Питательная среда для культивирования балантидий свиней

 

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАЛАНТИДИП СВИНЕЙ, Содержащая натрий хлористый,натрий фосфорнокислый двузамещенный, калий фосфорнокислый одноэамеценный, крахмал -и воду, отлич я-с я тем, что, с целью удлинения сроков переживания балантидий и увеличения их биомассы, среда дополнительно содержит биогенный стимулятор ФиБС при следующем соотношении ингредиентов, г/л: Натрий -хлористый 6,0-8,0 Натрий фосфорнокислый двузамещенный 1,0-2,0 Калий фосфорнокислый однозамещенный 0,6-1,0 Биогенный стимулятор ФиБС80,0-150,0 Крахмал6,25-1(0 водаДо 1 л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСЛУБЛИН

3(50 С 12 N 1 10

0,6-1,0

80 0.-150,0

6,25-10 0

До 1 л

0CV)3APCTBEHHblA HOMHTET CCCP

fIO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3384720/30-15 (22) 29.12 ° 81 (46) 15 05 ° 83. Бюл. Р 18 (72) А.Ф. Манжос,Л.К. Лихвоэ и В.С. Сумцов (71) Украинский ордена Трудового

Красного Знамени научно-исследовательский институт экспериментальной. ветеринарии (53) 616.993.1 (088 8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

9 699015, кл. С 12,N 5/02, 1978. (54)(57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАЛАНТИДИЙ СВИНЕИ, содержащая натрий хлористый, натрий фосфорнокислый двуэамещенный, калий

„„SU„„1017727 фосфорнокислый одноэамещенный, крахмал "и воду, отличающаяся тем, что, с целью удлинения сроков переживания балантидий и увеличения

Нх биомассы, среда дополнительно содержит биогенный стимулятор ФиБС при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Натрий хлоюистый 6,0-8,0

Натрий фосфорнокислый двуэамещенный 1,0-2,0

Калий фосфорнокислый одноэамещен ный

Биогенный стимулятор

ФИБС

Крахмал

Вода

1017727 лены в табл.1.

1

Изобретение относится к биологии, а именно к средам для культивирования паразитических инфузорий, и может быть использовано в работе диагностических лабораторий.

Известна среда для культивирования 5 балантидий свиней, содержащая хлористый натрий, двуэамещенный фосфорнокислый натрий, одноэамещенный фосфорнокислый калий, лизат слизистой оболочки кишечника свиней, крахмал 10 и воду (.1g.

Однако на укаэанной среде баланти: ий хорошо растут и размножаются s течение первых 72 ч. В дальнейшем среда мутнеет и для поддержания интен;5 сивного роста паразитов необходимо проводить частые пересевы.

Целью изобретения является удлинение сроков переживания балантидий и увеличение их биомассы.

Поставленная цель достигается тем, что среда дополнительно содержит биогенный стимулятор ФиБС при следующем соотношении ингредиентов,. г /л:

Натрий хлористый 6,0-8,0

Натрий фосфорнокислый двуэамещенный 1,0-2,0

Калий фосфорнокислый однозамещенный О, 6-1 0

Биогенный:стимулятор

ФиБС 80,0-150,0

Крахмал . 6,25"10,0

Вода До 1 л

П р, и м е р 1..Питательную среду приготавливают следующим образом. 35

Взвешивают 6 5 r хлористого натрия, 1 2 r натрия фосфорнокислого двузамещенного 0,6 г калия фосфорнокислого однозамещенного и растворяют их в 1000 мл дистиллированной воды ° В 40 течение 10 мин раствор стерилиз:ют кипячением. После стерилизации удаляют осадок путем двукратного фильтрования через фильтровальную бумагу и доводят объем дис-иллированной во- 45 дой до первоначального.. Измеряют рН среды и титруют ее 53-ным водным раствором едкого натрия до 7,2-8,0.

Среду разливают в пробирки по 9 мл и стерилнзуют в автоклаве при l атм в течение 20 мин, после остывания добавляют на кончике скальпеля рисовый крахмал и оставляют до полного просветления ° Хранят среду в бытовом холодильнике до 30-45 дней.

Перед посевом балантидий в каждую 55 пробирку добавляют ФиБС s дозе 1 мл.

ФиБС - это биогенный стимулятор, приготовленный из отгона лиманной грязи и содержащий коричную кислоту, кумарины. Представляет собой бесц- 60 ветную жидкость, рН 4,6-5,4, расфасован в ампулы по 1 мл.

Пример 2. От 26 поросят отобран ма ериал (фекальные массы), который исследовали микроскопически на предмет обнаружения балантидий.

В 17 пробах обнаружены простейшие (до 2500 экземпляров в 1 грамме). Со

scex проб произвели высев на предлагаемую питательную среду и известную среду, которая служила в качестве контроля (по 3 пробирки из каждой пробы). Высев производили фекальными массами (плотные - величиной с горошину, жидкие 2-5 капель).

Размножение простейших на предлагаемой среде наблюдалось уже к 18-му часу после посева. Плотность паразитов достигала 1500 в 1 мл. Размножение балантидий на известной среде к этому времени не отмечалось.

Результаты исследований представПервый пересев на обе среды производили на 24-м часу. Максимум роста отмечали к 48-му часу. Последующие пересевы на предлагаемую среду осуществляли через каждые 120 ч. На известную среду пересевы делали через

48-72 ч, так как через 96 ч она,становилась мутной, с хлопьями, и через

144 ч культура погибала, Переживаемость балантидий на предлагаемой среде достигала 336 ч. Культурально балантидий вЫделены иэ всех 26 проб. Всего произвели 12 пассажей.

В.табл. 2 представлены среды с оптимальным, минимальным и максимальным содержанием компонентов. !

Влияние содержания компонентов на рост балантидий в культуре показано в табл.3 °

Как видно из табл.3, оптимальное содержание компонентов в среде способствует более длительному периоду активного роста простейших (до 96 ч), позволяет получить более высокую концентрацию возбудителя (до 5 тыс. в 1 мл) и достичь .общей переживаемости культуры до 14 сут.

Предложенная среда пригодна как для выделения балантидий из фекалий, так и для дальнейшего их пассирова" ния и накопления, биомассы возбудителя, Среду используют также в диагностических целях.

Применение указанной среды экономит химреактивы и время исследователя, так как пересевы производят через 5 сут, а также нет необходимости в приготовлении лизата слизистой оболочки кишечника свиней (ФиБС выпускается промышленностью).

1017727

ТаблиЦа.1

1 е

Размножение балантиднй на предлагаемой и известной средах

Ю

Количество трофозоитов балантидий в 1 мл среды, тыс .

Время после посева, ч

Предлагаемая

Известная

18.1,5 1,5

2,0-2,5

3,0-5,0

3,0-5,0

3,0-5,0

2,5-4,0

120

0,5

144

2,0-2,5

168

192

216

240

0,5-1,0

264

288

0,5

0,5

312

0i5

336

360

Т а б л и ц а 2

Ю

Содериание в среде, г/л нимальное оптималъное максималънов

Компоненты

6,0

Натрий хлористый

6,5

3,0

Натрий фосфорнокислый двузамещенный

0,8

1,2

2,0

Калий фосфорнокислый сдноэамещенный

0,4

0,6

1,0

80 100,0

ФиВС

Крахмал

150 0

6 25

7,5

10 юмам

1,5-2,0

1,0-1,5

1,0-1 i 5

0,5-1,0

2,5-3 0

2,5-3 0

2,0-2,5

1,0-1,5.

1017727

Таблица 3

Интенсивность роста балантидий (тыс. в 1 мл) на среде с содержанием компонента минимальным оптимальным максимальным

Время после посева

l,5

0,5

0,5-1, 0

1,0-1 5

1,5-2,0

1,0-1,5

96

120

0 5

144

0,5

168

192

1,.0-1,5

1,0-1,5

0,5-1 0

216

24 О.

264

0,5-1,0

0,5

288

312

0,5

336

0,5

360

Составитель A. Филиппова

Редактор Л. Веселовская ТехредМ.Коштура Корректор Н. Шаро :

Заказ 3481/28 Тираж 523 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва, Ж-35, Раушская наб., д 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

2,0-2,5

3,0-5,0

3,0-5,0

3,0-5,0

2,5-4,0

2,0-2,5

1,5-2,0

1,0-1,5

1,5-2,0

1,5-2,5

1,0-2,0

1,0-1,5

0,5-1,0