Способ поддержания жизнеспособности еnтамоева нisтоlyтiса

 

Использование: паразитология. Сущность изобретения: поддержание жизнеспособности Entamoeba histolytlca, заключающееся в посеве суспензии фекалий в питательную среду Павловой о нестерильных условиях, в нестерильную среду, инкубирование проводят при температуре 18-20°С в течение двух месяцев, причем через каждые 3-4 сут в инкубационную среду добэвля-ют одну петлю нестерильного измельченного рисового крахмала.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5!)5 С 12 N 1/00, 1/10

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОспАтент сссР) 1 в 1 ();,> л1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

0.59 r. !

СО

0,45 г. до 1л,,ф ой сре- @ инактики или соотно(21) 4880239/13 (22) 02.11.90 (46) 30.06.93. Бюл, М 24 (71) Молдавский научно-исследовательский институт профилактической и клинической медицины (72) М.Л,Станку, А,Л.Панасюк и Н.И.Елашко (56) Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии, 1938, т.7, к.2, с.224-227. (54) СПОСОБ ПОДДЕРЖАНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ ENTAMOEBA KISTOLYTICA

Изобретение относится к паразитологии, а именно к способам поддержания жизнеспособности амеб.

Целью изобретения является упрощение техники поддержания жизнеспособности Entamoeba hlstolytlca.

Это достигается тем, что в предложенном способе посев культуры амеб осуществляют в нестерильную питательную среду в . нестерильных условиях, инкубирование проводят при температуре 18-20 С в течение 2-х месяцев, а культуру подкармливают путем добавления в исходную питательную среду одной петли нестерильного измельченного рисового крахмала через каждые

3 — 4 суток.

Отсутствие необходимосги в стерильной питательной среде, в стерильных условиях при пересеве культуры амеб и в свежих порциях питательной среды приводит к упрощению способа поддержания жизнеспособности амеб, сокращению времени и энергозатрат, необходимых для его осуществления.

„,59„„1824437 А1 (57) Использование: паразитология, Сущность изобретения; поддержание жизнеспособности Entamoeba histolytica, заключающееся в посеве суспензии фекалий в питательную среду Павловой в нестерильных условиях, в нестерильную среду, инкубирование проводят при температуре

18-20"С в течение двух месяцев. причем через каждые 3 — 4 сут в инкубационную среду добавляют одну петлю нестерильного измельченного рисового крахмала.

Предложенный способ реализуют следующим образом. По ивзестному в прототипе рецепту приготавливают питательную среду(среда Павлова), содержащую следующие ингредиенты:

1. Хлористый натрий 8,5 r, 2. Двухзамещенный фосфорнокислый натрий безводный (йагНРО4)

3. Однозамещенный фосфорнокислыи калии (KH2PO4)

4. Вода дистиллированная

В пробирку с 10 мл нестерильн дой добавляют 0,5 мл стерильной не вированной лошадиной сыворот сыворотки крупного рогатого скота ( шение 1:20) и петлю нестерильного измельченного рисового крахмала. Далее, в тех же нестерильных условиях, осуществляют посев 0,5 мл суспензии фекалий, содеожащих амеб на физиологическом растворе (соотношение фекалий к физраствору — 1: lO) в пробирку с питательной средой и инкубируют ее при комнатной температуре (18 20"С) в

1824437 течение 2-х месяцев. Через каждые 3 — 4 суток в пробирку с культурой добавляют петлю нестерильного измельченного рисового крахмала.

Составитель М.Станку

Техред М.Моргентал

Корректор B.Ïåòðàø

Редактор

Заказ 2216 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35. Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент-, г. Ужгород, уп.Гагарина. 101

Пример осуществления способа. Суспензию фекалий, содержащую амеб в просветной форме, инкубировали в среду

Павлова в соответствии с известным и предложенным способами. Сравнительную оценку результатов проводили по следующим критериям: затраты времени и электроэнергии на реализацию способов; концентрация амеб в питательной среде в конце периода инкубации; длительность сохранения жизнеспособности амеб; сохранение исходной формы у амеб; простота в осуществлении и доступность способа, Полученные результаты показали, что при использовании предложенного способа в сравнении с известным затрачивается в

12,5 раза меньше времени (28 и 350 минут), а энергозатраты составляют, соответственно 0 и 20 Квт/час (период наблюдения — 2 месяца). За этот период культура амеб оставалась жизнеспособной при использовании обоих способов, а концентрация амеб в питательной среде в конце инкубации была примерно на одинаковом уровне (126 и 135 амеб в среднем в 1 мл питательной среды), В конце периода наблюдения при обоих способах амебы сохраняли исходную просветную формул проявляли в начале микроскопии несколько пониженную двигательную активность. В ходе микроскопии амебы быстро восстанавливали свою обычную подвижность (видимо, под влиянием света и других факторов).

Ограничение роста бластоцистов и бактерий, в т.ч. кислотообразующих, содержащихся в фекалиях и способных угнетать амеб, обеспечивается добавлением в среду

5 измельченного рисового крахмала, инкубированием среды при неоптимальной для большинства кишечных микроорганизмов температуре (18-20 С) и относительно коротким периодом инкубации (2 месяца), Этим же исключается возможность изменения исходной формы существования амеб и их биологических свойств в процессе инкубации.

Таким образом, предложенный способ

"5 поддержания жизнеспособности дизентерийной амебы в значительной степени проще и экономичнее известного, не уступает ему по продолжительности сохранения жизнеспособности амеб и по их концентрации

20 в питательной среде, прост в осуществлении и широкодоступен. Рекомендуемый способ может использоваться для транспортировки исследуемого материала. а также в учебных и научных целях.

Формула изобретения

Способ поддержания жизнеспособности Entamoeba histolytica, включающий посев суспензии фекалий в питательную среду

Павловой с последующим инкубированием, 30 отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, посев осуществляют в нестерильных условиях и в нестерильную

- среду, инкубирование проводят при температуре 18 — 20 С в течение двух месяцев, 35 причем через каждые 3-4 суток в инкубационную среду добавляют одну петлю нестериль ного измельченного рисового крахмала.