Способ получения производного пиридо[2,3- @ ]пиримидина, или его ss-, rs-изомеров, или смеси диастереомеров, или фармацевтически приемлемых солей с щелочными металлами

 

СООЭ СОВЕТСКИХ

РЕСПУБЛИК,» с1 » 1нв °. fl.Ã;..È, ;

r в 1.1 5/i!»

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ 1

ОН

N СН2СН2

Н2

„Н

- CONH СНСН2СН2СООН °

COOH

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ПЮТ СССР (21) 4028461/04 (86) РСТ/US 86/00368 (24.02.86) (22) 03.11.86 (31) /09622 (32) 08.03.85 (33) US (46) О /.09,91. Бюл. М 33 (/1) Дзе ТрасTH3 оА Принстон Юниверсити (US) (/2) Эдвард С. Тейлор, Джордж Питер Бедсли, Питер Дж. Харрингтон и Стефен Р. Флетчер {US) (53) 54/.855. /(088.8) (56) Шредер Э., Любке К. Пептиды

М.: Мир, 196/, ч.1, с. 112. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНОГО

ПИРИДО(2,3-<1)ПИРmmgmНА, ИЛИ ЕГО SS-, RS ИЗОМЕРОВр ИЛИ СМЕСИ ДИАСТЕРЕОМЕРОВ, ИЛИ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМПЕИЫХ

СОЛЕЙ С 1111 ;ЛОЧНЬЙИ METAlIJIAHH (5/) Изобретение относится к гетероциклическим соединениям, в частности к получению производного пиридо" (2,3-б)пиримнлина ф-»н»

Изобретение относится к способу получения пронзнолного пиридо 2,3 d7 пиримидина или его SS-, RS-изомеров ° или смеси диастереомеров, или смеси диастереомеров, или их фармацевтически приемлемых солей со щелочными металлами — новых биологически активных соединений, которые могут быть применены в медицине.

Я3, 1676449 A3 (51)5 С 0 / П 4 /1/04//А 61 К 31/505 (С О/ D 4/1/04, 239:/P) » или его SS-, RS-изомеров, или смеси диастереомеров, или фармацевтически приемлемых солей со щелочными металлами — биологически активных соеди- нений, которые могут быть применены в медицине. Цель — разработка способа получения указанных соединений.

Получение ведут гидролизом или гидрогенолизом эфира М-14- 2-(2-пивалоил Б (или ацетил)амино- -окси-5,6,/,8-тетрагилропиридо(2,3-4)пиримидин-б-ил)этил(бензоил -L-глутаминовой кислоты с последующим выделением целевого продукта в виде SS- RS-изомеров, или смеси диастереомеров, или фармацевтически приемлемых солей со щелочны- в .ми металлами. 5 табл. ос

V () с

Цель изобретения — разработка способа получения новых производных пиридо (2, 3-д 7пиримидина малотоксичных и эффективных по отношению к устойчивым к метотрексату клеткам.

Пример 1. N-j4-1 2-(2-амино-4-окси иридо (2,3-4) пиримидин-6-илjэтил7бензонл) -L-глутамянояая кислота.

16/6449 т

Гомогенный раствор 0,1 /5 г диэтилового эфира М-(4- (2-(2- ацетамидо-4-оксипиридр (2, 3-dj пиримидин-6-ил))этил бенэоил -Ь-глутаминовой кислоты

4 5 в 5 мл метанола, содержащего 3 мп

1н. водного раствора гидроокиси натрия, перемешивают при комнатной температуре в течение 12 ч. Добавляя 2 йп уксусной кислоты с последук)щим центрифугированием, можно получить 0,125 r (86 ) предлагаемого соединения, названного 5,10-дидеаэафолиевой кислотой, в виде микрокристаллического бесцветного твердого вещества, т.пл. свыше 200 С.

ЯИР /ТФА-д ) 3 » ppm: 2,3-2, 1 (м, 2H) 2,7-3,0 (м. ° 2Н); 3,25 (со»

5Н) » 4, 9-5, 25 (мс » 1Н); /, 35 (АВ кве »

4H, J = 9 Гц); 8, 50 (сс» 1H); 8,90 ,(со» 1И).

Пример 2. N-(4-(2-(2-амино-4-окси-5,6, 1,8-тетрагидропиридо(2,3-d -пиримидин-б-нл) этил)ненэовл)-L-глутаминовая кислота. 25

Днэтиловмй эбир М- (4-(2-(2-ацетамндо-4-окси-5,6, 1, 8-тетрагидропиридо (2, 3-dJ пиримидин-б-ил) этил) бе напил) -Ь-глутаминовой кислоты гидролизуют по примеру 1во 30

Получают предлагаемое соединение, названное 5,10-дидеаза-5,6, 1,8-тетрагидрофолиевой кислотой. Выход 87Х» т.пл. свыше 250 С, 0

ЯИР (ТФА) (3, рр11: 1,7-3,9 (мо»

1ЗН); 5,0-5,25 (м., 1H); /,45; 7,85 (AB кво» 4Н, Х = 9 Гц).

Пример 3. N-(4- (1-(2-амино-4-окси-5,6, 1,8-тетрагндропиридо)

2 3- () пиримиднн-6-ил) проп-2-mr бен» и у 40 зоил -L-глутаминовая кислота.

Гомогенному раствору 11,5 мг диэтилового эбира N-(4-(1-(2-ацетамидо-4-окси-5,6,7,8-тетрагидропиридо(2, 3- с ) пиримидин-6-и32) проп-2-ил) бен- 45 зоил -L-глутаминовой кислоты в 2 мл метанолового раствора гидроокиси натрия дают отстояться при комнатной температуре 12 ч. Большую часть растворителя затем отгоняют при пониженном давлении. Смесь разбавляют водой и подкисляют уксусной кислотой. Осадок собирают фильтрацией, промывают водой и сушат при пониженном давлении (0,1 мм) в течение 48 ч с получением

9,7 мг (67 ) предлагаемого соединения, 55 названного 5, 10-дипеада-10-метил-5,6, /,8-тетрагидрофолиевой кислотой, т.пл. свыше 250 С.

ЯИР б, рр(п: 0,8/-0,88 (m.со» 1Н каждый) е 1-2,8 (мо» 11Н); 3,13 (м., 1H);э 4,59 (м. » 1H); 6» 96 (д., 2Н» .1 = 9 Гц); 1,34 (до, 2Н, Л = 9 Гц)о

Пример 4. Диэтиловый эфир

N-(4-(2-(2-пивалоиламино-4-гидрокси

-5, 6, /, 8-тетрагидропиридо 2» 3- d) пиримидин-б-ил этно) Еенэоил) -L-глутаМИНОВОй КИСЛОТЫ.

Смесь 0,59 г диэтилового эфира

И-(4-(2-пивалоиламино-4-гндроксипиридо 2, 3-d) пиримидин-6-илэтинил)бензоил -L-глутаминовой кислоты и

1,5 r 5 . палладия на угле в 30 мл трифторуксусной кислоты гидрируют при 3,1 ат и комнатной температуре в течение 24 ч. Реакционную смесь разбавляют хлористым метиленом и фильтруют через целит. Растворитель удаляют при пониженном давлении.

Остаток вновь растворяют в хлористом метилене, экстрагируют насыщенным раствором бикарбоната натрия и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток хроматографируют на силикагеле использованием в качестве элюента смеси 4% метанола в хлористом метилене.

После испарения элюата получают

0,6 r (100 ) диэтилового эфира

N-(4-(2-(пивалоиламино-4-гидрокси-3,6,/,8-тетрагидропир о(2,3-6)пиримидин-6-RII)этно) бенэоил -L-глутаминовой кислоты в виде бе ого вещества, т.пл. .) 250 С.

ЯИР (CDC13, 300 ИГц) б, ppm: 1,22 (те» ЗН, J = /,2 Гц); 1,29 (се» 9Н);

1,3 (те» ЗН, J = 7,2 Гц); 1,61-3,35 (ме» 13H) - 4, 11 (ко» 2Н, J = 7,2 Гц);

4,23 (ко» 2Н, J = 7,2 Гц); 4,17-4 ° 84 (мо» 1Н); 5, 15 (уш. с, 1Н); 1, 17 (д., 1Н» Т = 7»5 Гц)» 1»23 (д.» 2Н»

J = 8, 1 Гц); 8,56 (уш.с, 1Н).

ИК (KBr), см : 3400; 3280; 2980;

1 135; 1630; 1570; 1460; 1390; 1350;

1310; 1200; 1155; 1025; 930; 800.

Вычислено, : С 61, /3; Н /,07;

N 12.

С 343 Н е» 7 Х О 7

Найдено, : С 44,56; Н 3,85;

N 11,3; Br 24,38.

Пример 3. N-(4-(2-(2-амино-4-гидрокси-5,6, 1,8-тетрагидропир о

2, З-d) пир имидин-6-ил) э тилло ел э ею )-L-глутаминовая кислота.

Раствор, содержащий 0,53 r диэтилового эфира N-f4-(2-(2-пивалоиламино-4-гилрокси-5 6,1,8-тетрагидропионло (2,)-d)fllfpeteläíe-б-нл) этнл)бензоил -1-глутаминовой кислоты и 3 мл

1 н. раствора гилроксида натрия в

50 мл метанола, перемешивают /О ч при комнатной температуре. Смесь подкисляют уксусной кислотой. Образовавшийся осадок отфильтровывают и промывают метанолом, После высушинания при пониженном давлении получают 0,2 г (507)

N- (4- (2- (2-амнно-4-гндрокон-б, 6, 7, 8-тетрагидропиридо(2,3-с«)пиримидин-6-ил) -этил) f å Hçîèë -L-глутаминовой кислоты с указанными свойствами.

Пример 6о Смесь 1 r диэтилозого эфира N-(4-(2-(2-ацетамндо-4-r po$ си-5, 6, 1, 8-тетрагидропиридо (-

2,3-4)лмрнмнднн-б-нл)этил)-бензонл)—

-L-глутаминовой кислоты и 880 мг (4-) — 10-камфорсульфоновой кислоты в 50 мл безводного этанола кипятят

4 чо Реакционяую смесь охлаждают до комнатной температуры и оставляют «а ночь. Образовавшееся белое вещество отделяют фильтрованием, Шестикратной дробной кристаллизацией из этанола получают 31 мг диастереомера В d (+)-10-камфорсульфоната диэтилового эфира N- 4-f2-(2-ацетамидо-4-гидрокси-5,6, 1,8-тетрагидропиридо 2,3-dfлиримидин-б-ил) -этил)бензоил -L-глутаминовой кислоты, т.пл.

223- 5 С, Ыд«,м -20,02

Нз маточного раствора испарением удаляют растворительз Полученное твердое вещество дважды перекристаллизовывают из этанола.

Получают диастереомер В d (+)-10камфорсульфоната диэтилового эфира

N-(4-(2-(2-ацетамндо-4-гндроксн-5, 6, /, 8-те тра гидропиридо 2, 3-с1 ) пиримнднн-6-нл) этна)бензонл)-t,-глутамнновой кислоты.

®ь8 )нм +29,35

Пример /. Диастереомер В

N-(4-(2-(2-амнно-4-гндроксн-6,6, 7,8-тетра гидропиридо ) 2, 3-(11пиоимидин-6-нл) этна)бензонл7- ц-блутамнноной кнслоты.

Раствор диастереомера В d (+)-10камфорсульфоната диэтилового эфира

N-14-(.— (2-аце тамндо-4-гндроксн-5,6, /,8-тетрагидропиридо 2,3-с1)пиримидин-6-ил) э тил) бе из оил -L" ãëóòàìèíîвой кислоты в 50 мл метанола, содержащего 3 мл 1 н. раствора гидроксида, г

55 перемсшинают /2 ч при ксмнатной температуре с образованием ««(«тр««6 «)с и соли днлстереомера Л Н-(4 — (2-(2-амнно-4-гилля к си-5, 6, /, 8-те тра гидропиридо (2 3-4)) п««римидин-6-ил) т)«л)бензоил -L ãëóòàìèíî««îé кислоты, Добавляя 2 мл уксуснсй кислоты с последующим центрифугированием, получают свободную кислоту, т, пл.

224-221 С (разло) . о () spy)«v -21,0581 ((- 0,636, 0 1 н. МОН)„ макс = 21" йИР (CDClg) g, рртп; 1,85 (м., 2Н);

1,98 (м., 1Н); 2,25 (м,, 1Н); 2,45 (и., 1Н); 2,68 (м., 1Н); 2,92 (м., 5H); 3825 (т., 1H, J = 1О Гц);

3,82 (д., Н, J = 10 Гц);5,13 (м., 1Н); /,43 (д., 2H, J = 9 Гц); /,84 (д., 2H, J = 9 Гц).

Оптическая чистота > 9/Z.

II р и м е р 8, Диастереомер А

N-14-(2-(2-амино-4-гидрокси-5,6, 7,8-тетрагидропиридо)2р3-«1)пиримидин-6-нл) этнл) бензонл)-L-глутдмнноной кислоты.

По методике примера /, но с использованием диастереомера А d (+)-10камфорсульфоната диэтилового эфира

N-(4-)2-(2-ацетамидо-4-гидрокси-5,6, /,8-тетрагидропиридо 2,3-«1)пирнмнднн-6-нл)этнл)бензонл)-Ь-глутамнновой кислоты, вместо диастереомера

В получают диастереомер А N- 4-1 2"(2-амино-4-гидрокси-5,6,/,8-тетрагидропиридо 2,3-d)пиримидин-б-ил)этил) бензоил)-L-глутаминовой кислоты, т.пл, 253-255 С (разл.).

bCl589 = +31,0915 (с = 3,605, О, 1 н.

Na0H).1 мокс = 2/8; 222 нм.

ЯМР (CDCl 1) о, ppm. 1,85 (м.,2Н);

1,98 (м., 1Н); 2,25 (м., 1Н); 2,45 (м., 1Н); 2,68 (м., 1Н); 2,92 (и., 5H); 3,25 (т., 1Н, J = 10 Гц); 3,82 (д., 1Н, .1 = 1О Гц); 5, 13 (м., 1H)

7,43 (д., 2Н, J = 9 Гц); /,84 (д., 2Н, J = 9 Гц).

Оптическая чистота ) 9/Е.

Пример 9. В 40 мл воды (рН примерно 5) суспепдируют 10 г

N-(4- 2-(2-амино-4-гидрс)кси-5,6,7,8-тетрагидропиридо)2,3-д пиримидин-б-ил)этил)бенэоил -1.-глутаминовой кислоты (диастереомер И). К получен ной суспензии по каплям при перемешивании прибавляют 8 мп 5 н. водно раствора гидроксида натрия и затем

l4 0<449

1 н. раствор гидроксида натрия в воде до момента перехода твердого вещества в раствор (примерно 3,5 мл), рН полученного раствора около 8. Затем добавляют 50 мл метанола. Раствор оставляют на ночь в холодильнике.

Образовавшийся осадок отделяют фильтрованием, промывают небольшим количеством холодного металла. После вы- 10 сушивания при комнатной температуре в вакууме получают динатриевую соль диастереомера В N-14-(2-(2-амино-4-гидрокси-5,6,7,8-тетрагидоопиридо 2,3-й)пиримидин-б-ил)этил бензоил -L-глутаминовой кислоты (8, 1 г).

ИК (KBr), см : 3440-3120; 1640;

1620; 1600; 1548; 1504; 1402; 1368;

1310 см

ЯМР (Dg0, 300 ИГц) 0, ррах: 7. 76 20 (д., 2Н, .1 = 6 Гц); 4,32 (к., 1Н, J = 9 Гц); 3,33 (к,, 1Н, J =11 Гц,2 Гц);

2,95 (к., 1Н, J = 11,9 Гц); 2,75 (м., 2H); 2,55 (к,, 1Н, J = 11 Гц, 3 Гц); 1,2 (т,, 2Н, 3 = 7 Гц);

2, 17 (м,, 1H); 2, 14 (м,, 2Н); 1, 76 (м., 1H); 1,68 (мо, ЗН), Вычислено, 7: С 46,58; Н 5,4;

N 12,93.

С21 Н2 И О Иа

Найдено, /: С 45,98; Н 5,2;

N 12,4.

Проведены биологические испытания полученных соединений.

Значения ИК О, определенные на полноклеточных линиях клеток лейкемии человека (ССКГ-CEN), для диастереомера Л S S-конфигурации и диастереомера В R,S-конфигурации равны 40

2,6 ° 10 и 3,4 ° 10 мкг/мл соответственно.

В подмьппечную область мьппей линии

C57BL/G подкожно имплантируют клетки мелономы В-16. Для испытания каждой 45 дозировки используют по десять мьппей.

Ежедневно мышам внутрибрюшинно вводят

N-(4-(2-(2-амино-4-гидрокси-5,6,7,8-тетрагидропиридо (2,3-d)пиримидин-б-ил) атил) б еле онл) -L-глутаиинонуи

50 кислоту, диастереомер А и диастереомер В. Через десять дней определяют массу опухоли контрольных зверьков, получивших только раэбавителЬ, и для подсчета процента ингибирования сравнивают ее с массой опухоли зверьков, получивших испытуемое соединение.

Полученные результаты приведены в табл. 1.

10 женских особей мышей линии С3Н заражают внутрнбрюшинно в подмьппечную область клетками лимфосаркомы 6СЗНЕЭ.

Затем в течение 8 дней им вводят испытуемое соединение в эмульфоре 1Р (0,5 мл). Контрольные зверьки подвергаются аналогичной обработке, но не получают испытуемого соединения (см. табл. 2).

Мьппам линии СЗН имплантируют клетки аденокарциномы СЭН молочной железы, после чего им вводят испытуемое соединение, контрольные зверьки получают только раэбавитель (см. табл. 3)

Мьппам линии СЗН имплантируют клетки миэломы Х5563 клеток плазмы, после чего внутрибрюшинно (0,6 мл/день) в эмульгаторе ежедневно в течение

10 дней им вводят испытуемое соединение, контрольные зверьки получают только раэбавитель (см. табл. 4), B обычных моделях указанные опухолевые клетки имплантируют подкожно в подмышечную область мышей. После внутрибрюшинного ведения измеряют длину и ширину опухоли у животных, получающих испытуемое соединение, и контрольной опухоли (только физиологический раствор), чтобы вывести процент ингибирования (табл. 5).

Проведенные испытания показали, что производные пиридо(2,3-й пирими- дина, полученные по предлагаемому способу, эффективны против различных опухолей и ингибируют в отличие от метотрексата действия трансформилаэы глицинамидного рибонуклеотида (CAPтрансформиланд) в ходе б1е почо биосинтеза пурина. Такими же свойствами обладает Na-соль этого соединения.

Кроме того, производные пиридо(2,3-d)пиримидина, полученные соглас" но предлагаемому способу, относятся к категории малотоксичных соединений.

Формула изобретения

Способ получения производного пиридо 2, 3-dg пиримидина формулы

Н2МNN

Н

СОХН СНСН2CH2COOH

С00Н

16/6449 лами, отличающийся т и, что соединение общей формулы или его SS-, RS-изомеров, или смеси диастереомеров, или фармацевтически приемлемых солей со щелочными металО Н

ÑÍ2ÑÍ2 СОЖН СНСН2СН2COOR 3

R.

Р НМ-М Х СООР2

1 где Rl — низший алканоил; вого продукта в виде SS- RS-иэомеВ и Rg- С,-С -алкил, подвергают гидролиэу или гидрогенолиэу с последующим выделением целеров или смеси диастереомеров, илн фармацевтически приемлемьи солей со щелочными металлами.

Таблица 1

Соединение

Доза, Ингибиро- Вьиивание, мг/кг ванне, Ж дни

Смесь диастереомеров

Иэомер А

Изомер В

Таблица 2

Соединение Доза, мг/кг

Выживание, дни нгибироание, Ж

/4

89

100

Изомер А

/1

84

89

99

100

Изомер В

1,60 5

3, 12 12

6,25 13

12,50 50

1,60 47

3,12 24

6,25 0

12,50 О

1,60 71

3,12 91

6,25 98

12,50 100

25,00 100

50 00 100

100,00 100

200,00 100

6,00

12,50

25,00

50,00

100,00

3,60

6,25

12,50

25 ° 00

50,00

100,00

9/9

9/9

9/9

9/9

9/9

9/9

9/9

9/9

1О/10

10/!О

10/10

10/10

10/10

9/10

8/10

6/10

10/10

10/10

10/10

10/10

10/10

10/10

10/10

10/10

10/10

10/10

8/10

iб i6449

Таблица 3

Ингибиро- Выживание, ванне, % дни

Доза, мг/кг

Непрерывно вливают

1% NaHCO ежедневно в

59

Токсична (2 мл/день) течение 5 дней„

5/5

6/6

6/6

О/6

0,62

1,25

2,50

5,00

Внутрибрюшинно (О, 5 мл/день) в эмульфоре ежедневно в течение 10 дней

3,60 76 10/10

6,25 93 10/10

12,50 99 8/10

25,00 100 7/10

50,00 100 8/10

100,0 Токсична О/10

Внутрибрюшинно (О, 5 мл/день) в эмульфоре, дни 1, 3, 5, 7 и 9

50 91 10/10

100 96 10/10

200 100 10/10

400 100 8/10

Внутрибрюшинно (0,6 мл/день) в эмульфоре, только в 1,3,5, 7 и 9 день

6,25 39 10/10

12,50 21 10/10

25,00 59 10/10

50,00 60 10/10

100i 0 94 10/10

Т а б л и ц а 4

Ингибирование, %

Выжив ание, дни

Доза, мг/кг

10/10

7/10

10/10

8/10

7/9

О/10

62

76

99

99

Токсична

3,6

6,25

12,5

100

Таблица 5

Доза, мг/кг

Дни лечеОпухолевая система — ния

25 50 100 200

100

91 100 100

Лимфосаркома 6ГЗНГЛ

100

100

98 99

В-16

1676449

Продолжение табл. 5

Опухолевая система

Дни лечення

5 0 200

Аденокарцинома молочной железы С3Н

100

86

100

100

Легочная карцинома льюиса

100

94

10

Яичниковая карцинома

М-5

12

90

Madison легкое

Плазмацитоклеточная миелома Х5563

100*

100

100

100

Составитель В.Волкова

Техред М.Дидык Корректор Э.Лончкова

Редактор М.Янкович

Заказ 3016 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.ужгород, ул. Гагарина, 101

Ф

5-дневная задержка.

Токсичная доза.

Доза, мг/кг

Т °

31 " 54

72 87