Способ получения jbhomaccbf
, i
*,I ((,ill,isa
ОПИСА
ИЗОБРЕТЕНИЯ
357749
Союз Советских
Социвпистических
Республик
К ПАТЕНТУ
Зависимый от патента №
M. Кл. С 12b 1/08
Заявлено 22Х!!.1970 (№ 1461271/28-13)
Приоритет ОЗ.Ш.1970, № 45-18563, Япония
Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
Опубликовано 31.Х.1972. Бюллетень № 33
УДК 663.143.14 (088,8) Дата опубликования описания 06.П1.1973
Авторы изобретения
Иностранцы
Киеси Ватанабе, Хирохиса Яно, Кендзи Сузуки, Йосимацу Меката и Хадзиме Кавахарада (Япония) Иностранная фирма
«Канегафучи Кагаку Когио Кабусики Кайся» (Япония) Заявитель
AOCOli ЙОЛУЧБНИЯ БИОМАССЬ1
Изобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к способу получения биомассы.
Известен способ получения биомассы путем выращивания дрожжей, ассимилирующих.углеводороды, например Candida, Torylopsis, Pichia на среде, содержащей в качестве источника углерода углеводородные фракции нефти в присутствии водной минеральной среды, содержащей источник азота, фосфора, калия, магния и стимулятора роста при аэрации среды.
Предлагаемый способ позволяет проводить смешанное культивирование углеводород-ассимилирующих дрожжей с углеводород-неассимилирующими дрожжами.
Это обеспечивает повышенный выход биомассы, более интенсивный рост микроорганизмов и повышенное содержание сырого протеина в биомассе.
Предлагаемый способ предусматривает выращивание дрожжей, ассимилирующих углеводороды, производить совместно с углеводороднеассимилирующими дрожжами, потребляющими метаболиты, продуцируемые первыми дрожжами.
В качестве углеводород-неассимилирующих дрожжей используют семейство Cryptococcaecae в частности виды Trichosporon pullulans, род Candida в частности вид utilis род Rhodo5 torula в частности виды rubre u minuta род
Torulopsis в частности вид psendaeria род Debaryomyces в частности вид hansenii.
Сырьем служат алифатические углеводороды с открытой цепью, имеющие от 9 до 30 ато10 мов в молекуле, и нефтяные углеводороды, богатые алифатическими углеводородами с открытой цепью.
Выращивание дрожжей ведут в следующих условиях: рН среды преимущественно равной
3,5 — 6,0, температура 25 — 40 С, концентрация углеводородов в водной питательной среде от
0,01 до 1%.
Питательная среда . представляет собой раствор, содержащий помимо нефтяных углеводородов неорганических или органических азотсодержащих соединений, фосфорсодержащие соединения, а также неорганические соли и иногда органические соли. Кроме того, для ускорения роста микроорганизмов добавляют
25,раствор, настоенный на зерне экстракт дрожжей и пептон.
357749
Таблица !
Углеводород-иеассимилируюВыход клеток, 0 гО
Содержание сырого протеина, щие дрожжи
53,5
55,5
56,1
54,9
54,7
82,3
99,5
103,2
107,7
98,3
20 Нет
C and id a util is
Torulopsis psendaesia
Deboryomyces hansenii
Trigonopsis variabiles
0,1 г
Таблица 2
Совместное выращивание
Выращивание одного вида
Углеводород-ассимилирующие дрожжи содержание протеина, % выход клеток, содержание протеина, в выход клеток, %
55,7
50,1
52,6
103,6
90,8
87,2
51,3
46,8
48,3
91,3
70,6
75,8
Candida Tropicaces
Candida parapsilosis
Torulopsis mognoliae
Rydosaccharomyces Tikumaen$1$
Torulopsis xycinus
Lygos acchoromyces sake
Pichia ш1ао
106,5
85,8
92,1
101,3
51,2
55,5
50,0
48,3
49,7
50,5
45,7
41,1
88,2
69,1
72,3
8I,6
Пример 3.
Углеводород-ассимилирующие дрожжи Candida guilliermondii и углеводород-неассимилирующие дрожжи Trichosporon eutaneum совместно культивируют в аэробных условиях в течение 48 час в культуральной среде, состав которой указан в примере 1. Получившиеся культуры двух видов смешивают в соотношении 100: О, 90: 10, 80: 20 и 70: 30 соответственно. Каждую смесь размещают в количестве
10О/о в 18 л основной культуральнай среды 4о того же состава, помещенной в 30 л ферментатора. Эту смесь подвергают культивированию при перемешивании со скоростью 100 об/мин при 33 С с аэрацией со скоростью 30 л в минуту. Углеводород, используемый в данном при- 45
Таблица 3
Выход клеток, Содержание сырого протеина, Соотношение дрожжей ои
93,5
58,9
60,3
59,8
100: 0
90; 10
80:20
70, 30
92,5
107,8
109,2
П0,6
Способ осуществляется следующим образом.
Условия выращивания следующие: рН среды 3,5 — 6,0; температура 25 — 40 С, предположительно от 27 — 35 С, концентрация углеводородов нефти в питательной среде от
0,01 до 1 /о. Во время выращивания в среду подают газ, содержащий свободный кислород.
Смешивание дрожжей, ассимилирующие углеводороды, с углеводород-неассимилирующими дрожжами проводят в начале .культивирования или в процессе ферментации, Пример 1.
Углеводород-ассимилирующие дрожжи Candida brumptii и некоторые углеводород-неассимилирующие дрожжи, такие как Candida utilis, Torulopsis psendaesia, Deboryomyces hansenii, Trigonopsis variabiles совместно культивируют. В 500 мм колбу помещают 30 ил культуральной среды следующего состава, г:
Мочевина 5,0
Хлорид калия 2,0
Сульфат магния 2,0 г
Сульфат цинка 0,03 г
Сульфат двухвалентного железа
Пример 2.
Углеводород - неассимилирующие дрожжи
Rhodotoruba rubra и некоторые углеводородассимилирующие дрожжи, указанные в таблиЭкстракт дрожжей 1,0 г
Водопроводная вода 1,О г рН 5,0 г а также 75 /о фосфорной кислоты 2,7 ил.
Дрожжи, предварительно пророщенные, после промывания в воде добавляются так, чтобы концентрация клеток была около 1)(10 ил.
Культивирование проводят в течение 48 час при 33 С с встряхиванием. Затем определяют выход дрожжевых клеток и содержание сырого протеина в них. Результаты приведены в табл. 1. це 2, совместно культивируют, Условия те же, что в примере 1, Результаты приведены в табл. 2, мере, представляет собой Н-парафин удель. нога веса 0,792,при 4 С. Содержание Н-парафина 99,7 /о по весу и 0,025 /о по весу ароматических углеводородов. Выход дрожжевых клеток и содержание в них сырого протеина представлено в таблице 3.
357749
Таблица 4
Выход клеток, Содержание сырого протеина, Соотношение зерновых культур
54,2
59,8
60,3
100:0
70: 30
30; 70
94,9
109,6
114,3
Предмет изобретения
Составитель М. Ларина
Редактор Л. Народная Техред А, Евдонов Корректор Т. Медведева
Заказ 392/17 Изд. № 1684 Тираж 406 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/6
Типография, пр. Сапунова, 2
Пример 4.
Candida rigosa u Trichosporon pullulans как зерновые культуры смешивают в соотношении
100:О, 70:30 и 30:70 соответственно и каждую смесь добавляют к основной культура Ibной среде так, как и в примере 1. Культивирование приводят непрерывно в качающемся ферментаторе, содержащем 18 л культуральной среды с перемешиванием со скоростью
1000 од|,чин при 33 С и с аэрацией со скоростью 20 л в минуту. Через 68 час определяют степень ассимиляции и содержание сырого протеина в образующихся клетках, Ðåзультаты представлены в табл. 4.
1. Способ получения биомассы путем выращивания дрожжей, ассимилирующих углеводороды, например Candida, Torylopsis, Pichia на среде, содержащей в качестве источника углерода углеводородные фракции нефти в присутствии водной минеральной среды, содержащей источник азота, фосфора, калия, магния и стимулятора роста при аэрации среды, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода биомассы, интенсификации процесса выращивания, а также увеличения содержания протеина в биомассе, выращивание дрожжей, ассимилирующих углеводороды, производят совместно с углеводород-неассимилирующими дрожжами, потребляющими метаболиты, продуцируемые первыми дрожжами.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве углеводород-неассимилирующих дрожжей используют семейство Cryptococcaecae в частности виды Trichosporon pullulans u
10 Truchosporon cutancum.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве углеводород-неассимилирующих дрожжей используют род Candida в частности вид utilis.
15 4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве углеводород-неассимилирующих дрожжей используют род Rhodotorula в частности вид гиЬге и minuta.
5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве углеводород-неассимилирующих дрожжей используют род Torulopsis в частности вид psendaeria.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве углеводород-неассимилирующих
25 дрожжей используют род Debaryomyces в частности вид hansenii.
7. Способ по пп. 1 — 6, отличающийся тем, что в качестве углеводородов используют алифатические углеводороды с открытой цепью, имеющие от 9 до 30 атомов в молекуле, и нефтяные углеводороды, богатые алифатическими углеводородами с открытой цепью.
8. Способ по пп. 1 — 7, отличающийся тем, что выращивание ведут при рН среды, преимущественно равном 3,5 — 6,0, и температуре, преимущественно равной 25 — 40 С, 9. Способ по пп. 1 — 8, отличающийся тем, что концентрацию углеводород в водной питательной среде поддерживают от 0,01 до 1 /о.