Способ определения этаноламина в биологическом материале
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в экспериментальной и клинической биохимии. Цель изобретения - ускорение и повышение точности способа. Способ заключается в получении безбелкового экстракта гомогенатов ткани. Электрофорез проводят в пиридинацетатным буфере с рН 3.9-4,0, окраску - нингидрином, элюирование - спиртовым раствором СиЗОз и фотометрировэние при А 540 нм. 2 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (я)з 6 01 N 33/48
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4499498/14 (22) 28.10,88 (46) 30.05.91. Бюл. N 20 (71) Ереванский зоотехническо-ветеринарный институт (72) P.Ã. Камалян и Э.A. Авагимян (53) 612,777.7(088.8) (56) Вг!пег G, P. eta!. Nature, 1964, v. 202, Н.
4930, р. 359-360, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭТАНОЛАМИНА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в экспериментальной и клинической биохимии.
Цель изобретения — ускорение и повышение точности способа определения эта, ноламина в биологическом материале.
Способ осуществляют следующим образом.
Берут навеску исследуемого органа в
0,5-1,0 г (в зависимости от органа), добавляют 10 мл 6 -ного НС!04, гомогенизируют в гомогенизаторе Поттера, центрифугируют гомогенат при 3000 об. в течение 15 мин, надосадочную жидкость переносят в другую пробирку. рН доводят до 4,0 2 NKOH и помещают в холодную баню (О С в течение 30 мин) или в морозилку при -10 С на ночь.
КС!04, который осаждают на холоде. удаляют центрифугированием (3000 об. B течение
15 мин при 0 С). Надосадочную жидкость переливают в чашечки для выпаривания (или тигли) и выпаривают на водяной бане.
Сухой остаток растворяют в 0,5 — 1,0 мл Н20 и наносят 0,05 мл на электрофоретическую ленту (хроматографическая бумага любого сорта), Электрофорез проводят в камере ОЕ (Венгрия) при напряжении 1000 В и силе
„„ Ы„„1652914 А1 (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано, в экспериментальной и клинической биохимии. Цель изобретения — ускорение и повышение точности способа, Способ заключается в получении безбелкового экстракта гомогенатов ткани, Электрофорез проводят в пиридинацетатным буфере с рН 3.9-4,0, окраску — нингидрином, элюирование— спиртовым раствором CuSOq и фотометрирование при il 540 нм. 2 табл. тока 20 А. В камере помещаются 10 лент в 4 см при длине 44 сМ (на каждый см Н = 25 В, ! = 0,5A). Ленты смачивают используемым для разделения пиридинацетатным буфером с помощью пульверизатора (или пипеткой). Электрофорез длится час. В данном буферном растворителе этаноламин обладает максимальным Rf (0,64) среди нитгидрин положительных соединений безбелкового экстракта. Основные аминокислоты — аргинин (Rf =- 0,48) и лизин (Rf = 0.5) — четко отделяются от этаноламина, практически не разделяясь одна от другой.
Результаты количественного определения свободного этаноламина в органах и крови лабораторных животных используемыми в литературе и предлагаемыми методами приведены в табл. 1.
Процедуры окрашивания нингидрином, элюции спиртом и фотометрирования окрашенного раствора при 540 нм стандартны.
При каждом определении вместе с опытными пробами аналогичным процедурам подвергается стандартный раствор этаноламина, три концентрации которого используются для построения калибровочной кривой, по которой вычисляется количе1652914
Таблица 1
Таблица 2
19.2+ 0,7
12 6й1 4
Составитель В. Митюшин
Редактор А. Маковская Техред М.Моргентал Корректор В. Гирняк
Заказ 1770 Тираж 417 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101 ство этаноламиня в опытных образцах, Экс«инкция линейна при концентрации этаноламина 0.5-6,0 мкг в 1 мл фатаметрируемого
Раствора.
При данном способе определения используемые концентрации пиридина и ацетата резко уменьшены (в 5-10 раз) по сравнению с используемыми в хроматографии и электрофореэе концентрациями буферных растворителей для разделения аминокислот и аминов в билогическом материале, что весьма существенно, учитывая
«оксичность указанных веществ.
Время осуществления способа 50-60
1чин при 200-210 мин по способу-прототипу, Результаты определения этаноламина в мозге крыс двумя способами (мкМ/г ткани) приведены в табл. 2.
Формула изобретения
Способ определения этаноламина в биологическом материале путем получения безбелкового экстракта, электрофоретического разделения, окраски раствором ни10 нгидрином, элюирования спиртовым раствором CuS04 и фотометрирования при
А=540нм, отличающийся тем,что, с целью ускорения и повышения точности. электрофоретическое разделение проводят
15 в пиридинацетатном буфере с рН 3,9-4.0.
