Способ определения активности клеточного иммунитета

 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Цель изобретения повышение точности способа. Обследуемому внутрикожно вводят простогландин Еа и физиологический раствор, измеряют кожную реакцию на их введение, и при увеличении ее после введения простогландина Ез по сравнению с физиологическим раствором определяют выраженную реакцию клеточного иммунитета и наоборот при снижении реакции в ответ на введение простогландина Е2 - сниженную реакцию. По сравнению с прототипом увеличивается чувствительность способа как у здоровых, так и у больных хроническим гастритом и бронхиальной астмой. в Р

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (ss)s G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕ НТ С С С P) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 4725406/14 (22) 02.08.89 (46) 30.01.93. Бюл. М 4 (71) Вильнюсский государственный университет (72) Б.А. Шаткаускас и Ю,П. Пучинскас (73) Б.А. ШаткаускаС и Ю П. Пучинскас (56) Алессандер Дж.У., Гуд P.À. Иммунология для хирургов, М.: Мир, 1974, с.71. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА (5T) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Цель изобретения—

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии при тех болезнях, в па1огенеэе которх определяющее значение имеют иммунные нарушения, Так, например. при иммунокомплексных болезнях (васкулиты, гломерулонефрит, системная красная волчанка, ревматоидный артрит, амилоидо1 и др.), при болезнях с гиперергическим состоянием организма (бронхиальная астма, ревматизм и другие системные болезни соединительной ткани, неСпецифический язвенный колит, тиреоидит Хашимото, активные гепатиты и др.), прИ болезнях с анергическим состоянием организма (диссеминированный туберкулез, саркоидоз, болезнь Ходжкина, опухоли различных типов, микоплазменная инфекция и др.).

Известные способы: для оценки состояния клеточного иммунитета (иммунокомпетентности) лучшими тестами являются кожные реакции с разными антигенами, такими, как туберкулин (РРД), трихофитин, кандидин, стрептокиназа, или митогенами, „„SU ÄÄ 1792535А3 повышение точности способа. Обследуемому внутрикожно вводят простогландин Е2 и физиологический раствор, измеряют кожную реакцию на их введение, и при увеличении ее после введения простогландина Ет по сравнению с физиологическим раствором определяют выраженную реакцию клеточного иммунитета и наоборот при снижении реакции в ответ на введение простогландина Ez — сниженную реакцию. По сравнению с прототипом увеличивается чувствительность способа как у здоровых, так и у больных хроническим гастритом и бронхиальной астмой.

0» как фитогемагглютинин (ФГА), конканавалин А. Особенно трудно интерпретировать данные, полученные 1п vitro. Поэтому в практике используются кожные пробы, Наиболее выраженной митогенностью обладает и чаще всего используется во всем мире

ФГА, который при исследованиях вводится внутрикожно в дозе 0,1 мл 0,040 -ного раствора. Он и принят за прототип. Если внут- О рикожное введение антигена или митогена ) вызывает реакцию замедленного типа, ко- Ql торая проявляется через 24-48 ч покрасне- (,Д нием, отечностью и уплотнением и Ц1 характеризуется мононуклеарной инфильтрацией, то это отражает активность клеточного иммунитета, которая проявляется в виде реакции гиперчувствительности, Большая часть иммунных клеток, образующих инфильтрат, не специфично в отношении данного антигена и мигрирует в очаг воспаления под действием лимфокинов.

Однако ФГА содержит много (15-85 ) белков растительного происхождения. Известно, что чужеродные организму белки яв1792535

10

15 ние точности способа

25

55 ляются для него сильными аллергенами и вызывают нежелательную сенсибилизацию организма. Наши некоторые иммунологи даже считают внутрикожное введение ФГА нежелательным, В связи с этим недостатком ФГА возникает необходимость в поисках других митогенов для изучения клеточного иммунитета, не обладающих аллергизирующими свойствами. Такой субстанцией в наших исследованиях оказались простагландины (ПГ), которые являются циклическими ненасыщенными жирными кислотами, растворимые в воде и жирах. ПГ не содержит белков. В организме они синтезируются из жирных кислот, при участии комплекса ферментов, в котором особое значение принадлежит простагландин-синтетазе.

Целью изобретения является повышеСпособ осуществляют следующим образом. В кожу сгибаемой поверхности предплечья при помощи туберкулинового шприца с тонкой иглой вводится простагландин Е (ПГЕг) (иэготовленный в секторе чистых веществ Института хймии АН Эстонской CCP) в дозе 0,05 мкг разведенного в

0,1 мл стерильнбго физиологического раствора. Это оптимальная доза, хотя реакцию

ГЗТ вызывают меньшие и большие дозы

Интервал дозы возможного использования

0,01 — 0,1 мкг. Меньшая доза часто не вызы вает образование папулы, а большие дозы вызывают сильную местную реакцию (pe3кое покраснение кожи, болезненность, иногда появляется общее недомогание, сердцебиение).

Для контроля в кожу предплечья другой руки вводится 0,1 мл физ. раствора и на расстоянии 6-7 см внутрикожно вводится

0,05 мл 0,04 раствора ФГА с 0,05 мл физиологического раствора, На месте введения митогенов (ФГА и

ПГЕг) через 24 — 48 ч появляется покраснение, отечность и уплотнение кожи; последнее называется папулой. При проведении теста измерялась величина папулы по двум перпендикулярным размерам по формуле.

Такие исследования проведены у 10 здоровых людей (контрольная группа), у 38 больных разными формами хронического гастрита и у 20 больных бронхиальной астмой.

П р и м .е р 1. Больная К.А.Т., 22 года.

История болезни ¹ 2488/185. Диагноз БА, кожная реакция на ФГА через 6 часов

3,1 мм, через 24 ч 77,7 мм, через. 48 ч

12 мм, а кожная реакция на ПГЕг через 6 ч

81,4, через 24 ч 102,1 мм и через 48 ч 47 мм . Клеточный иммунитет периферической крови: лейкоцитов 11,600 (в 1 мкл), лимфоцитов 2204 (в 1 мкл), Т-лимфоцитов 1102 (e 1 мкл), В-лимфоцитов 1080 (в 1 мкл), Т-хелперов 404 (в 1 мкл), Т-супрессоров 198 (в 1 MKn), соотношение Т-хелперов/Т-супрессоров—

4,5. Данные подтверждают выраженную реакцию клеточного иммунитета.

Пример 2. Больной К.З.И., 23 года.

История болезни ¹ 13486/820. Диагноз БА, Кожная реакция на ФГА через 6 ч 0,44 мм, через 24 ч 11,33 мм, через 48 ч 101 мм, Кожная реакция на ПГЕ через 6 ч 8 мм, через 24 ч 30,75 мм, через 48 ч 21,3 мм .

Клеточный иммунитет периферической крови: лейкоцитов 8,300 (в 1 мкл), лимфоцитов

1411 (в 1 мкл), Т-лимфоцитов 522 (в 1 мкл), В-лимфоцитов 310 (в 1 мкл), T-хел перов 57(в

1 мкл), Т-супрессоров 37 (в 1 мкл), соотношение Т-хелперов/Т-супрессоров — 1,5. Данные свидетельствуют о сниженной реакции клеточного иммунитета.

При сравнении кожной ГЗТ на введение

ФГА (прототип) и ПГЕг отмечены следующие различик у здоровых лиц реакция ГЗТ на ПГЕ2 через 24 ч несколько меньше, чем на ФГА (средний размер папул соответственно 16,23 и 3,2 и 21,74 4- 3,85 мм ), однако реакция ГЗТ íà ПГЕг более выражена после 6 и 48 ч, чем реакция на введение

ФГА,,Следовательно, кожные папулы после введения ПГЕг образуются несколько раньше и значительно дольше сохраняются, т.е.

ПГЕ2 обладает более длительным местным действием, чем ФГА, На основании этих данных можно рекомендовать внутрикожный тест с ПГЕг для оценки ГЗТ, а также активности клеточного иммунитета, причем тест с ПГЕ более чувс вителен и постоянен, чем тест с ФГА. Данные с ГЗТ, получаемые при использовании ФГА через 6 и 48 ч, вариабельны, неустойчивые, часто папулы отсутствуют и поэтому эти данные обычно не учитываются, Применяя, используя ПГЕг, можно использовать и данные о величине папул через 6 и 48 ч, что позволяет более точно определить общую активность клеточного иммунитета.

Значительно более выраженное преимущество ПГЕ перед ФГА обнаружено при исследовании клеточного иммунитета у больных разными формами хронического гастрита. Обследовано по той же методике

27 больных хроническим гастродуоденитом, 26 — первичным атрофическим гастритом, сочетанным с хроническим холециститом и

10 практически здоровых людей. Размеры папул определялись через 6,24 и 48 часов,, Полученные данные показали, что кожная реакция на ФГА у больных хроническим гастродуоденитом и атрофическим гастри1792535

Составитель В.Литовченко

Техред M.Mîðãåíòàë Корректор H.Ðåâñêàÿ

Редактор Н.Егорова

Заказ 175 Тираж . . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета tio изобретениям и открытИям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 475

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 том идентична и не отличается от кожной исследования. Кожные папулы при испольреакции контрольной группы (здоровые лю- зовании ПГЕ четко выявляются уже через ди). Следовательно, по данным исследова- Ь ч, максимума достигает через 24 ч и вырания с ФГА активность клеточного женными остаются через 48 ч. Между тем иммунитета у больных гастритами не изме- 5 величина папул посла введения ФГА у больнена и соответствует таковой у здоровых. ных ИАБА достоверно определяется через

Между тем, по данным образования папул 24 ч (достигает максимальных размеров), и на введение ПГЕг у больных хроническим значительно снижается через 48 ч, При исгастродуоденитом общая активность кле- пользовании ФГА результаты исследования точного иммунитета повышена (23,3 + 10 обычно через 6 и 48 ч не учитываются из-за

2,43, контроль 16,23 . 3,2 мм ), при первич- . непостоянства результатов. Однако применом атрофическом гастрите не изменена нения ПГЕ2 позволяют четко выявить Обра(нормальная), а при вторичном — пониже- зование кожных папул на протяжении всего на(11,4+ 2,76мм )..., времени исследования, т.е, через 6,24 и

Таким образом, внутрикожный тест с 15 48 ч и реакция определяется более выраПГЕг для определения активности клеточ- женная. Таким образом можно заключить, ного иммунитета является значительно что ПГЕ2 обладает выраженным местным чувствительный, чем тест с ФГА: при ис- действием и способен вызывать образовапользовании ПГЕ имеется возможность по ние папул, сохраняющиеся на продолжиизменениям иммунологической активности 20 тельное время. В связи с этим понятием, что дифференцировать разнйе формы хрониче- ПГЕ является стимулятором клеточного имского гастрйтэ, используя же ФГА зта диф- мунитетэ и сгражает активйость клеточнбго ференцировка невозможна, так как тест с иммунитета у больных ИАБА.

ФГА имеющиеся различия эктивйости кле- Формула изобретения точного иммунитета при разных формах 25 Способ определения активности клехрОнического гастрита-невыявляет(нерас- точного иммунитета, включающий внутри- крывает наличие различий).. кожное введение митогена.М параллельно с

Результаты исследования величины па- ним физиологического раствора с последупул после внутоикожного введения ФГА и . ющим измврением кожной реакциии поизПГЕ у больных инфекционно-аллергиче- 30 менению кожной реакции йа митоген по ской бронхиальной астмой (ИАБА) и здоро- сравнению с кожной реакцией на фйзиоловых лиц показало, что реакция на ПГЕ была гический раствор определют активность значительно более выраженной по сравне - : клеточного иммунйтета, o ò л и ч i ю щ и и > нию е аналогичным контролем и у больных с я тем, что, с целью повышения чувстви.ИАБА, а также и по сравнению с данными 35 тельности способа, в качестве митогена исреэкции на ФГА через определенное время . пользуют простогландин Е2.