Способ определения гистамина в пищевых продуктах

 

Использование: пищевая промышленность , гигиена питания, контроль качества M. by ce 9, А нва продуктов. Сущность изобретения: анализируемый материал экстрагируют этанолом. Проводят стабилизацию флуорофора гистамина добавлением к экстракту 0,3 мл 6 н, HCI параллельно в опытной и контрольной пробах. В контрольной пробе гистамин предварительно разрушают путем инкубации с 0,2 мл 0,01 М раствора йода в воде в течение 8-12 мин. Проводят концентрацию с 0-фталевым альдегидом. Концентрацию гистамина X определяют по формуле X /у - Ь/ : а , где у - величина интенсивности флуоресценции опытной пробы при Я 440 нм, b - величина интенсивности флуоресценции контрольной пробы, а - значение тангенса угла наклона калибровочного графика. 1 табл. 1 пр. со С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (stis G 01 N 21/64

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

0

О .0 х = (у — Ь): а, (21) 4903121/13 (22) 06.12.90 (46) 23.01.93. Бюл, М 3 (71) Латвийская медицинская академия (72) И.Э.Калниня и P,К.Блума (73) Латвийская медицинская академия (56) Авторское свидетельство СССР

¹ 845099, кл. G 01 N 33/52, 1979.

С.Guttierrez, Я Rubio, А.Gomez-Hens, М, Valcarcel Determination of histamine by

derivative synchronous fluorescence

spectrometriy, — А.nal. Biochem, 1987-, ¹ 59, р.769 — 773, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИСТАМИНА

В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ (57) Использование: пищевая промышленность, гигиена питания, контроль качества

Изобретение относится к области гигиены питания, касается вопроса контроля продуктов, в частности содержания в них биологически активных веществ.

Известен способ определения гистамина в пищевых продуктах, основанный на флуоресцентном измерении продукта конденсации амина с флуорогеном (О-фталеBûм альдегидом), Флуоресценцию регистрируют с использованием синхронных спектров и их производных, что требует дополнительного времени 15 — 20 минут на каждый анализ.

Цель изобретения — повышение чувствительности способа, сокращение времени исследований.

Поставленная цель достигается тем, что проводят экстракцию гистамина этанолом, стабилизацию флуороформа гистамина про, Ы,, 1790756 АЗ продуктов. Сущность изобретения: анализируемый материал экстрагируют этанолом.

Проводят стабилизацию флуорофора гистамина добавлением к экстракту 0,3 мл 6 н, HCI параллельно в опытной и контрольной пробах. В контрольной пробе гистамин предварительно разрушают путем инкубации с 0,2 мл 0,01 М раствора йода в воде в течение 8 — 12 мин. Проводят концентрацию с О-фталевым альдегидом. Концентрацию гистамина X определяют по формуле

Х = /у - Ь/; а, где у — величина интенсивности флуоресценции опытной пробы при

1= 440 нм, b — величина интенсивности флуоресценции контрольной пробы, а — значение тангенса угла наклона калибровочного графика. 1 табл, 1 пр. водят параллельно в опытной и контрольной пробах добавлением по 0,3 мл 6 н. раствора соляной кислоты, при этом в контрольной пробе гистамин предварительно разрушают путем инкубации с 0,2 мл 0,01 М раствора йода в воде в течение 8 — 12 мин, а концентрацию гистамина определяют по формуле где х — концентрация гистамина, у — величина интенсивности флуорес; ценции контрольной пробы, а — значение тангенса угла наклона калибровочного графика.

Способ осуществляется следующим образом.

Приготовление экстракта гистамина, 2 г анализируемого материала растирают в

1790756

55 фарфоровой ступке со стеклянным порошком, постепенно добавляя 20 мл этанола.

Гомогенат переносят в пробирку емкостью

50 — 70 мл с притертым шлифом. Экстракцию гистамина проводят в водяной бане при 60 С в течение 15 мин, Затем пробирку охлаждают до комнатной температуры, гомогенат фильтруют через бумажный фильтр. 1 мл фильтрата (экстракт гистамина) переносят в мерную колбу на 100 мл и этанолом доводят объеМ до метки, Для определения гистамина из колбы отбирают в две пробирки по 1 мл раствора, В одну пробирку (холостая проба) добавляют 0,2 мл 0,01 М раствора йода, а в другую (опытная проба) — 0,2 мл бидистиллированной воды и хорошо смешивают. Через 8 мин в обе пробирки вносят, каждый раз хорошо перемешивая, 0,3 мл NaOH и 0,35 мл

2 -ного раствора ОФА и через 5 мин 0,3 мл

6 н,НС1.

Флуоресценцию флуорофора гистамина измеряют при длине волны возбуждения

360 нм и испускания 440 нм., При расчетах содержания гистамина используется градуировочный график, который отражает интенсивность флуоресценции (!ф) продукта конденсации стандарта гистамина с О-фталевым альдегидом в зависимости от концентрации амина в образце.

Градуировочный график описывается уравнением регресии х=(у- b): а, где x — концентрация гистамина;

Формула изобретения

Способ определения гистамина в пищевых продуктах, включающий экстракцию анализируемого материала спиртом, конденсацию его с О-фталевым альдегидом в щелочной среде, стабилизацию полученного флуорофора гистамина кислотой, разбавление спиртом до концентрации гистамина, соответствующей диапазону стандартных концентраций его на калибровочном графике, измерение интенсивности флуоресценции, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, для экстракции вбсачестве спирта используют у — величина интенсивности флуоресценции опытной пробы; а — значение тангенса угла наклона;

b — интенсивность флуоресценции образца при х = 0 (контрольной пробы);

Данное уравнение позволяет по величине интенсивности флуоресценции образца рассчитать в нем содержание гистамина, Пример. Интенсивность флуоресценции опытной пробы (ф ОП) — 104,7 относит. ед„интенсивность флуоресценции холостой пробы — (ф ХП) 45,1 отн.ед.

)ф ОП вЂ” 1ф ХП = 104,7 — 45,1 =

= 59,6 (отн.ед.).

Содержание гистамина в пробе рассчитывают по уравнению регрессии (конкретно

20 х = (у — 9,5); 825,3) х — 2 — 0,0607 (мкг/мл), 59 6 — 9 5

С учетом коэффициента разведения образца 1000 содержание гистамина в анализируемом материале составляет

6,07 мг/100 г.

Положительный эффект заключается в повышении чувствительности способа в

1,5 — 1,6 раз и сокращении времени исследований на 1/3 (80 — 90 и 50 — 60 мин соответствен но).

В таблице приведены характеристики

35 флуоресцентного метода определения гистамина в пищевых продуктах. этанол, стабилизацию флуорофора гистами40 на проводят параллельно в опытной и контрольной пробах путем добавления по 0,3 мл 6 н, HCI, при этом в контрольной пробе гистамин предварительно разрушают путем инкубации с 0,2 мл 0,01 M раствора

45 йода в воде в течение 8 — 12 мин, а концентрацию гистамина определяют по формуле х = (у- b): а, где х — концентрация гистамина; у — величина интенсивности флуоресценции опытной пробы при А= 440 нм; b — величина

50 интенсивности флуоресценции контрольной пробы; г — значение тангенса угла наклона калибровочного графика.

1790756

15

25

35

Составитель О,Комарова

Техред М,Моргентал Корректор Е.Папп

Редактор Т.Иванова

Заказ 3;4 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101