Способ диагностики обострения холецистита
В хлороформ-метанольном экстракте желчи больного определяют количество малонового диальдегида в нмоль/мл желчи по реакции с тиобарбитуровой кислотой в кислой безводной среде. Параллельно в указанном экстракте определяют количество фосфолипидов в мг/мл желчи. При отношении количества малонового диальдегида к количеству фосфолипидов свыше 5,0 нмоль/мг диагностируют обострение холецистита. Способ точен за счет исключения влияния на конечный результат концентрационного фактора печени и нелипидных компонентов. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике воспалительных заболеваний желчного пузыря.
Известны способы определения малонового диальдегида (МДА) (Минора Ишихара, 1978, И.Д.Стальная, Т.Г.Гаришвили, 1977, K.Yagi, 1976 и др.) по реакции с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), включающие осаждение липидов, поддержание постоянной pH с помощью буфера, экстракцию органическим растворителем окрашенного продукта из водной фазы. Наиболее близким техническим решением является способ диагностики холецистита (И. И. Гончарик, Ю.Х.Мараховский, Э.Д.Либерман, 1985). Способ осуществляют следующим образом. 1. К 1 мл желчи добавляют 0,2 мл 20% раствора трихлоруксусной кислоты. 2. После встряхивания (10 с) центрифугируют при 3000 об/м (30 мин). 3. К 1 мл надосадочной жидкости добавляют 0,2 мл 0,1% серной кислоты и 0,3 мл 10% раствора фосфорно-вольфрамовой кислоты, содержимое тщательно встряхивают (20-30 с). 4. Центрифугируют при 3000 об/м (30 мин). 5. Надосадочную жидкость удаляют, осадок суспендируют в 4 мл дистиллированной воды с добавлением 1 мл 1% раствора 2-тиобарбитуровой кислоты. 6. Суспензию инкубируют на кипящей водной бане в течение часа. 7. После охлаждения до комнатной температуры (18-25 град) добавляют к 5 мл суспензии 5 мл н-бутанола и интенсивно встряхивают (1 мин). 8. После отстаивания и кратковременного центрифугирования (5 мин) отбирают бутанольный слой. 9. Измеряют экстинцию бутанольной фазы на ФЭК с зеленым светофильтром. 10. Расчет проводят, используя в качестве стандарта окисленный кефалин. К недостаткам прототипа можно отнести то, что не учитывается степень концентрации желчи, которая меняется в широких пределах и зависит от многих факторов. Кроме того, экстракция бутанолом не позволяет избежать влияния нелипидных компонентов, таких как сахара, сиаловые кислоты, связанный билирубин и др. Задача изобретения - повышение точности метода. Поставленная задача достигается тем, что проводят определение в хлороформ-метанольном экстракте желчи малонового диальдегида (нмоль/мл желчи) по реакции с тиобарбитуровой кислотой в кислой безводной среде и параллельно фосфолипидов (Ф) (мг/мл желчи) по модифицированной методике Stewart J.C.M., 1980, и при отношении МДА/Ф свыше 5,0 нмоль/мг диагностируют обострение холецистита. Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Экстрагируют липиды хлороформ-метанольной смесью, часть экстракта растворяют в ледяной уксусной кислоте, добавляют ТБК, приготовленную на ледяной уксусной кислоте, и нагревают в кипящей водяной бане в течение часа. После охлаждения измеряют экстинцию при 532 нм. Расчет количества МДА проводят, используя коэффициент молярной экстинции. Параллельно определяют количество фосфолипидов в другой части экстракта по модифицированной методике Stewart J.C.M., 1980. Рассчитывают диагностический коэффициент МДА/Ф по отношению количества малонового диальдегида к количеству фосфолипидов в 1 мл желчи. Конкретный пример выполнения. 1. К 0,2 мл желчи приливают 5 мл хлороформ-метанольной смеси /2:1 по объему/ - встряхивают 2 мин. 2. Приливают 1 мл воды, встряхивают несколько раз, центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин. 3. Верхний водно-метанольный слой экстракта отсасывают, а к отобранным из нижней хлороформной фазы 0,5 мл экстракта вносят в опытную пробу 3,5 мл ледяной уксусной кислоты и 0,5 мл 0,6% ТБК, приготовленной на ледяной уксусной кислоте, в контрольную пробу к 0,5 мл хлороформного экстракта добавляют 4 мл ледяной уксусной кислоты. 4. Пробирки с пробой и контролем инкубируют в течение часа на кипящей водяной бане, охлаждают до комнатной температуры. 5. Измеряют экстинцию окрашенного раствора на спектрофотометре при длине волны 532 нм против контроля. 6. Расчет МДА проводят, используя коэффициент молярной экстинции, равный 1,56![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/183.gif)
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/183.gif)
Формула изобретения
Способ диагностики обострения холецистита путем исследования желчи, отличающийся тем, что в хлороформ-метанольном экстракте желчи определяют количество малонового диальдегида (МДА) в нмоль/мл желчи по реакции с тиобарбитуровой кислотой в кислой безводной среде и параллельно в указанном экстракте определяют количество фосфолипидов (Ф) в мг/мл желчи и при соотношении МДА/Ф свыше 5,0 нмоль/мг диагностируют обострение холецистита.РИСУНКИ
Рисунок 1
Похожие патенты:
Способ определения уровня гликемии // 2118821
Изобретение относится к медицине и касается видов патологии или состояний организма, связанных с нарушениями углеводного обмена, особенно диабета
Изобретение относится к медицине, а именно к прогнозированию развития аллергических заболеваний среди детского населения
Способ определения токсичности крови рыб // 2108580
Способ лечения ишемической болезни сердца // 2107910
Изобретение относится к медицине, в частности, к кардиологии, и может быть использовано для лечения любых клинических вариантов ишемической болезни сердца
Изобретение относится к оптико-электронной промышленности и может быть использовано для комплексного исследования параметров взвеси частиц микронных и субмикронных размеров (10-8 - 10-4 м): распределения частиц по группам с определенными размерами, химического состава частиц, скоростей изменения этих характеристик
Способ оценки микросомальной системы печени при действии ксенобиотиков алкилирующего типа // 2104539
Изобретение относится к области исследования или анализа материалов особыми способами, а именно к способам исследования крови при действии ксенобиотиков, и может быть использовано для оценки микросомальной системы печени после воздействия малых доз иприта и люизита при реальных путях поступления ОВ (отравляющих веществ) в организм, а также при решении задач по уничтожению ХО (химического оружия) в районах военно-химических объектов, в частности по обследованию здоровья населения и обслуживающего персонала в местах по хранению и уничтожению ХО
Способ прогнозирования цирроза печени у больных с хроническими диффузными заболеваниями печени // 2104538
Изобретение относится к медицине, а именно гепатологии, и предназначено для прогнозирования цирроза печени у больных с хроническими диффузными поражениями органа
Способ диагностики сахарного диабета // 2104537
Изобретение относится к медицине, в частности к эндокринологии, и может быть использовано для проведения дифференицальной диагностики инсулинзависимого и инсулиннезависимого диабета, состояния их компенсации
Способ диагностики туберкулеза почек // 2121145
Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, в частности к фтизиоурологии
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в кардиологии и терапии
Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для оценки степени печеночной недостаточности у прооперированных больных механической желтухой различной этиологии
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано при прогнозировании невынашивания беременности
Композиция для диагностики желудочно-кишечного заболевания и способ диагностики этого заболевания // 2124725
Изобретение относится к медицине, точнее к гастроэнтерологии
Изобретение относится к медицине, в частности к урологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики травмы органов мошонки в ее остром периоде
Способ определения иммуногенной активности биоактивных соединений и состав для его осуществления // 2125727
Изобретение относится к медицине и касается нового способа определения иммунологической активности биоактивных веществ путем обработки культуры лейкоцитов периферической крови человека (PBL) или суспензии резидентных перитонеальных клеток (RPC) мыши типа BAL В/с раствором тестируемого вещества