Всесоюзная ;оатейтно-тнхш'^езнаи;

ОПИСАНИЕ

И ЗОБ РЕТЕ H И Я

303778

Саве Советских

Сациалистикескил

Республик

К ЙАТЕИТУ

Зависимый от патента ¹

МПК С 07g 7 02

Заявлено 07.Х.1969 (№ 1373837/23-4) Приоритет 18.Х.1968, ¹ P 1803782.6, ФРГ

19.1Ч.1969, М Р 1920045.4, ФРГ

Комитет па далем иеобретеиий и аткрнтий при Совете Ыииистраа

СССР

УДК 547.964.4.05(088.8) Опубликовано 13Л .1971. Бюллетень ¹ 16

Дата опубликован л оппсанпл 28Л 1.1971

Авторы изобретения

Иностранцы

Эккарт Ирион, Альфред Аренс, Эрих Рауенбуш, Клаус Бауер, Отто Вагнер, Роберт Бирлинг и Иоханн Пюттер (Федеративнал Респ .блика Германии) 1

Иностпа

«Фарбенфабр (Федеративнал Ре

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЧАСТИЧНО ДЕЗАМИНИРОВАННОЙ

L-АСПАРАГИНАЗЪ|

Изобретение относится к области химии ферментов и представляет собой способ получения новых, неописанных в литературе частично дезаминированных 1-аспарагиназ, которые могут найти применение в медицине.

Новые соединения имеют лучшие характеристики по сравнению с обычными 1-зспарагипаза ми.

Дезаминирование пептидов азотистой кислотой является широко известной реакцией.

Предлагасмый способ дезаминирования Lаспарагиназы в литературе не описан и заклю:ается B том, что 1-аспарагиназу в растворителе подвергают реакции обменного разложения с азотистой кислотой или соединениями, образующими азотисгую кислоту, обычно в присутствии растворимого в воде нуклеофильного акцептора. В качестве соединений, образующих азотистую кислоту, наиболее применимы нитриты щелочных и щелочноземельных металлов, изоамилнитрит и окислы азота. Реакцию проводят в присутствии воды при рН предпочтительно около 5.

Возможно добавление в реакционную среду органических растворителей. Лучше всего работать в области температур от 0 до 5 С. Степень дезаминирования легко регулировать посредством выбора температуры реакции, причем последнюю обычно заканчивают, добавляя мочевину или устанавливая рН выше 7.

Пример 1. 10 г 1 -аспарагиназы (степень чистоты около 180 ед/лг субстанции) раствори:от в 70 л т воды. дооавллют 500 лг нптрнта натрия и охлаждают до 0 С. После охлаждения прибавлл1о; 1 Х уксусную кислоту до р1-1 равного 5 и смесь перемешивают приблизи10 тельно 12 час при 0 С. При интенсивном вспеHlil:àHèè вследствие пачинающегося образования азота рекомендуется добавлять в реакционную смесь несколько капель трибутилфосфата. Для фракционированного осажде15 ппл смешанного с мочевиной раствора в реакционную смесь добавляют 40 об. % водного раствора полиэтиленгликоля (мол. вес 1550), состоящего из 50 вес. ч. полиэтиленгликоля и

50 вес. ч. воды, размешивают 30 мин. Образо20 вавшийся осадок отделяют на охладительной центрифуге. р»створ выбрасывают. Полученный осадок диспергируют в ледяном ацетоне и после цептрифугироваш1л сушат в вакууме при температуре около 25 С. Обычно доста25 то.-llin в»ку м». созл»в»емого в»доструйным «»сосом, при необходимости можно использовать масляный насос. Полученная частично дезаминированная 1 -аспарагнназа содержит еще 90% первоначального аминного азота.

30 Выход 80 — 90", а от теории.

303778

Количество дозавлениого иитрита, г т емпература реакции, -С

Остаток азота в пролукте, н

Время реакции, «ас

1,5

0,5

1,5

Составители И. Гудкова

Тскрсд А. А, Камышникова Корректоры: A. Николаева и В, Петрова

Редактор Т. Г. Шарганова

Заказ 1777710 Изд. Ха 733 Тираж 473 Подписное

ЦНИИПИ 1 ;о.лнтс1а по дслаги изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, УК-35, Раушская наб., д. 4, 5

Типография, пр. Сапунова, 2

Аналогично получают частично дезаминированные соединения, приведенные в таблице.

Сравнимые результаты можно получить, если реакцию обменного разложения проводить в присутствии растворителя.

Выход 80 — 90% от теории.

Пример 2. 10 г 1-аспарагиназы (степень чистоты около 180 ед/лг субстанции) растворяют приблизительно в 100 ял воды, добавляют 1 г нитрита натрия, 1 г ацетата натрия и 500 гне салпцпловой кислоты, охлаждают раствор до 4 С и после охлаждения устанав,.швают с помощрло 1Х уксусной кислоты рН

4,8. Смесь выдерживают приблизительно 14—

16 mac при 4 С. Затем в раствор добавляют

1 г мочевины, нагревают его до комнатной температуры и после этого проводят фракционированное осаждение реакционной смеси, добавляя 40 об. % водного раствора полиэтиленгликоля (мол. вес. 1550), состоящего из

50 вес. ч. полиэтиленгликоля и 50 вес. ч. воды.

5 После 30 мин стояния осадок отделяют на охладительной центрифуге, диспергируют в ледяном ацетоне и снова центрифугируют, остаток высушивают в вакууме при комнатной температуре.

10 Выход 80 — 90 /в от теории.

Пример 3. Поступают, как в примере 1, только вместо салициловой кислоты добавляют 100 лг фенола.

Пример 4. Поступают, как в примере 1, 15 но вместо салициловой кислоты добавляют

300 мг сульфонсалициловой кислоты.

Предмет изобретения

1. Способ получения частично дезаминиро20 ванной L-аспарагиназы, отличающийся тем, что 1 -аспарагиназу подвергают реакции обменного разложения с азотистой кислотой или с соединениями, образующими азотистую кислоту, 25 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что реакцию проводят в присутствии растворимого в воде пуклеофильного акцептора.