Рекомбинантная плазмидная днк pacyclans для переноса и экспрессии в клетках escherichia coli гена l-аспарагиназы erwinia carotovora (ecar-lans) и способ получения рекомбинантной ecar-lans из биомассы штамма e.coli- продуцента

 

Изобретение относится к генной инженерии и биотехнологии и может быть использовано в медико-биологической промышленности. Сконструирована рекомбинантная плазмида (pACYCLANS), содержащая природную последовательность гена L-аспарагиназы Erwinia carotovora (ECAR-LANS), которая находится под контролем промотора и терминатора РНК-полимеразы фага Т7 и кодирует полноразмерный предшественник фермента с сигнальным пептидом для экспорта белка в периплазму с последующим процессингом. Путем трансформации указанной плазмидой штаммов Е.coli, способных синтезировать РНК-полимеразу фага Т7, получают штаммы-продуценты, в которых содержание рекомбинантной L-аспарагиназы составляет от 8 до 12%. Для выделения и очистки фермента из биомассы используют разрушение клеток с помощью ультразвуковой дезинтеграции, фракционирование сульфатом аммония и хроматографию на SP-сефарозе FF. Изобретение обеспечивает получение с высоким выходом очищенного препарата L-аспарагиназы. 2 с.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)н

Формула изобретения

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pACYCLANS для переноса и экспрессии в клетках Escherichia coli гена L-аспарагиназы Erwinia carotovora (ECAR-LANS), имеющая размер 5,8 т.п.н. и состоящая из следующих элементов: фрагмента BamH I-Pst I размером 3 т.п.н. плазмиды рАСYC 177, фрагмента Nhе I-BamH I размером 1,3 т.п.н. плазмиды рBADLANS, содержащего ген ECAR-LANS с нуклеотидной последовательностью SEQ ID №1, фрагмента Bgl II-Xba I размером 0,2 т.п.н. плазмиды рЕТ23(а), фрагмента BamHI-Рst I размером 1,3 т.п.н. плазмиды рЕТ23(а).

2. Способ получения рекомбинантной L-аспарагиназы, включающий стадии культивирования штамма-продуцента в оптимальных для синтеза указанного фермента условиях и последующего выделения и очистки продукта, отличающийся тем, что в качестве штамма-продуцента используют штамм Е.coli, трансформированный рекомбинантной плазмидной ДНК по п.1, а для выделения и очистки фермента применяют разрушение клеток с помощью ультразвуковой дезинтеграции, фракционирование сернокислым аммонием и хроматографию на SP-сефарозе FF.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22

NF4A Восстановление действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение

Дата, с которой действие патента восстановлено: 20.03.2008

Извещение опубликовано: 20.03.2008        БИ: 08/2008

---