Способ определения токсичности водорастворимых веществ

 

Изобретение относится к микробиологическим исследованиям и может быть использовано для экспрессной сравнительной токсикологической характеристики водорастворимых веществ и препаратов, а также на промышленных предприятиях для биологического контроля за токсичными водорастворимыми веществами Цель изобретения - повышение чувствительности способа и сокращение времени определения Для этого культуру инфузории Tetrahymena pynformis выдерживают с добавленным исследуемым веществом при температуре культивирования , воздействуют из нее сублетальной температурой и подсчитывают количестоо погибших клеток. Строят график зависимости процента погибших клеток от концентрации исследуемого вещества 2 табл. Ё

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s G 01 N 33/48

Ж (О фь. (Л фь

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4682495/13 (22) 23.03,89 (46) 15.06.91. Бюл, N 22 (71) Научно-исследовательский институт профилактической медицины М3 ЭССР и

Научно-исследовательский институт цитологии АН СССР (72) И.С. Ирлина, Г.М. Лахонина, А.Г. Мадоян, А.IO, Месропян и С,Н, Этлин (53) 615.9(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

N 1257518, кл. 6 01 N 33/48, 1986.

Игнатьева А.Д., Шаблий В.Я. Использование инфузорий тетрахимена пириформис как тест-объекта при биологических исследованиях в с/х, M., 1978, с. 42, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ ВОДОРАСТВОРИМЫХ ВЕЩЕСТВ

Изобретение относится к микробиологическим исследованиям и токсикологии и может быть использовано при сравнительной токсикологической характеристике водорастворимых веществ и препаратов, а также на промышленных предприятиях для биологического контроля за токсичными,водорастворимыми веществами.

Цель изобретения — повышение чувствительности способа и сокращение времени определения.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения токсичности водорастворимых веществ путем экспозиции исследуемого вещества с инфузориями Tetrahymena pyriformis подсчет количества погибших клеток осуществ Ы; 1656454 A l (57) Изобретение относится к микробиологическим исследованиям и может быть использовано для зкспрессной сравнительной токсикологической характеристики водорастворимых веществ и препаратов, а также на промышленных предприятиях для биологического контроля за токсичными водорастворимыми веществами. Цель изоб ретения— повышение чувствительности способа и сокращение времени определения. Для этого культуру инфузории Tetrahymena pyriformis выдерживают с добавленным исследуемым веществом при температуре культивирования, воздействуют на нее сублетальной температурой и подсчитывают количество погибших клеток. Строят график зависимости процента погибших клеток от концентрации исследуемого вещества. 2 табл. ляют после воздействия на культуру сублетальной температуры.

Способ осуществляют следующим образом.

Суточную культуру инфузорий

Tetrahymena pyriformis культивированную в глюкозно-дрожжевой среде (рН = ?,1) и содержащую определенное количество, особей в 1 мл, разливают в пробирки. В зти же пробирки добавляют исследуемое вещество в нескольких концентрациях (максимальная из концентраций, вносимых в культуру, должна не вызывать гибели инфузорий после тридцатиминутного контакта с веществом при температуре культивирования, но вызывать их гибель, близкую к

100, после пятиминутного воздействия при сублетальной температуре). Культуру с

1656454

Таблица 1

Таблица 2 добавленным исследуемым веществом выдерживают 30 мин в термостате при температуре культивирования, после этого пробирки помещают на 5 мин в термостат с сублетальной температурой и проводят 5, подсчет количества погибших клеток, Далее высчитывают процент погибших клеток от начальной плотности культуры. Исследовав таким образом ряд концентраций веществ, строят график зависимости процента погиб- 10 ших клеток от концентрации на пробит-логарифмической сетке и графически находят концентрацию вещества, вызывающую

50%-ную гибель инфузорий. Данные заносят в таблицу для сравнения степени токсич- 15 ности различных веществ путем сравнения концентраций, вызывающих 50%-ную гибель клеток.

Пример 1, Суточную культуру инфузорий Tetrahymena pyriformis, культивиро- 20 ванную в глюкозно-дрожжевой среде (0,1 r дрожжевого экстракта, 1,5 rглюкозы,,0,1 г

NaCI, 100 мл дистиллированной воды, рН=

= 7, )) при 27 С и содержащую 69 тыс. особей в 1 мл, в количестве 1 мл помещают в 25

5 пробирок и добавляют исследуемое вещество —. 1,2-дихлорэтан в пяти концентрациях: 0,6 мг/мл, 0,65 мг/мл, 0,7 мг/мл, 0,91 мг/мл и 1;3 мг/мл (по предварительным опытам концентрация 1,2-дихлорэта- 30 на 1,3 мг/мл не вызывает гибели инфузорий после 30-ти минутного контакта при 27 С, а при 38 C в течение 5 мин наблюдается почти 100 -ная гибель инфузорий). Пробирки помещают в термостат и 35 инкубируют в течение 30 мин при 27 С, После этого пробирки помещают в термастат при 38 С на 5 мин. Затем проводят подсчет количества погибших клеток в камере Горяева и высчитывают процент погибших клеток от начальной плотности культуры. Так, после воздействия сублетальной температуры в пробирке с концентрацией 1,2-дихлорэтана 0,60 мг/мл погибло 15594 особей, что соответственно от первоначальной плотности составляет 22,6%. Аналогично определяют процент погибших инфузорий при других концентрациях, Данные по проведенным экспериментам приведены в табл. 1.

Получают пять точек, по которым методом пробит-анализа графическим путем находят концентрацию 1,2-дихлорэтана, вызывающую 50%-ную гибель инфузорий —.

0,62 мг/мл.

Пример 2, Постановку опыта и подсчеты проводят также, как в примере 1, но исследуют другие вещества — диметилформамид и ацетонитрил.

Результаты проведенных экспериментов представлены в табл. 2.

Формула изобретения

Способ определения токсичности водорастворимых веществ путем инкубации исследуемого вещества с инфузорией и подсчета количества погибших клеток, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности и сокращения времени определения, перед подсчетом на инфузорию воздействуютсублетальной температурой.

Продолжение табл. 2.. ическимпутем мат.црм пробит-анализа.

Составитель И. Агафонова

Техред М. Моргентал Корректор С, Шевкун

Редактор А. Ревин

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101

Заказ 2049 Тираж 420 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5