Натриевая соль -(3-нитрофенил)- b -аминопропионовой кислоты, обладающая антигеморрагическим действием

Изобретение касается замещенных аминокислот, в частности натриевой соли b (3-нитрофенилы)- b аминопропионовой кислоты, обладающей антигеморрагическим действием, что может быть использовано в медицине. Цель создание новых более активных и малотоксичных веществ указанного класса. Синтез ведут реакцией 3 нитробензальдегида с малоновой кислотой в присутствии уксуснокислого аммония с последующей обработкой полученного продукта 5%-ным раствором бикарбоната натрия. Выход 51,6% т. пл. 240 242°С. БФ C₉H₁₀N (кислота). Ее натриевая соль получают обработкой бикарбонатом натрия до рН 8 8,5 с последующим кипячением, горячим фильтрованием и упариванием. Выход 91,1% т. пл. 208 210°С. БФ C₉H₉N₂O₄Na оптимальная доза 50 мг/кг за время свертывания 80 мин, 2 ч и 6 ч степень свертываемости повышается на 69 62% против 37% через 2 ч протамина сульфата. Новое соединение, как и протамин сульфат, оказывает одинаковое действие на тромбиновое время на фоне гепарина, толерантность плазмы повышается одинаково (на 40 44%), но время рекальсификации укорачивается на 57% против 51% 3 табл.

Предлагается новое биологически активное химическое соединение, а именно натриевая соль -(3-нитрофенил)- -аминопропионовой кислоты формулы CH₂COONa обладающеe антигеморрагическим действием: оно может быть использовано в медицине. В литературе известны производные -аминопропионовой кислоты, которые в основном обладают антигипертензивным действием. Известны также N-n-толуолсульфонил- -(n-амилоксифенил)--аминопропионат -аминокапроновой кислоты, гидрохлорид -(4-фторфенил)- -аминопропионовой кислоты, обладающей антигеморрагическим действием. Аналогом по биологическому действию выбран протамина сульфат, широко применяющийся в качестве антигеморрагического средства (антагонист гепарина) при кровоточивости, вызываемой гепарином, после операции с экстракорпоральным кровообращением и применением гепарина, после окончания гемодиализа, при повышении содержания в крови эндогенного гепарина. Целью изобретения является изыскание нового производного аминокислот, более малотоксичного и эффективного по антигеморрагическому действию. Поставленная цель достигается натриевой солью -(3-нитрофенил)- -аминопропионовой кислоты, которую получают путем взаимодействия 3-нитробензальдегида с малоновой кислотой в присутствии уксуснокислого аммония с последующей обработкой полученной -(3-нитрофенил)- -аминопропионовой кислоты 5% -ным раствором бикарбоната натрия по схеме HCH₂-C Натриевая соль -(3-нитрофенил)--аминопропионовой кислоты (соединение 1) представляет собой белое порошкообразное вещество без запаха, растворимое в воде, водном этаноле (1:1), диметилсульфоксиде, труднорастворимое в диметилформамиде. П р и м е р 1. -(3-Нитрофенил)- -аминопропионовая кислота (II). К 15,1 г (0,1 моль) свежеперегнанного 3-нитробензальдегида прибавляют 15,41 г (0,2 моль) уксуснокислого аммония и 11,96 г (0,115 моль) малоновой кислоты в 250 мл н-бутилового спирта. Смесь кипятят 17-18 ч, в горячем состоянии отфильтровывают образовавшиеся белые кристаллы и промывают 200 мл горячего н-бутанола, затем 100 мл горячего этанола. Полученный осадок растворяют в 80 мл 1н. раствора гидроокиси натрия, экстрагируют этилацетатом и водный слой подкисляют 1 н. раствором соляной кислоты до pH 5-6. Выпавший осадок отфильтровывают и высушивают. Выход 10,8 г (51,6%) т.пл. 240-242^оС, R_f 0,68 (пропанол-вода 7:3). Найдено, C 51,72; H 4,79; N 13,33. C₉H₁₀O₄N₂. Вычислено, C 51,43; H 4,87; N 13,21. ИК-спектр, см^-1: 1650 (СO карб), 1610 (аромат.), 3100-3300 (NH₂ ассоциир.). Спектр ПМР гидрохлорида, Д₂О, м.д. 8,42-7,47 (4Н, м, Аг), 5,0 (1Н, с, СН), 3,57-1,74 (2Н, м, СН₂). П р и м е р 2. Натриевая соль -(3-нитрофенил)--аминопропионовой кислоты (I). К 4,2 г (0,02 моль) -(3-нитрофенил)--аминопропионовой кислоты (II), суспензированной в 20 мл дистиллированной воды, добавляют 5%-ный водный раствор бикарбоната натрия до pH 8-8,5. Реакционную смесь кипятят 10 мин, фильтруют в горячем состоянии и упаривают воду на роторном испарителе. Выход 4,21 г (91,1%), т.пл. 208-210^оС, R_f 0,74 (пропанол вода 7:3). Найдено, C 46,88; H 4,16; N 12,36. C₉H₉N₂O₄Na. Вычислено, C 46,76; H 3,92; N 12,11. ИК-спектр, см^-1: 1700 (СO карб.), 1600 (аромат.), 3100-3200 (NH₂). Спектр ПМР, Д₂O, м.д. 8,21-7,30 (4Н, м, Аг), 4,27 (1Н, т, СН), 2,47 (2Н, д, СН₂). Действие соединения I изучают для определения времени свертывания цельной крови. Метод основан на определении времени образования сгустка венозной крови. В качестве показателей свертываемости крови также определяют: толерантность плазмы к гепарину, тромбиновое время, время рекальцификации плазмы. При определении толерантности плазмы к гепарину исследуют влияние определенных количеств гепарина на время рекальцификации цитратной плазмы. Определение тромбинового времени основано на выявлении времени образования сгустка плазмы при добавлении к ней избытка тромбина. Принцип метода pекальцификации плазмы основан на определении времени свертывания плазмы при добавлении к ней оптимального количества CaCl₂. Изучено также влияние соединения I на показатели реологии кpови и проницаемость капилляров: на кроликах измеряют агрегацию эpитроцитов и тpомбоцитов спектрофотометрическим методом на аппарате "Спекол-10", коллоидно-осмотическое давление с помощью рефрактометра, проницаемость капилляров для жидкости и для белка. Животных наблюдают в исходном состоянии и после внутривенного введения соединения I и протамина сульфата, исследуют также их действие на фоне гепарина. Опыты проводят на 150-крысах массой 120-130 г по 8-10 животных в каждой серии опытов. В опытах по определению времени свертывания цельной крови пробы крови в количестве 1 мл берут из яремной вены крыс, находящихся под легким эфирным наркозом. При определении остальных изучаемых показателей свертываемости крови получают кровь, смешивают с 3,8-ным раствором цитрата натрия в соотношении 9: 1, центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин и далее работают с плазмой. Действие соединения I изучают в дозах 50-100 мг/кг. Оптимальная доза исследуемых соединений 50 мг/кг. Соединение I в дозе 50 мг/кг, вводят внутрибрюшинно как отдельно, так и на фоне введения гепарина (через 30 мин после его введения). Соединение I вводят в виде 5-ного водного раствора. Контрольной группе животных вводят физиологический раствор в том же объеме, что и препарат. Гепарин вводят внутрибрюшинно в дозе 10 мг/кг. Время свертывания крови определяют через 40 мин после введения испытуемых соединений. Данные обрабатывают статистически с помощью критерия Стьюдента (Р<0,05).-(4-фторфенил)--аминопропионовой кислоты (соединение III) на 52% На этом же фоне определяют длительность действия соединения I и протамина сульфата. Соединение I повышает время свертываемости крови через 80 мин, 120 мин и 6 ч (69-62% ), в то время как протамина сульфат через 80 мин действует уже гораздо слабее, а через 2 ч повышает время свертывания на 37% Соединение III повышает время свертывания через 80 мин 2 ч на 52-54% через 6 ч на 30% (см. табл.2). Далее изучают влияние соединения I на некоторые показатели свертываемости крови, а именно тромбиновое время, толерантность плазмы к гепарину, время рекальцификации плазмы. Как видно из табл. 3 гепарин в дозе 10 мг/кг удлиняет тромбиновое время, понижает толерантность плазмы к гепарину (время свертываемости удлиняется), увеличивает время рекальцификации плазмы. Как соединение I, так и протамин сульфат на фоне гепарина оказывают одинаковое действие на тромбиновое время. Толерантность плазмы к гепарину как под влиянием соединения I, так и протамина сульфата повышается также одинаково (на 40-44% ). Время рекальцификации под влиянием соединения I укорачивается на 57% под влиянием протамина сульфата на 51% При изучении острой токсичности выявлено, что соединение I малотоксично: LD₅₀, вычисленная по Беренсу, равна 250037 мг/кг, протамина сульфата 756,3 мг/кг, соединения III 110049 мг/кг. При изучении показателей реологии крови и проницаемости капилляров достоверно увеличивалась лишь агрегация тромбоцитов под влиянием соединения I. Таким образом, натриевая соль -(3-нитрофенил)- -аминопропионовой кислоты, будучи растворимым веществом, обладает выраженной длительной антигеморрагической активностью, повышая свертываемость крови как на интактных, так и на гепаринизированных животных и превосходит по активности и длительности действия гидрохлорид -(4-фторфенил)- -аминопропионовой кислоты и протамина сульфат.

Формула изобретения

РИСУНКИ