дешевым и доступным.

Однако, кормовые дрожжи в питательных средах могут быть использованы также в виде гидролизатов. В процессе выращивания дрожжевые .клетки и их оболочки лизируются, что указывает на способность промышленных микроорганизмов выделять гидролазные ферменты.

Дрожже-полисахаридная среда, испытанная в лабораторных условиях, в сравнении с кукурузно-глюкозной средой при производстве энтобактерина из Bacillus thuringiensis var.

galleriae Isacova и инсектина из Bacillus

thuringiensis var. inseitus Gucossian дает повышение урожайности и увеличение кристаллического эндотоксина больше, чем на 20о/о, а также увеличение термоустойчивого экзотоксина почти в 7 раз. По своей активности жидкая культура и полученный из нее препарат значительно превышает требования, установленные в технических условиях на энтомо5

35 патогенные препараты. Производство энтомопатогенных препаратов с использованием дрожже-полисахаридной среды только на сырье дает экономию не менее 30%.

В процессе изучения культуры Beauveria

bassiana (Bals,) Vuill., полученной глубинным методом, установлено, что в отличие от других известных питательных сред в жидкой дрожже-полисахаридной среде, в течение

72 час при температуре 24 — 28 получают биомассу, состоящую в основном из конидиоспор (90 — 95 /о ), которые по своим морфологическим свойствам и механизму образования не отличаются от конидиоспор, получаемых поверхностным, «воздушным» способом. Количество живых спор в такой культуре накапливается не менее 1250 млн/мл. Вирулентность этой культуры для мух, выраженной в LC;0, составляет 0,00016%, тогда как вирулентность культуры из известной жидкой среды Сабуро по 1.Сзо равна 0,0089. Однако, основным отличием дрожже-полисахаридной среды является возможность получения спор наиболее устойчивых, чем гонидии и мицелий, что указывает на перспективность использования дрожжевой среды для промышленного производства энтомопатогенного препарата боверина глубинным методом, который в отличие от поверхностного способа позволяет организовать механизированное, легко управляемое и контролируемое производство. При выращивании глубинным методом Beauveria bassiana в других известных средах образуется в основном гонидии, мицелий и небольшое количество спор с титром живых морфологических элементов в два раза ниже, чем в дрожжевой среде, что является основным препятствием для организации промышленного производства боверина.

Питательная среда для выращивания микроорганизмов, включающая полисахариды в чистом виде или в виде продуктов или субпродуктов, содержащих их, а также минеральные соли, отличающаяся тем, что, с целью получения, более высоких съемов биомассы при биологическом синтезе, в нее дополнительно введены дрожжи.