Штамм вируса ядерного полиэдроза для производства инсектицидного препарата
Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к производству биологических инсектицидов для лесного и сельского хозяйства. Целью изобретения является получение нового штамма вируса ядерного полиэдроза, обладающего большей вирулентностью по отношению к непарному шелкопряду. Штамм вируса ядерного полиэдроза Pd -1-5 получен путем отбора из природного изолятора вируса , выделенного обычными методами из больной гусеницы непарного шелкопряда и депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов Института ВНИИгенетика, где ему был присвоен коллекционный номер ВКПМ virus-1. Суспензия вируса штамма Pd-1-5 в воде имеет ЛКводля гусеницы Porthetria dispar, равную 3 х 104 полиэдров на 1 мл или 0,2 х 105 полиэдров на гусеницу, в то время как штамм-прототип имеет ЛКво 4x10 и 4 х 10 соответственно. Биологическая активность препарата, основанного на штамме Pd -1-5, для гусениц Porthetria dispar второго возраста составила 0,004 мг/г корма, а у аналогичного препарата , полученного на основе штамма-прототипа , 0,02 мг/г корма. 1 табл. сл с
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (Я)5 С 12 N 7/00
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР, /
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4618465/13 (22) 08.12.88 (46) 30,03.91. Бюл. ¹ 12 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт биотехнологии (72) Э.Ж.Симонова и Н.И.Никитина (53) 632.937,16 (088.8) (56) Итоги и перспективы производства и применения вирусных препаратов в сельском и лесном хозяйстве. Сб., М., 1984, с. 3 — 14, (54) ШТАММ ВИРУСА ЯДЕРНОГО ПОЛИЭДРОЗА ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ИНСЕКТИЦИДНОГО ПРЕПАРАТА (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к производству биологических инсектицидов для лесного и сельского хозяйства. Целью изобретения является получение нового штамма вируса ядерного полиэдроза, обладающего большей вирулентностью по отноИзобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к производству биологических инсектицидов для лесного и сельского хозяйства.
Целью изобретения является получение нового штамма вируса ядерного полиэдроза, обладающего большой вирулентностью по отношению к непарному шелкопряду.
Штамм Рб-1 — 5 получен путем отбора из природного изолята вируса, выделенного обычными методами иэ больной гусеницы непарного шелкопряда. Депонирован во
Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов института В Н ИИгенети„„Я2„„1638161 А1 шению к непарному шелкопряду. Штамм вируса ядерного полиэдроза Pd -1-5 получен путем отбора из природного изолятора вируса, выделенного обычными методами из больной гусеницы непарного шелкопряда и депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов Института ВНИИгенетика, где ему был.присвоен коллекционный номер ВКПМ virus-1, Суспензия вируса штамма Pd-1 — 5 в воде имеет
ЛК5о для гусеницы Porthetria dispar, равную
3 х 10 полиэдров на 1 мл или 0,2 х 10
4 полиэдров на гусеницу, в то время как штамм-прототип имеет RK5o 4 х 10
5 и 4 х 10 соответственно. Биологическая активность препарата, основанного на штамме Pd -1 — 5, для гусениц Porthetria
dispar второго возраста составила
0,004 мг/г корма, а у аналогичного препарата, полученного на основе штамма-прототипа, 0,02 мг/г корма. 1 табл. ка. где получен коллекционный номер
ВКМП virus-1.
Штамм имеет следующие морфологические и физиологические характеристики.
Морфологические признаки. Относится к группе бакуловирусов, в частности к вирусам ядерного полиэдроза, к виду Porthetria
dispar.
Палочковидные вирусные частицы — бакуловирусы включены в полиморфные белковые тела — полиэдры. B среднем в каждом полиэдре включено по 1215 15 вирусных частиц, размерами 40 — 70 нм х 250-350 нм, Вирусные частицы имеют оболочку развития, в которой могут содержаться как оди1638161
Формула изобретения
Штамм вируса ядерного полиэдроэа
Porthetria dispar ВКПМ virus-1 для производства инсектицидного препарата, * Процент разведения стандарта штамма (1x 10 полиэдров в 1 мл);.количество полиэдров
9 для одной гусеницы. ночные нуклеокапсиды, так и пучки, состоящие иэ 3-5 и более нуклеокапсидов. Классы вирусных частиц характеризуются следующими отношениями нуклеокапсидов:
q1 - 69 + 0,9; щ = 18 + 1 1 ср = 64 + 1,8; 5
q< = 31 0,8; qg = 25 + 1,1(р — количество вирусных частиц, содержащее определенное количество нуклеокапсидов).
Ф изиологические и ризнаки. Штамм
Pd-1-5 культивируется в гусеницах непар- 10 ного шелкопряда, зараженных путем скармл иван ия искусственного корма, инфицированного вирусом.
Состав искусственной питательной среды (ИПС) для выращивания гусениц непар- 15 ного шелкопряда; агар 10 г; пшеничные отруби 25 г; солодовые ростки 45 г; фасоль
20 г; кормовые дрожжи 15 г; аскорбиновая кислота 3 г; фолиевая кислота 5 мг; метабен
2 г; этиловый спирт 12 мл; вода 400 см . 20
При заражении гусениц 4 возраста 1 г
ИПС опрыскивают (смешивают) 0,2 мл водной суспензии полиэдров с титром 10 .
Инкубационный период заболевания 4—
6 дней. Вирус репродуцируется практиче- 25 ски во всех тканях гусениц, Оптимальная температура для репродукции вируса
24 + 2 С. Рекомендуется хранить штамм при температуре от -12 до -70 С.
В качестве прототип взят штамм вируса 30 ядерного полиздроза непарного шелкопряда S-13-р, который используется при производстве вирусного инсектицида
Вирин-ЭНШ и получен путем адаптации вируса ядерного полиэдроза ивовой волянки к 35 непарному шелкопряду.
Характеристики штамма Pd-1 — 5 и изве-. стного штамма приведены в таблице.
Как видно из таблицы, предлагаемый штамм Pd-1 — 5 s 10 раз активнее, а количе- 40 ство контаминантной микрофлоры в 100 раз ниже по сравнению с этими же показателями известного штамма $-13-р.
П р и и е р. Получение вирусного инсект.ицида. 45
Партию гусениц непарного шелкопряда по достижении ими четвертой возрастной стадии инфицируют вирусом ядерного полиэдроза, штамм Pd-1-5. Корм опрыскивают вирусной суспенэией штамма Pd-1-5 с титром 10 полиэдров в 1 мл. 4ереэ 12 дней т проводят сбор инфицированных гусениц.
Партию вирусосодержащих гусениц измельчают в гомогенизаторе при 1500 об/мин и добавляют равное по весу количество аэросила. В процессе смешивания получают светло-серую порошкообраэную смесь— вирусный инсектицид. Полученный инсектицид (Вирин-НШ) представляет собой воздушно-сухой, сыпучий, легко и равномерно ресуспендируемый в воде, стойкий при хранении в течение 5 лет порошок, содержащий вирусные включения, тканевые фрагменты гусениц и аэросил, который одновременно является наполнителем и прилипателем. 1 r инсектицида содержит
1 х 10 вирусных включений, 1о
Выход вируса иэ одной зараженной и погибшей от данного штамма гусеницы составляет 1-2 млрд. полиэдров, Препарат, наработанный на штамме Рб-1-5, является экологически чистым, обладает избирательным действием только к целевому насекомому — непарному шелкопряду. Вирин-НШ безопасен для теплокровных животных и человека. Для получения сравнительных данных параллельно из другой партии инфицированных гусениц аналогичным образом получают вирусный инсектицид на основе известного штамма $-13-р. Биологическая активность, выраженная в ЛК5о, составляла соответственно 0,004 и 0,02 мг/г корма для гусениц Portheria dispar второго возраста.
Таким образом, штамм Pd-1 — 5 позволяет получить инсектицид, который патогенен для гусениц Porthetrla dispar, причем по своей активности в пять раэ превышает инсектицид, полученный на основе известного штамма S-13-р,
