Питательная среда для выделения клостридий

 

Использование: микробиология, диагностические исследования, бактериологическое выделение клостридий. Сущность изобретения заключается в том, что используют для выделения клостридий питательную среду следующего состава, г/л: гидролизат коллагена 12,00-15,00; пептон 12,00-15,00; глюкоза 8,00-9,00; натрий хлористый 7,00-8,00; экстракт кормовых дрожжей 4,00-6,00; цистеин 0,20-0,25; сульфоксилатформальдегид натрия 0,75-1,00; агар 11,00-12,00; метиленовый синий 0,002; борная кислота 2,00-2,50; лимоннокислый натрий 0,15-0,20 и вода до 1 л. На данной питательной среде ингибируется рост следующих видов бактерий, являющихся ассоциантами клостридий: кишечная палочка, протей, стрептококк кледенеллы. 2 табл.

Изобретение относится к медицине, преимущественно к клинической и санитарной микробиологии, и предназначено для выделения клостридий. Известна питательная среда для диагностики возбудителей раневой инфекции, содержащая в качестве белкового питания гидролизат коллагена А, пептон, глюкозу, натрий хлористый, экстракт кормовых дрожжей, цистеин, сульфоксилатформальдегид натрия, агар и воду. Однако эта среда не обеспечивает выделения культур клостридий из микробной популяции. Целью изобретения является повышение селективных свойств. Цель достигается тем, что питательная среда для выделения клостридий, содержащая гидролизат коллагена, пептон, глюкозу, натрий хлористый, экстракт кормовых дрожжей, цистеин, сульфоксилатформальдегид натрия, агар и воду, дополнительно содержит метиленовый синий, борную кислоту, лимоннокислый натрий при следующем содержании ингредиентов, г/л: Гидролизат коллагена А (с мол. м. пептидов 400,00-1000,00) 12,00-15,00 Пептон бактериоло- гический 12,0-15,00 Экстракт кормовых дрожжей 4,00-6,00 Цистеин 0,20-0,25 Натрий лимоннокислый 0,15-0,20 Глюкоза 8,00-9,00 Натрий хлористый 7,00-8,00 Сульфоксилатфор- мальдегид натрия 0,75-1,00 Метиленовый синий 0,002 Борная кислота 2,00-2,50 Агар 11,00-12,00 Вода дистиллиро- ванная, л До 1 л П р и м е р 1. Питательную среду приготавливают следующим образом. 36,352-48,952 г сухой питательной среды разводят в 1000 мл дистиллированной воды, рН доводят до 7,6-7,8 раствором гидрокарбоната натрия (10%), нагревают до кипения и полного растворения коллагена и пептона (при необходимости фильтруют через бумажный фильтр). Полученную среду разливают в колбы или флаконы, стерилизуют при 0,5 атм в течение 15-20 мин. Перед употреблением среду расплавляют, добавляют борной кислоты до содержания 2,00-2,50 г/л и разливают в чашки Петри, после застывания их подсушивают в термостате при 37^оС 20-30 мин. В работе используют клинический и музейные штаммы: Сl. perfringens G. Cl. pеrfringens 853, Str. falcalis 372, Pr. vulgaris 46, St. fureus 209. E. coli R-1, выращенные в сахарном бульоне на мясопептонном агаре. Бульонные культуры разводят десятикратным разведением в физиологическом растворе до 10^-6. Пипеткой наносят по 0,1 мл соответствующей суспензии бактерий на предварительно подсушенные чашки с предлагаемой средой и средой-прототипом (по три чашки с каждой культурой), затем равномерно распределяют шпателем по всей поверхности чашки, культивируют 18-20 ч при 37^оС. Культуры клостридий и стрептококка выращивали в среде Китт-Тароцци и на кровяном агаре Цейсслера. 24-36-часовые бульонные культуры клостридий разводят до 10^-4, стрептококка до 10^-6 в физиологическом растворе, после посева чашки помещают в анаэростат, создавая разрежение до 1 атм, культивируют в термостате 20-24 ч при 37^оС. Наилучшие результаты получены при использовании питательной среды, содержащей 7,00 г/л хлористого натрия, 8,00 г/л глюкозы, 2,50 г/л борной кислоты и 0,20 г/л натрия лимоннокислого, при этом накопление клостридий составляет 37531 и 25021, а в среде-прототипе соответственно 40037 и 30028, различия не достоверны (Р > 0,05). Результаты исследования представлены в табл. 1. Как видно из данных, приведенных в табл. 1, накопление клостридий на предлагаемой среде не вызывает угнетения накопления данных культур. П р и м е р 2. Для подтверждения селективных свойств предлагаемой питательной среды исследуют влияние селективных агентов на выделение чистых культур клостридий из различных микробных ассоциантов (из расчета, что посевная доза ассоциантов должна превышать дозу клостридий в 10-100 раз). Посевы выращивают в анаэробных условиях. Результаты исследования приведены в табл. 2. Как видно из данных, приведенных в табл. 2, среда предлагаемого состава обеспечивает выделение чистых культур клостридий из микробных ассоциантов, при этом не отмечено угнетающего действия селективных агентов на накопление выделяемых тест-культур.

Формула изобретения

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ КЛОСТРИДИЙ, содержащая гидролизат коллагена, пептон, глюкозу, натрий хлористый, экстракт кормовых дрожжей, цистеин, сульфоксилатформальдегид натрия, агар и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения селективных свойств, она дополнительно содержит метиленовый синий, борную кислоту, натрий лимоннокислый при следующем содержании ингредиентов, г/л: Гидролизат коллагена - 12,00 - 15,00 Пептон - 12,00 - 15,00
Экстракт кормовых дрожжей - 4,00 - 6,00
Цистеин - 0,20 - 0,25
Натрий лимоннокислый - 0,15 - 0,20
Глюкоза - 8,00 - 9,00
Натрий хлористый - 7,00 - 8,00
Сульфоксилатформальдегид натрия - 0,75 - 1,00
Метиленовый синий - 0,002
Борная кислота - 2,00 - 2,50
Агар - 11,00 - 12,00
Вода, л - До 1

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2