Штамм viвriо аlвеnsis - продуцент фага

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике. Цель изобретения - получить штамм Vibrio alben- sis-продуцент фага, способствующего улучшению диагностики забопеваний, вызываемых све гящимися вибрионами. Штамм КМ-42 селектирован по признаку биолюминесценции и лизогении. Хранится штамм в музее живых культур Микроб . Штамм V.albensis КМ-42 используют как продуцент бага при прямом Лаготинировании светящихся вибрионов. 2 табл. S

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 Н 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BT0PGH0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

В мазках из агаровых и бульонных культур, окрашенных по Граму, клетки имеют вид грамотрицательных полиморфных слегка изогнутьс; и прямых палочек. Подвижные .(при выращивании в

0,3Х щелочном агаре наблюдается помутнение столбика агара).

Рост на твердых питательных средах. На щелочном агаре (рН 7,6-7,8) вибрионы образуют через 18 ч роста при 37 С колонии правильной формы, диаметром 2 мм с влажной, блестящей поверхностью, полупрозрачные в проходящем свете.

Рост на жидких питательных средах.

На щелочном бульоне — помутнение без образования пленки.

Биохимическая активность штамма.

Штамм разлагает глюкозу в аэробных и паки.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4653512/13 (22) 22. 02.89 (46) 23.03.91. Бюл. Р 11 (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (72) Т.А.Кудрякова (53) 576.858.9 (088.8) (56) Гальцева Г.В. и др. Светящиеся вибрионы и их этиологическая роль при ОКЗ./Тезисы докл.Всерос.съезда микробиологов и эпидемиологов. — М., 1985, с . 18 5-18 7.

Авторское свидетельство СССР № 1405298, кл. С 12 N 1/20, 1"88.

Изобретение относится к медицинской микробиологии, к биотехнологии, в частности к лабораторной диагностиКе Vibrio albensis.

Цель изобретения — штамм Vibrio

albensis-продуцент фага, способствующего улучшению диагностики заболеваний, вызываемых светящимися вибрионами.

Штамм V.albensis KM-42 хранится в коллекции музея живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института "Микроб" под номером 1М-42 (9651) и характеризуется следующими культурально-морфологическими, физиолого-оиохимическими и продуктивными свойствами.

Культурально-морфологические приз„SU„„1636446 А 1

2 (54) ШТАММ VIBRIO ALBENSIS-ПРОДУЦЕНТ

ФАГА (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике. Цель изобретения — получить штамм Vibrio albensis-продуцент фага, способствующего улучшению диагностики заболеваний, вызываемых светящимися вибрионами.

Штамм IQt-42 селектирован по признаку биолюминесценции и лизогении. Хранится штамм в музее живых культур "Микроб". 1 1тамм Ч.albensis И1-42 используют как продуцент бага при прямом фаготинировании светящихся вибрионов.

2 табл.

1636446 анаэробных условиях, сахарозу, маннит с образованием кислоты без газа, расщепляет маннозу (кислота образуется в поплавке) и не разлагает арабинозу, декарбоксилирует лизин, не расщепля-. ет аргинин, не образует сероводород, Штамм устойчив к 50 мкг/мл полимиксина.

Отношение K гомо- и гетерологичным фагам. Штамм не лизируется диагностическими холерными фагами классическим холерным и эьлтор, ХДФ-3 отр., .ХДФ-4 отр., ХДФ-5 отр., ТЭП — 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 — отр. 15

Отношение штамма к видовым диагностическим сывороткам. Штамм не агглютинируется О-холерной сывороткой, типоспецифическими сыворотками Огава, Инаба, RO, не агглютинируется моно- 20 варными сыворотками других (02-056)

0-сероваров. Агглютинируется вибрионной сывороткой V.albensis,ïîëó÷åííoé к штамму 9651

Антигенные свойства штамма. Штамм 25 авирулентный для кроликов-сосунков в дозе 10 кл.

Питательные потребности. Прототроф (на среде Бхаскарана и Роули растет) .

Генетические особенности штамма.

Лизогенный фосфоресцирующий штамм.

Продукт, синтезируемый ытаммом.

Штамм продуцирует фермент люциферазу, обеспечивающей фосфоресценцию колоний

35 и бульонной культуры, продуцент умеренного фага.

Активность (продуктивность) штамма, а также другие производственные показатели. Штамм стабильно образует 40 фосфоресцирующие колонии на агаровой среде, продуцирует умеренный фаг в титре 2-7 10 БОЕ/мл.

Штамм светится в темноте фосфори-, 45 ческим блеском. Выявить свечение мож но после адаптации глаз в течение

10 мин. Свечение выявляется лучше у культуры, выращенной в 1Х-ной пептонной воде, в бульоне Мартена (рН 7,67,8), ярче в пленке, после инкубирования посевов при 37 С в течение о

1 сут, па агаре Мартена, в полужидком агаре. На плотных средах периферия посевов светится ярче, в посеве на секторах наблюдается свечение всего сектора.

Посев микробной взвеси из ампул лиофилизированной культуры проводят на щелочной агар (рН 7,6-7,8). Повышение стабильности фосфоресценции достигается клонированием из одной ярко светящейся в темноте колонии.

Продукцию фага выявляют при посеве с индикаторной культурой Vibrio albensis 1193 С, депонированной в музее микроорганизмов института "Микроб" под номером КМ-41 (1193 С). На газоне штамма КМ-41 (i193 Ñ) фаг 9651 формирует негативные колонии круглой формы 1-2 мм в диаметре с неровным краем, полупрозрачным центром.

Фаг высоко специфичен в отношении

V.albensis. Характеристика специфичности и активности фага. приведена в табл.

Пример 1. Для обнаружения спонтанной фагопродукции готовят индикаторную культуру. 0,5 мл 4-часовой бульонной культуры V.albensis 1193 С, выращенной со стрептомицином

100 мкг/мл при 37 С, вносят в 5 мл

0,77-ного агара и засевают двухслойным методом на пластинку 1,57 агара, содержащего 100 мкг/мл стрептомицина»

По одной капле суточной бульонной культуры U.albensis 9651 и культуры, прогретой при 56 С в течение 40 мин, наносят в виде дорожки на газон

1193 С. Учет проводят после инкубироо вания посевов при 37 С в течение 24о

48 ч.

Результаты показывают, что штамм

9651 при испытании суточной бульонной культуры без прогревания и после прогревания продуцирует фаг. Фаг 9651 выявляется в виде единичных негативных колоний 1-1,5 мм или слабого просветления газона индикаторной культуры в месте нанесения фаголизата.

Пример 2. Для проверки специфичности фага 9651 проводят концентрирование фагочастиц путем пяти пассажей фага с индикатором V.albensis 1193 на агаре и в бульоне Мартена (рН 7,6-7,8).

В качестве испытуемых используют

100 штаммов V.cholerae 01, 150 штаммов V.choleraе 01 группы, 13 » Aегоmonas, 5 - Plesimonas, 36 — Entегоbacteriaceae, 12 — Covamonas.

Спектр действия и специфичность фага 9651 V.albensis приведены втабл. 2.

Из табл. 2 видно, что фаг 9651 специфически активен в отношении штаммов

5 16

V.albensis и не лизирует представителей других родов и видов. !!тамм может быть использован как продуцент фага при прямом фаготипировании светящихся вибрионов. Маркеры фосфоресценции и носительство профага является селективным признаком в генетических исследованиях.

Штамм Vibrio albensis КМ-42 (9651) — гродуцент фага, Таблица 1

Фагопродук- !1изис фагом ц;rB 965 !

Свечение штамма! Ъгамм

7.albensis

Таблица 2

Р! sio- Ente- ComeПокаэатели Ч,cho-! crae

choleV,cho- V.cho1 erae le га8

eltor с 02 по

057

V.аl- V.para- АегоЪ moAa8

V, cholerae

042

ro0acteri"

monaa шопа 8

eAsxs!haemolyticus асеае серовара гае сероваря

Количество изученных штаммов

Зб 12

1Э 5

50 50 100 19 10 2

Из ннх лизнруется фагом 9651

Л р и м е ч а н н,е. Отсутствие лизиса фагом.

Составитель О.Жакетов

Техред Л.Олийнык Корректор М.!Чароши

Редактор Н.Яцола

Заказ 797 Тираж 360 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР. 1.13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r,Óæãoðoä, ул. Гагарина, 101

1!93

9494

2852

2853

2592

2854

9651

498

507

66

1265

36446 6

Применение фага, продуцируемого

V.albensis КМ-42 (9651), в идентификации V.albensis, повысит эффективность лабораторной диагностики.

Формула изобретения