Способ выделения ферментов
ОЛИ САН ИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
Секта Советских
Социалистических
Республик
Зависимый от патента №
Заявлено 18.Xii.1968 (И 1290716/28-13) МПК С 12d 13f10
Приоритет 27.ХП.1967, ¹ 1642615.6, ФРГ
06.IV. 1968, № i 767157.7, ФРГ
Комитет по делам
Опубликовано 21 1Х.1971. Бюллетень № 28
УДК 57/.15.07(088.8) иаобретеиий и открытий при Совете Министров
СССР
Дата опу бликования описания 19.XI.1971
Авторы изобретения
Иностранцы
Отто Вагнер, Клаус Бауер, Вильтррид Кауфманн, Зр11х Рауенбуш, Яльфред Яренс и тккарт Ирион (Федеративная Республика 1 ермани11) Иностранная фирма
«Фарбенфаорикен 1хаиер АГ» (Федеративная Республика i åðìàíèll) Заявитель
СЙОСОЬ ВЫДЕЛЕНИЯ ФЕРМЕНТОВ
Йзобретение относится к ферментной промышленности„в частности к способу выделения ферментов, например L-аспарагиназы.
Известны различные способы выделения ферментных препаратов. Например, /.-аспарагиназу выделяют из культуральной жидкости, полученной при выращивании микроорганизмов, путем введения в нее многоатомных спиртов с последующим добавлением органического р астворителя.
Предлагается в качестве многоатомных спиртов использовать полиалкилены с молекулярным весом не более 10000, предпочтительно 1000 — 5000, в таком количестве, чтобы концентрация полиалкилена в растворе составляла 40 — 60%. В качестве полиалкилсна можно применять полипропилен- или полиэтиленгликоль.
Способ осуществляется следующим образом.
В раствор фермента, содержащий 1 — 30%, лучше 1 — 10%, L-аспарагиназы, вводят 40—
60%-ный водный раствор полиалкилена, предпочтительно полиэтиленгликоля, до дости.кения его концентрации в растворе 15 — 40%, желательно 18 — 30%.
Образующийся осадок отделяюг центрифуи!!рованиеми!, а в полученный фугат вновь вводяг полиалкилен. Эту операцию IIQBIîðÿþã несколько раз. Осадки сооирают п удаляют из них полпалки;!ен, растворяя их B воде и удаляя нерастворимые компоненты.
Из раствор а, освобожденного от полиалкилена, Осажда !От 1--ac!Id() III Il í Ilç), Вводя в него органический раствор пель, например избыток ацетона, диизопронпловый эфир.
10 Из растворенного осадка полпэтпленглпколь можно удалить путем диалпза и выд.лить ферменг, выморажпвая не поддающиеся диализу компоненты.
Кроме того, осадок можно высушить, а затем извлечь 1!Олиалкиленгликоль, В частности
НОлиэтиленглико!ь) с помощью ацетона пли друтих растворителей.
Целесообразно весь процесс выделения ферментов производить прп температуре 0—
40 С и любых значениях рН, предпочтительно
4,0 — 10,0.
Пр им ер 1. 1000 л!.! раствора, полученного из 50 г сырой L-аспарагиназы с активностью 112 ео!,!!г, охлаждают до 3 С и смешивают с 500 л!.! 50%-ного раствора полиэтиленглико:IЯ. Осадок выделЯют цен грифу ированием.
3153оч5
Таблица 2
Активность из расчета на сырую исходную аспарагиназу, 9, Активность, ед/,иг
Выход, г
Таблица 1
1,381
0,362
0,155
1,000
180
38
24
Активность из расчета на исходную сырую аспарагиназу, О, Активность, ед/мг
Выход, г
Предмет изобретения
310
1,46
2,43
1,40
0,64
29
С оста в и тель Н. Сел и верстова
Техред 3. й, Тараненко
Редактор T. Г. Шарганова
Заказ 3252118 Изд, ЪЪ 1324 Тира>к 473 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Типогра<1шя, пр. Сапунова, 2
Пз оставшегося раствора с помощью 100л.i
50це-ного раствора полиэтиленгликоля осаждают дополнительное количество продукта и выделяют его. Фугат снова смешивают с
100 лл раствора полиэтиленгликоля и вызывают новое осаждение. Операцию осаждения раствором полпэтиленгликоля повторяют до
3 — 4 раз. Достигнутые степень чистоты и выход 1-аспарагиназы для четырех фракций приведены в табл. 1.
Пример 2. 100 г сырой аспарагиназы с активностью 103 ед/мг растворя1от в 2 л воды и осветля1от при центрифугировании. Доводя рН раствора до 8,5 с помощью 1N КОН и фракционируют, используя раствор полиэтиленгликоля, как в примере 1. Полученные вторую и третью фракции объединяют. Выход
12 г нли из расчета на исходную активность
88 /о от теории. Получают L-аспарагиназу с активностью 765 ед/мг.
Пример 3. 5,0 г полученной путем фракционирования с помощью ацетона предварительно очищенной L-аспарагиназы с активно4 стью 576 ед/лг растворяют в 100 ял воды и фракционируют несколько раз, используя раствор полиэтиленгликоля, как описано з примере 1.
5 В табл. 2 представлены полученные для четырех фр акций результаты.
1. Способ выделения ферментов, например
20 L-аспарагиназы, из культуральной жидкости, полученной при выращивании микроорганизмов, путем введения в нее многоатомныхспиртов с последующим добавлением органического растворителя, отличающийся тем, что в ка25 честве многоатомных спиртов используют полиалкилены с молекулярным весом не более
10000, предпочтительно между 1000 и 5000, добавляемые в виде 40 — 60% -ного водного р аствора.
30 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве полиалкилена используют полипропиленгликоль.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве полиалкилена используют почи
35 этиленгликоль.
